肿瘤细胞之间的交流

一个肿瘤细胞的产生并不意味着肿瘤发生.多个肿瘤细胞之间的对话使肿瘤成为一个异常的组织或器官.细胞接触、挤出、纠缠、迁移和变异维持着肿瘤细胞间的有序组织和肿瘤的持续生长.阻断肿瘤细胞之间的对话可能成为新的肿瘤治疗策略.     

免疫细胞在移植物抗肿瘤效应中的作用

近年来异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)由于存在移植物抗肿瘤效应(GVT)而备受关注,尽管GVT的效应细胞和分子机制尚未明了,但一些临床和动物实验资料表明,不同亚群的T细胞、异源反应性自然杀伤(NK)细胞在GVT中发挥了重要作用。我们就免疫细胞在移植物抗肿瘤效应(GVT)中的作用作一综述。1956年,Barnes等在动物实验中发现,异基因骨髓干细胞移植(allo-BMT)具有抗白血病效应,将其称为移植物抗白血病作用(GVL)。20世纪80年代,人们在接受allo-BMT的淋巴瘤患者中也发现了类似作用,称之为移植物抗淋巴瘤作用。目前GVL作用已从过去主要…     

Ki-67蛋白在妊娠滋养细胞疾病中表达的意义

目的：探讨Ki-67蛋白与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法：采用免疫组织化学的方法,观察正常早期妊娠绒毛和妊娠滋养细胞疾病组织中Ki-67的表达。结果：正常绒毛和妊娠滋养细胞疾病相邻各亚组间滋养细胞的总Ki-67标记指数无统计学差异。但是排除了各组间滋养细胞构成比的影响,仅统计细胞滋养细胞的Ki-67标记指数,可发现从正常绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎到绒毛膜癌,随着疾病恶性程度的增加,细胞滋养细胞的Ki-67标记指数呈上升趋势,各组间差异有显著性（P〈0.05）。结论：细胞滋养细胞的Ki-67标记指数可以辅助预测滋养细胞疾病的发展及预后,是一个比总Ki-67标记指数更可靠的指标。     

原发性肝癌免疫治疗现状及展望

免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗手段,在肝癌的综合治疗方案中,免疫治疗在提高肿瘤治愈率,改善患者生活质量,延长生存期方面起重要作用,显示良好应用前景。文章对肝癌的免疫治疗现状及发展作一论述。     

DC活化淋巴细胞对自体乳腺癌细胞的杀伤作用

 目的探讨负载自体抗原DC诱导的CTLs对自体乳腺癌细胞的杀伤作用。方法以负载自体癌细胞抗原的DCs体外诱导CTLs,用ELISA法检测IFN-γ和IL-12的表达水平,用LDH法检测CTL对自体癌细胞的杀伤作用。结果负载自体抗原DC组IFN-γ和IL-12的浓度高于未致敏DC组、抗原组及单核细胞对照组(P<0.05),且负载抗原DC组所刺激的CTLs的杀伤作用也强于未致敏DC组、抗原组及单核细胞组(P<0.01)及对照的MCF-7组和HT-29组(P<0.01)。结论肿瘤裂解物致敏DC可持续刺激特异性CTLs从而可在体外杀伤乳腺癌患者的自体肿瘤细胞,说明肿瘤抗原致敏的DC疫苗对于治疗残留的和(或)对化疗耐药乳腺癌可能是适合的,因而有可能成为标准的补救措施。     

CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗广泛期小细胞肺癌一例

肺癌是我国目前最常见的恶性肿瘤,是男性最常发病的恶性肿瘤,死亡率位居我国恶性肿瘤死亡率的首位 [1].小细胞肺癌(small-cell lung cancer,SCLC)占肺癌总数的13％～15％,是支气管上皮发生的未分化、伴有神经内分泌分化的1种与预后不良相关的侵袭性恶性肿瘤 [2].作为一种高侵袭性的神经内分泌肿瘤...     

CIK、DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用比较

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P<0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

骨髓微环境中成骨细胞与白血病细胞相互作用的实验研究

目的 研究骨髓微环境中成骨细胞对白血病细胞存活、凋亡以及白血病细胞对成骨细胞细胞因子表达的影响及机制.方法 将小鼠急性髓系白血病AML1-ETO9a-Rac1细胞与小鼠颅骨成骨细胞体外共培养,流式细胞技术检测白血病细胞的存活比例;Annexin Ⅴ/PI标记流式细胞术检测白血病细胞凋亡,Western blot法检测白血病细胞内的凋亡相关信号分子的活化水平;实时定量反转录PCR检测成骨细胞内细胞因子TPO、N-cadherin、OPN、Ang1的转录水平.结果 与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的GFP阳性率明显高于单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞.与成骨细胞共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞凋亡率显著低于单独培养4d的AML1-ETO9a-Rac1细胞,且共培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞的PARP活化水平比单独培养的AML1-ETO9a-Rac1细胞明显偏低.AML1-ETO9a-Rac1白血病小鼠的原代成骨细胞的N-cadherin转录水平显著升高,Ang1、OPN两类因子的转录水平则显著下降,TPO的转录水平较正常小鼠的升高.结论 成骨细胞能够支持白血病细胞的存活,抑制白血病细胞的凋亡.同时,白血病细胞也能反作用于成骨细胞,使其产生的微环境相关因子表达发生改变.     

MGBA负载脐带血DC诱导特异性CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的：观察乳腺珠蛋白（mammaglobin A, MGBA）负载脐带血来源树突状细胞（dendritic cell, DC）诱导产生的细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）对乳腺癌细胞的体外杀伤效果。方法：采集健康剖宫产女性志愿者的脐带血,分离脐带血单个核细胞并诱导DC生成,用MGBA致敏DC与自体淋巴细胞共培养诱导CTL。采用流式细胞术测定DC的表型(CD83、CD86、HLADR)变化,ELISA法测定IL-10、IL-12分泌水平,CCK-8法测定CTL对乳腺癌细胞的杀伤活性。结果：成功培养出形态典型、功能成熟的DC,MGBA负载DC诱导的MGBA特异性CTL对乳腺癌细胞MDA-MB-415 产生显著的杀伤效果（P<0.05）;加入HLA-I 抗体可显著减弱杀伤效果,加入HLA-II 抗体细胞毒活性无显著变化,加入HLA-I 抗体或HLA-II 抗体对正常乳腺细胞的杀伤性均无影响。结论：MGBA 能明显加强脐带血DC 诱导的CTL 对乳腺癌细胞的杀伤活性,该杀伤活性具有MHC限制性。     

小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞对特异性CTL的体内外诱 …

目的 探讨白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）诱导小鼠红白血病细胞产生的树突状细胞,对白血病特异性ＣＴＬ细胞的诱导作用,及体内免疫后对抗肿瘤免疫应答的诱导效果。方法：采用４小时＾５１Ｃｒ释放法,检测ＣＴＬ杀伤活性;观察小鼠红白细胞病细胞来源的树突状细胞体内免疫治疗后对肿瘤的抑制作用,采用了ＨＥ染色和电镜等技术,分析肿瘤组织的病理学变化。结果：ＩＬ－１２诱导ＦＢＬ－３细胞产生的ＤＣ,在体外可诱导出ＦＢＬ－     

干扰RNA对HepG2肝癌细胞内源性c-myc表达的抑制作用

目的 研究干扰RNA(RNAi)对HepG2细胞的c-myc基因表达的干扰效应。方法 建立装载靶向c-mvc基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体。用脂质体法将此表达载体转染HepG2细胞株,以转染空载细胞作为对照。采用定量PCR和Western blot检测c-myc基因的表达。用流式细胞仪及荧光显微镜检测AnexinV标记的凋亡细胞。结果 转染siRNA的表达载体可以抑制内源c-myc基因在转录和转译上的表达,抑制率达67％。c-myc基因的表达抑制与HepG2细胞的凋亡相关联。结论 转染siRNA的表达载体可明显抑制肝癌细胞株HepG2 c-myc基因的表达,并伴有细胞的凋亡。     

miR-26a对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响及初步机制的研究

目的:探讨miR-26a对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响及可能机制。方法:将miR-26a表达质粒及对照质粒分别转染HepG2细胞,qRT-PCR检测转染后miR-26a的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2细胞迁移和侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后AEG-1 mRNA和蛋白的表达。结果:转染miR-26a表达质粒后,HepG2细胞miR-26a表达明显增高(P＜0．01),迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05),AEG-1 mRNA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.05)。结论:过表达miR-26a,可抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制AEG-1表达相关。     

miR-18a对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的 探讨miR-18a对肝癌患者血清肝癌细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制.方法 细胞经培养、传代、冻存、复苏后采用脂质体介导转染法进行转染.肝癌细胞株HepG2.2.15及HepG2分别转染miR-18a inhibitor和miR-18a inhibitor阴性对照24 h后,应用transwell侵袭和迁移实验测定肝癌细胞的侵袭和迁移能力.肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15分别转染miR-18a inhibitor、miR-1 8a inhibitor阴性对照、共转染miR-18ainhibitor和Dicer siRNA以及共转染miR-18a inhibitor和Dicer siRNA阴性对照48 h后,应用Western blot法比较各组Dicer1蛋白表达的差异,应用transwell侵袭和迁移实验比较各组细胞侵袭以及迁移能力的差异.结果 转染miR-18a inhibitor 后,HepG2和HepG2.2.15细胞的侵袭和迁移能力均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).转染miR-18a inhibitor组Dicer1蛋白表达水平较转染miR-18a inhibitor阴性对照组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).共转染Dicer siRNA+ miR-18a inhibitor组Dicerl蛋白表达水平较Dicer siRNA阴性对照+miR-18a inhibitor组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞的侵袭和迁移能力均增强,差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).结论 miR-18a 促进肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与Dicer1蛋白表达抑制有关.     

siRNA 干扰胰岛素样生长因子1 受体表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列,转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果,采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞,以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化,以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型,siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01）,同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为,IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。     

siAKAP12对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨常氧和乏氧环境下下调AKAP12表达对人宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响,并探索其可能作用机制。方法:常氧和乏氧环境下体外培养人宫颈癌CaSki细胞并转染siRNA阴性片段、siAKAP12特异性片段,应用CCK-8和流式细胞术检测细胞的增殖活性、凋亡率,应用Real-time PCR、Western blot法检测各组细胞中AKAP12、HIF-1α、CAⅨ mRNA和蛋白的表达。结果:在常氧及乏氧状态下,siAKAP12后,CaSki 细胞增殖能力均明显增强(P＜0.05),但乏氧下细胞增殖能力低于常氧状态(P＜0.05)。乏氧相对常氧,CaSki细胞凋亡增加(P＜0.01),siAKAP12后,CaSki细胞凋亡率却明显降低(P＜0.05);AKAP12相同处理情况下,HIF-1α、CAⅨmRNA表达水平均呈上升趋势(P＜0.05);siAKAP12后AKAP12蛋白水平显著下调,而HIF-1α、CAⅨ蛋白均呈上调表达,但两者乏氧下低于常氧表达水平(P＜0.05)。结论:常氧和乏氧环境下,抑制AKAP12基因可上调CaSki细胞增殖能力,并降低其凋亡,其作用可能是通过调控 HIF-1α-CAⅨ信号通路实现的。     

siRNA干扰STAT3基因对食管癌Eca-109细胞生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况.结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确.RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制卒为35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞凋亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡.     

FEN1过表达对肝细胞癌细胞生物学行为及患者预后的作用

目的 探讨FEN1在肝细胞癌中的表达及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法 应用RTqPCR及免疫组织化学方法检测FEN1基因在52例肝细胞癌组织及相应癌旁组织中的表达。FEN1基因特异性siRNA转染肝癌细胞株HepG2并用Western blot检测转染效率。用MTT及流式细胞技术检测干扰FEN1后HepG2增殖及凋亡情况。Transwell实验检测HepG2迁移、侵袭能力改变。结果 RT-qPCR结果显示与癌旁正常组织相比较,FEN1高表达于肝细胞癌组织（P<0.01）。免疫组织化学与临床资料统计分析进一步证实FEN1的高表达与肿瘤分化程度（P=0.017）、肝内转移（P=0.046）、临床TNM分期（P=0.020）相关,而与患者性别、年龄、术前AFP值及肿瘤直径无相关性（P>0.05）。通过siRNA干扰肝癌细胞株HepG2中FEN1基因表达,MTT及流式细胞术检测表明干扰FEN1表达后肝癌细胞株HepG2增殖受到明显抑制（P<0.05）,凋亡率明显增加（P<0.05）。Transwell实验发现干扰FEN1后可明显抑制HepG2迁移、侵袭能力（P<0.05）。结论 FEN1在肝细胞癌组织中高表达,高FEN1表达提示肿瘤分化程度低,易转移及预后差,干扰FEN1后抑制肝癌细胞增殖,诱导其凋亡,并降低肝癌细胞体外迁移和侵袭能力。FEN1基因可成为肝细胞癌诊断及治疗的一个新生物靶点。     

HIF-1α／IL-8／NF-κB轴介导缺氧诱导肝癌细胞迁移、侵袭的实验研究

目的 探讨HIF-1α在缺氧条件下诱导肝癌细胞迁移和侵袭作用及可能的分子机制。方法 缺氧和正常培养条件下培养人正常肝细胞系WRL68、人肝癌细胞系HepG2和SMMC7721,实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测HIF-1α mRNA和蛋白的表达;HepG2细胞分别转染NC无义核酸序列（NC组）、siHIF-1α（HIF-1α组）和siIL-8（IL-8组）,Western blotting检测HIF-1α、IL-8和NF-κB蛋白表达;缺氧条件下干扰HIF-1α和IL-8并检测HepG2的迁移和侵袭能力的改变。结果 缺氧条件下,HepG2和SMMC7721细胞系中的HIF-1α mRNA和蛋白水平显著高于人正常肝细胞系。与空白对照组的0.98±0.104和NC组的0.92±0.032比较,HIF-1α组HIF-1α蛋白表达量显著下降为0.39±0.077,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺氧条件下HIF-1α组IL-8蛋白表达量为0.31±0.043,显著低于空白对照组的0.96±0.114和NC组的0.90±0.081,差异有统计学意义（P＜0.05）。缺氧条件下NC组HepG2迁移、侵袭细胞数分别为91.2±8.2和121.1±6.7,显著高于HIF-1α组的36.3±5.9和47.7±3.3,差异有统计学意义（P＜0.05）;亦显著高于IL-8组的49.4±5.6和39.6±5.1,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 HIF-1α通过调控IL-8表达促进缺氧诱导的肝癌细胞迁移和侵袭。     

缺氧对血管内皮生长因子启动子-胸苷激酶系统杀伤肝癌细胞系的增强作用

目的：探讨缺氧对腺病毒介导的血管内皮生长因子启动子－胸苷激酶系统（AdVEGF-tk)对肝癌细胞系HepG2选择性杀伤活性的增强作用。方法：采用AdEasy system构建重组腺病毒载体AdVEGF-tk和AdVEGF-GFP,在293细胞中包装,扩增后,分别感染L02（正常肝细胞系）和HepG2,A VEGF-GFP感染细胞经正常培养24h后,在荧光显微镜下观察其荧光蛋白表达情况;AdVEGF-tk感染细胞在缺氧或不缺氧条件下培养,并给予不同浓度的丙氧鸟苷（GCV）处理,用MTT法检测感染细胞的增殖情况,结果：AdVEGF-GFP感染的L02细胞仅见稀散的荧光,而AdVEGF-GFP感染的HepG2细胞则出现大量荧光,感染AdVEGF-tk后,当感染指数（MOI）为100目GCV浓度为10ug/ml时,L02细胞在不缺氧条件下对GCV几乎不敏感,但在缺氧条件下,70％以上的细胞被杀死,而HepG2细胞即便在不缺氧培养条件下也有60％以上的细胞被杀死,缺氧则使80％以上细胞被杀死,结论：缺氧可加强腺病毒介导的AdVEGF-tk系统对体外培养肝癌细胞的选择性杀伤作用。     

层黏连蛋白受体参与缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的:研究缺氧对胃癌细胞对于化疗药物敏感性的影响以及层黏连蛋白受体在缺氧诱导的胃癌MDR中的作用和分子机制。方法:MTT比色法、Annexin V/PI染色法和阿霉素的蓄积和潴留实验检测胃癌细胞在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;Western blot和半定量RT-PCR检测缺氧条件下胃癌细胞中67Kda层黏连蛋白受体(67Kda laminin receptor,67LR)的表达;Western blot、半定量RT-PCR方法检测缺氧条件下胃癌细胞系SGC7901中67LR的表达和活性;利用siRNA干涉67LR的表达,MTT比色法、AnnexinV/PI染色法检测缺氧条件下调下胃癌细胞系67LR的表达对化疗药物敏感性的影响。结果:缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,以及化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调67LR的表达和转录活性;67LR siRNA能够抑制LR的表达;抑制67LR的表达能够显著逆转缺氧诱导的胃癌的MDR表型。结论:缺氧能够增加胃癌细胞对于化疗药物的抵抗,通过上调67LR表达,加剧了缺氧诱导的胃癌多药耐药表型,抑制67LR的表达能够逆转缺氧诱导的胃癌多药耐药的发生。