Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.     

一种提高冷冻切片染色效率的苏木精加热组件

临床病理工作中,冷冻切片质量的优劣直接影响到术中病理诊断的快速性和准确性。冷冻切片制片速度与质量受多种因素的影响,其中苏木精染色是非常关键的环节。细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA带负电荷,呈酸性,很容易与苏木精碱性染料结合而被染色,苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色［1］,易与被伊红染成红色的细胞质区分。我们设计了一种病理冷冻切片的染色加热组件（专利证书号：ZL 201320589148.4）,对150例冷冻切片进行染色,比较该组件处理下与其他4种苏木精染色条件下,HE染色的速度与质量。     

环保型组织样本制备液在不同脂肪细胞检测中的应用价值

背景：当前使用的传统试剂(甲醛溶液固定、乙醇脱水、二甲苯透明脱蜡)对组织前期处理制作的常规石蜡切片质量较低,已成为制约脂肪细胞性肿瘤病理诊断的瓶颈。而且,传统试剂容易对实验室环境造成污染,对实验室人员造成多种健康危害。目的：探讨环保型组织样本制备液在脂肪细胞肿瘤苏木精-伊红染色及非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤MDM2基因检测中的应用价值。方法：选取2016年2月至2022年7月期间592例脂肪细胞肿瘤标本为研究对象,同一标本对半切开,按照所使用的标本前期处理试剂的不同,随机分为2组：传统组和环保组。传统组使用传统试剂甲醛溶液固定、乙醇脱水、二甲苯透明脱蜡制作常规石蜡切片592张;环保组使用环保型组织样本制备液制作切片592张。依据切片苏木精-伊红染色质量的不同等级,比较两组切片的苏木精-伊红染色优良率;进一步对其中病理确诊为非典型性脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤的33例标本再次切片后,使用荧光原位杂交法检测MDM2基因,比较两组切片MDM2基因扩增率的差异。结果与结论：(1)相对于传统组,环保组的脂肪细胞肿瘤的组织切片更舒展、更完整,细胞无折叠,染色更清晰,红蓝对比度更佳,细胞结构...     

六种固定液对冰冻切片苏木精-伊红染色效果的比较

<正>让冰冻切片的苏木精-伊红(HE)染色效果等同于石蜡切片,固定液的选择是最关键。目前很多相关文献报道说法不一。我们选用组织学常用和易配制的6种固定液进行苏木精-伊红(HE)染色效果的比较观察。     

不同染色方法对人脑垂体细胞显示效果的比较

目的改进人脑垂体的染色方法,更清晰地显示腺垂体内各种细胞的形态特点,提高实验课教学质量。方法应用苏木精-伊红染色法和改良染色液染色法显示脑垂体的组织结构。结果用传统的苏木精-伊红染色法不易区分各种细胞,而采用改良染色液显示脑垂体组织结构效果好,既能观察脑垂体的结构,又能区分嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。结论改良染色液染色法能够很好地显示脑垂体组织结构,使3种细胞的形态特点清晰可辨,可为实验教学提供优质的切片标本。     

基于硬组织切片染色的颈椎钩椎关节的解剖研究

目的利用硬组织切片技术、苏木精—伊红染色及甲苯胺蓝染色方法对成人钩椎关节的组织形态及各层结构进行观察,并对钩椎关节的解剖结构进行探讨。方法选取成年男性全颈椎标本,截取C₂~C₆钩椎关节进行福尔马林固定,脱水,于光固化机中包埋聚合。利用硬组织切片机对标本进行切片处理,磨片机对标本进行磨片处理,并使用苏木精—伊红及甲苯胺蓝进行染色。观察染色后钩椎关节组织形态及结构特点。结果苏木精—伊红染色的钩椎关节骨切片可清晰见到椎体及椎间盘被钙盐沉积分开,上下椎体切面可见粉染骨小梁,骨小梁间可见骨髓组织。甲苯胺蓝染色的钩椎关节骨切片可见成骨细胞和破骨细胞的各种骨组织形态,椎体切面可见体积、宽度、分布均正常的蓝色骨小梁。结论硬组织切片技术可以较完整保留钩椎关节的固有组织形态,经苏木精—伊红染色、甲苯胺蓝染色均可清晰观察到钩椎关节各层结构及形态特征。     

成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用ThermoShandonExcelsior组织处理机、ThermoShandonHistocentre2型石蜡包埋机、ThermoShandonFinesse325型切片机、ThermoShandonVaristainGemini全自动染片机和ThermoShandonConsul全自动封片机制作成年斑马鱼石蜡连续切片并进行HE染色。结果利用上述方法获得清晰的成年斑马鱼石蜡连续HE染色切片。结论斑马鱼石蜡连续切片的制作和HE染色与哺乳类动物组织切片和染色在操作和某些工作参数上有所不同。     

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

骨髓组织活检标本来之不易 ,在制片过程中若处理不当 ,会给诊断造成极大的困难。如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要。笔者通过 2年的反复实践 ,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称“新法”) ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　标本　中南大学湘雅医院骨髓穿刺的活检组织 4 0例。1.2　试剂　脱钙液 :2 %硝酸 ,即浓硝酸 2ml加 98ml自来水 ;固定液 :10 %福尔马林液 ;染色液 :Gill苏木精 ,沉淀酸化伊红Y乙醇液。1.3　方法　穿刺活检组织入 10 %福尔马林液中固定 30min ;入 2 %硝酸脱钙液 ,室温下脱钙。在…     

输卵管妊娠组织制片的技巧

目的通过此制片法解决了输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,可制作出输卵管妊娠组织的优良切片,便于临床工作和科研及基础医学教学和科研。方法最好选择快速固定液;脱水时也不用常规乙醇脱水,改用丙酮脱水;浸蜡温度应控制在56℃为宜,浸蜡时间控制在1h左右;血块组织切片厚度最好为3μm;苏木精-伊红(HE)染色时,苏木素浸染时间长些,伊红浸染时间短些。结果用此法制作输卵管妊娠组织切片,不是那么脆和硬,也不易碎,能够顺利切出连续蜡带;染色时也不易脱片,染色对比度也好。结论在输卵管妊娠组织制片过程中,只要解决输卵管妊娠血块组织制片本身的问题,就能制作出优良的切片。     

三种类型的苏木精在HE染色中的效果比较

自1863年Waldeyer倡导使用苏木精染色细胞核,伊红染色细胞质,使不同组织和细胞成分呈现不同颜色和产生不同的折射率,HE染色一直被广泛应用于病理形态学诊断、教学和研究。在实际工作中使用的苏木精通常为自然氧化或人工氧化两种,将自然氧化和人工氧化的苏木精以1∶1比例混合成混合苏木精,染色效果很好,现将这三种类型的苏木精在HE染色中的效果介绍如下。     

苦味酸天狼猩红偏振光法鉴别Ⅰ型及Ⅲ型胶原纤维

肝纤维化程度是表明慢性肝损伤发展阶段的重要标志。为研究酒精性肝纤维化的程度，我们采用苦味酸天狼猩红染色偏振光法显示1型及匾型胶原［‘j。同时探索了影响偏振光强度的因素及改进方法。一、材料与方法1．取自近年活检的酒精性肝纤维化组织、尸检的肝纤维化、肝硬变及正常肝组织。2．肝组织经10％福马林固定，石蜡包理，切片厚3。6Pmo3．苦味酸天狼猩红染液配制：olg天狼猩红（Sir－iusRedF3B，英国），溶于100ml苦味酸饱和液中。切片脱蜡至水，苦味酸天狼猩红液浸染1小时，自来水洗，苏木素复染核、封片。并对比了不同染色时间的效…     

骨髓活检塑料半薄切片的染色

半薄切片的操作过程及方法简单 ,尤其适用于骨髓活体检查 ,切片中的各系统细胞形态接近于涂片形态。因ＨＥ染色不能完全显示骨髓中的一些特殊成分 ,故导致分辨率不够理想。作者针对这一问题建立一种适用于作骨髓半薄切片的染色方法。1　配制方法1 1　染色液的配制　 (1)苏木精、姬姆萨　根据Ｈａｒｒｉｓ苏木精和Ｇｉｅｍｓａ染液的配制方法。 (2 )酸性品红溶液　 1 2 %浓度。1 2　染色方法及步骤　 (1)将骨髓塑料半薄切片 (2 μｍ)附贴于载玻片上在加热板上使充分干燥。 (2 )Ｈａｒｒｉｓ苏木精染色 5ｍｉｎ ,自来水或蒸馏水冲洗。 (3)Ｇｉ…     

一种病理组织切片恒温染色台的设计

目的设计一种可提高组织切片苏木精-伊红(HE)染色速率及染色质量的病理组织切片染色装置。方法设计制作由水浴箱、带盖染色缸、电控箱三部分构成的组织切片恒温染色台,实验比对组织石蜡切片上的石蜡膜溶于二甲苯的互溶速率和镜下染色效果。结果在37.0℃条件下,石蜡膜在二甲苯中的溶脱时间比室温条件下缩短了近一半的时间,互溶速率两组比较差异有显著统计学意义(P<0.001);在减少1/2染色时间染制的切片组织色泽与室温条件下的染色效果类似,而且细小颗粒着色清晰。结论应用该设备条件的组织切片染色效果优于传统常温方法。     

两种染色法判定左前臂骨缺损修复骨组织的成熟度

背景：苏木精-伊红染色和Masson染色是常用的两种评价骨组织修复程度的方法,但上述两种方法能否有效地评价骨缺损修复过程中骨组织成熟度,目前尚缺乏相关研究。 目的：比较Masson染色和苏木精-伊红染色两种方法判定骨组织成熟度的敏感性。 方法：构建新西兰白兔15 mm桡骨缺损的动物模型,植入丝素蛋白/羟基磷灰石/骨髓基质干细胞的组织工程化骨,分别于术后第4,8,12周随机选取6只动物摄X射线平片,随后处死取材,进行大体标本观察、Masson染色及苏木精-伊红染色组织学观察。 结果与结论：X射线片与大体标本可见兔桡骨缺损逐渐修复,新生骨走向成熟骨。术后4周,苏木精-伊红染色在材料与骨的结合部及中间的材料上均形成大量新生软骨,有类骨样组织形成及有少量编织骨出现;Masson染色主要表现为绿色,可见到少许红染。术后8周,苏木精-伊红染色出现更多的新生骨组织,并更趋于成熟,出现了成熟的骨细胞及大量编织骨,有血管形成;Masson染色主要表现为红-绿相间。12周时,苏木精-伊红染色新生骨逐渐改建,形成髓腔,有大量板层骨相互融合成片;Masson染色主要表现为红色。说明Masson染色结合苏木精-伊红染色能较好判定新生骨走向成熟骨的过程,但在判定骨质成熟度时Masson染色较苏木精-伊红染色更直观。     

介绍一种FAAPT冷冻切片快速固定液

手术中冷冻切片的病理诊断是根据冷冻切片组织学形态来进行 ,以确定病变组织的良恶性为目的〔1〕。制作冷冻切片包括制片、固定、染色三个环节 ,在冷冻切片中固定液的选择是不可忽视的一个因素。我们在工作中经反复试验在众多固定液中选择ＦＡＡ液 (福尔马林 -醋酸 -乙醇 ) ,经改良配成一种适合于冷冻切片的ＦＡＡＰＴ(福尔马林 -醋酸 -乙醇 -苦味酸 -ＴｒｉｔｏｎＸ - 10 0 )快速固定液。该液具有固定速度快、渗透力强、ＨＥ染色鲜艳、组织结构清晰等优点。1　材料与方法1 1　ＦＡＡＰＴ固定液的配制　福尔马林 15ｍｌ,醋酸 3ｍｌ,95 %乙醇…     

影响HE染色细胞形态的因素探讨

我科自８０年代以来,逐渐将ＨＥ染色中的染色后乙醇脱水、二甲苯透明步骤简化为染色后１０５℃烤干、中性树胶（二甲苯稀释）封片,以缩短制片时间,减少接触二甲苯的机率,取得一定效果。但该方法制出的切片,细胞有明显收缩,核浓染,细微结构不甚清晰,同时部分细胞核呈黑褐色,如“焦化”状,经缩短苏木素染色时间和用盐酸乙醇分化,都无明显改进。因此,我们针对制片程序中的其他与上述图象形成有关的因素,如烤片温度、苏木素伊红染色后直接烤干封片等设计如下实验进行探讨。１　材料和方法１１　组织及蜡块　选取腺癌及淋巴结组织…     

四种脱钙液对骨和骨髓组织及结构影响的比较

背景：由于骨和骨髓组织结构非常特殊,在常规的病理制片过程中,要同时显示坚韧质硬的骨组织和含有多种幼稚娇嫩造血细胞的骨髓组织是非常困难的。目的：选择一种既能完全除去骨组织中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞结构不受破坏的最佳脱钙液。方法：将含骨髓组织的犬长骨组织随机分4组,同等条件下,14%硝酸甲醛生理盐水溶液;14%硝酸水溶液;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液和20%甲盐酸水溶液4种不同脱钙液脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、苏木精-伊红染色,镜下观察,对比4种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和其苏木精-伊红染色效果。结果与结论：14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和苏木精-伊红染色的效果最差;20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和苏木精-伊红染色效果都比14%硝酸甲醛生理盐水溶液组稍差;20%甲盐酸水溶液组对骨和骨髓组织的损伤小,脱钙效果好,切片质量和苏木精-伊红染色的效果佳,介于20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间。结果表明,4种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及苏木精-伊红染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸甲醛生理盐水溶液> 20%甲盐酸水溶液> 14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

弹力纤维染色与免疫组织化学双重染色技术

我们采用Gomori醛品红弹力纤维染色法和免疫组织化学SP法结合的双重染色方法 ,可同时显示血管壁上的弹力纤维和某些抗原成分 ,效果满意 ,介绍如下。一、材料与方法1.材料 :大鼠髂动脉粥样硬化标本 35份 (例 ) ,经 4 %甲醛固定 ,常规脱水、石蜡包埋 ,切片厚 5 μm。2 .试剂 :(1)醛品红染液 :碱性品红 0 .5g ,70 %乙醇10 0ml,浓盐酸 1ml,三聚乙醛 1ml,将碱性品红溶于 70 %乙醇 ,然后加入浓盐酸混合均匀后 ,加入三聚乙醛 ,轻轻摇动使混合均匀 ,于室温下静置 2d ,成熟时呈深紫色。过滤于小口砂塞瓶 ,置冰箱备用。 (2 ) 70 %乙醇。 (3)免疫组织…     

Harris苏木精染色的常见问题及解决方法

在常规病理诊断过程中,常用的是Harris苏木精和沉淀酸化伊红Y乙醇液染色(H-E染色).染色质量是由多种因素决定,但苏木精细胞核染色是其中关键的方面,根据笔者多年来的经验,现就在染色过程中存在的常见问题和改进方法进行探讨.     

塑料包埋不脱钙骨组织玻璃刀切片技术

一、材料和方法1．取材固定：用307－6型台式牙钻车，换上金钢砂片切取长约1cm；宽约0．5cm；厚约0．3cm骨组织，用7O％乙醇固定3～5天。2．脱水透明：用80％、90％、100％乙醇脱水、二甲苯透明，每级各二次，每次24小时。3．浸透液：I液：甲基丙稀酸甲酯（MMA）75ml，邻苯二甲酸二丁酯（DBP）25ml。Ⅱ液：MMA75ml，DBP25ml。过氧化苯甲酸1g。Ⅲ液：MMA75ml，DBP25ml，过氧化苯甲酸2．5g。以上三液，配时均需搅拌数小时，在搅拌机上充分搅匀。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液各浸透36小时。Ⅲ液也为包理液。4．包埋：将青霉素小瓶中滴入2ml包埋液，40…