CDC25B在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨CDC25B在胰腺癌中的表达与胰腺癌发生、发展的关系。方法采用卵白素-生物素-辣根过氧化酶复合物（ABC）法检测88例胰腺癌组织，15例胰腺良性病变组织中CDC25B的表达情况，并分析CDC25B的表达与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果CDC25B在胰腺癌组织和胰腺良性病变组织中的阳性表达率分别为56．9％（50／88）和13．3％（2／15），两者差异有统计学意义（P〈0．01）。CDC25B的阳性表达与肿块的大小、远处转移及临床分期显著相关（P〈0．05或〈0．01），与患者性别、年龄、淋巴结转移及癌细胞分化程度无关（P〉0．05）。结论胰腺癌组织中CDC25B存在异常高表达，CDC25B的高表达可能与胰腺癌的发生、发展及转移有关。     

CDC25B基因在肝细胞肝癌的表达

目的探讨CDC25B基因在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达，以探讨其在HCC发生和发展中的作用。方法联合应用激光显微切割和实时定量PCR技术检测24例正常肝脏组织和24例HCC组织中CDC25B基因的表达，PCR产物的定量方法采用比较Ct法；应用Western blot检测其蛋白的表达水平；应用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PC—NA）的表达。结果在显微镜下用激光显微切割机，将单个肝细胞成功切下，提取RNA后，逆转录成cDNA，实时定量PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常肝脏组织中为0．0006350±0．00021，HCC组织中为0．001988±0．00065，上调约3倍（P〈0．01）。CDC25B mRNA的表达与PCNA明显相关（r=0．45，P〈0．05）。HCC组织中CDC25B蛋白也过度表达，正常肝脏组织CDC25B蛋白表达为1．02±0．43，HCC组织为6．01±1．66，上调约6倍（P〈0．01）。结论CDC25B在HCC组织中表达明显上调，该基因的高表达与细胞周期调节机制的关系以及在HCC细胞的恶性转化中的作用还有待进一步探讨。     

胰腺癌相关基因寡核苷酸芯片的制备和初步应用

目的探讨胰腺癌相关基因寡核苷酸芯片的构建,初步验证其在检测胰腺癌基因表达谱方面的应用。方法有目的地筛选胰腺癌相关基因,采用合成后点样的方法,制成寡核苷酸基因芯片。TRIzol法抽提组织总RNA,在cDNA第一链合成过程中,通过反转录酶将CyDye标记核苷酸直接掺入到eDNA中制备荧光探针,其中用Cy3-dCTP标记胰腺癌组织,cy5-dCTP标记正常胰腺组织。将荧光标记探针与芯片杂交16—18h。用Agilent扫描仪进行扫描,Imagene3．0软件进行图像分析,计算两种荧光Cy3与cy5信号强度的比值。挑选差异基因CDC25B和TUSC3进行荧光定量PCR（Sybrgreen方法）验证,PCR产物的定量方法采用比较Ct法。结果芯片杂交扫描图像信号清晰,具有较低的整体背景和较高的信噪比,各阳性质控点信号均匀一致,阴性质控点和空白点信号低。与正常组织相比,胰腺癌组织中差异表达基因24条,占全部基因的25．5％,其中上调基因17条（18．1％）,下调基因7条（7．4％）。荧光定量PCR验证,CDC25B和TUSC3基因在胰腺癌中的表达趋势与芯片实验的结果一致。结论本研究制备的胰腺癌相关基因芯片可同时、并行检测多种胰腺癌相关基因的表达改变,具有一定的特异性和敏感性。胰腺癌组织与正常胰腺组织相比,基因表达谱具有明显差异。     

甲基化CpG结合域蛋白1在胰腺癌组织中的表达和意义

目的：检测甲基化CpG结合域蛋白I（MBD1）蛋白在胰腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。方法：应用S-P免疫组织化学法检测38例胰腺癌、17例胰腺癌旁组织、8例胰腺良性肿瘤、3例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织中MBD1蛋白的表达。结果：MBD1在胰腺癌组织、正常胰腺组织、胰腺良性肿瘤、胰腺癌旁组织中的表达阳性率分别是76．32％（29/38）、16．67％（1／6）、25．0％（2／8）、29．41％（5／17），3例慢性胰腺炎标本中未见表达；胰腺癌阳性表达率明显高于正常胰腺、慢性炎症、良性肿瘤和癌旁对照组织（P〈0．05）。MBD1表达水平的高低与病人的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和TNM分期无显著性差异（P〉0．05）；而与淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者胰腺癌组织MBD1的表达阳性率为92．31％（24／26），高于无淋巴结转移者的41．67％（5／12）（P〈0．01）。结论：胰腺癌中MBD1呈高水平表达，并与胰腺癌的高转移侵袭活性有关，其机制可能与MBD1介导抑制多个甲基化相关抑癌基因的表达有关。MBD1的转录调控机制有待进一步研究。     

TUSC3基因在胰腺癌组织中的表达

目的研究TUSC3基因在正常胰腺和胰腺癌组织中的表达水平。方法利用寡核苷酸基因芯片技术和实时定量PCR技术检测20例胰腺癌组织和6例正常胰腺组织中TUSC3基因的表达。芯片杂交结果进行Ratio值分析,实时定量PCR进一步验证杂交结果,PCR产物的定量方法采用比较Ct法。结果芯片扫描图像信号清晰,具有较低的整体背景和较高的信噪比。与正常胰腺组织相比,TUSC3基因在胰腺癌组织中表达下调,平均Ratio值为0．297±0．38。荧光定量PCR结果：TUSC3基因平均模板量在正常胰腺组织中为0．0387493±0．00965,胰腺癌组织中为0．0206028±0．00401;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TUSC3基因表达下调1．88倍（P〈0．05）。结论TUSC3基因在胰腺癌组织中表达水平明显下调,其可能机制与该基因启动子区过甲基化有关,TUSC3基因在胰腺癌发生发展中的生物学效应值得进一步研究。     

人粘连蛋白基因在胰腺癌中的表达

目的：探讨人粘连蛋白（FN）基因在胰腺癌发生和转移中的作用。方法：应用博道4096型cDNA基因芯片和原位杂交技术检测18例胰腺癌标本、8例慢性胰腺炎组织FN基因表达。结果：FN基因在18例胰腺癌基因芯片检测中表达显著增高（Cy5/Cy3＞2．0，P＜0．01），伴有区域淋巴结转移时增高更加明显；在慢性胰腺炎中的表达与正常组织比较差异无显著性（Cy5/Cy3＜2．0，P＞0．05），与原位杂交结果相同。结论：基因芯片技术能够为胰腺癌的相关基因分析提供特异和可靠的数据；人胰腺组织中FN基因表达升高可能与胰腺癌的发生和转移有关。     

P物质及其受体在慢性胰腺炎组织的表达和临床意义

目的 了解P物质及其受体NK－1R在正常胰腺和慢性胰腺炎中的表达，探讨它们与慢性胰腺炎时疼痛发生的关系。方法 25个慢性胰腺炎标本取自慢性胰腺炎手术，男性18例，女性7例，正常胰腺组织取自20个器官捐献者，男性11例，女性9例。应用实时定量逆转录整合酶链反应（RT－PCR）技术，检测正常胰腺和慢性胰腺炎组织中P物质和NK－1R的mRNA水平，应用Western blot技术检测NK－1R的蛋白水平，应用免疫组织化学方法进行NK－1R的组织学定位。将P物质及其受体NK－1R mRNA水平与疼痛的程度，发作频率和病程进行分析，寻找其中的相关性。结果 与正常胰腺相比，慢性胰腺炎组织中P物质和NK－1R mRNA和蛋白都过度表达，NK－1RmRNA水平与疼痛的程度，发作频率和病程明显相关。免疫组化检查显示，NK－1R的表达主要位于胰腺腺泡，胰腺导管，神经纤维和炎性细胞。结论 慢性胰腺炎组织中P物质和NK－1R的表达水平都明显上调，扰乱了神经激肽的作用环节，NK－1R的过度表达与疼痛发生有关。     

软骨寡聚基质蛋白在慢性胰腺炎损伤中退变腺泡细胞内的表达

目的 研究正常胰腺、慢性胰腺炎与胰腺癌组织中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)mRNA和蛋白表达水平的差异,揭示COMP在慢性胰腺炎样损伤中的意义。方法 采用Northern印迹法、Western印迹法、原位杂交法与免疫组化方法对14例慢性胰腺炎、14例胰腺癌及15例正常胰腺组织进行分析。结果 在慢性胰腺炎组织中和胰腺癌组织中类似慢性胰腺炎损伤的退变腺泡细胞胞浆内,存在高水平的COMP mRNA信号与免疫反应;而在胰腺癌细胞、正常胰腺组织的导管细胞与胰岛细胞的胞浆内,COMP mRNA信号与免疫反应微弱或缺如。结论 COMP在慢性胰腺炎及胰腺癌中类似慢性胰腺炎损伤的退变腺泡细胞内高表达,可能与慢性胰腺炎中腺泡细胞功能异常有关。     

SD大鼠胰腺癌模型及其化学趋化因子mRNA表达与MC计数的关系研究

目的将二甲基苯并蒽（DMBA）置入SD大鼠胰腺内建立胰腺癌模型,在此基础上研究胰腺导管癌和非癌胰腺组织IL-8,MCP-1,MIP-1α mRNA的表达及其与肥大细胞（mast cell,MC）计数的关系。方法SD大鼠90只,随机分成3组,即DMBA组、TSA干预组和对照组,喂养3～5月处死,观察胰腺癌发生情况;常规石蜡切片行胰腺癌和非癌胰腺组织3种mRNA原位杂交染色及MC免疫组化染色。结果①模型组（A组）3～5月癌症发生率为48．7％（18／37）。B组3～5月癌症发生率为33．3％（12／36）。A组肿块直径明显大于B组（P=0．022）,A组和B组纤维肉瘤均发生胰腺外转移。部分A和B组非癌胰腺组织可看到中～重度导管上皮不典型增生。胰腺外主要脏器未见肿瘤发生及其他病变。②除B组胰腺导管癌MCP-1 mRNA阳性率与非癌组织无统计学差异外,A组和B组胰腺导管癌3种mRNA表达阳性率及其评分明显高于非癌组织（P〈0．01）,C组均呈阴性表达;A组胰腺导管癌3种mRNA表达阳性率及其评分均明显高于B组（P〈0．05）。③A组和B组胰腺导管癌MC计数明显高于非癌组织和C组（P〈0．05）;A组胰腺导管癌MC计数明显高于B组（P〈0．05）;A和B组中3～4月组胰腺导管癌MC计数明显低于5月组（P〈0．01）。④3种化学趋化因子mRNA阳性胰腺癌MC计数明显高于阴性者（P〈0．05）,其评分值与MC计数呈密切正相关（rIL-8=0．42,rMCP-1=0．48,rMIP-1α=0．55,P值均〈0．05）。结论较大剂量DMBA置入胰实质内可在短期获得较高的SD大鼠胰腺癌发生率,TSA能抑制胰腺癌发生和生长,其作用可能与抑制化学趋化因子的表达和MC浸润有关;3种化学趋化因子和MC可能与胰腺癌发生发展有较密切关系。     

CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达

近年来发现CDC25B基因是一种潜在的癌基因，在许多肿瘤的发生和发展中起到重要作用，但在胰腺癌中的表达和作用机制尚不明确。本研究旨在检测胰腺癌和正常胰腺组织中CDC25B基因的表达情况，探讨CDC25B基因在胰腺癌发病机制中的作用。