人胚胎胸腺褪黑素受体亚型的分布

目的:应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术显示人胚胎胸腺褪黑素受体及其亚型的分布.方法:人胚胎胸腺组织用4%多聚甲醛及0.1%DEPC固定,石蜡包埋组织,应用mt1和MT2受体亚型的特异性探针和鼠抗人 mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及蛋白的翻译.结果:人胚胎胸腺组织的皮髓质的上皮细胞及胸腺小体均存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译.结论:人胚胎胸腺组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA及蛋白,提示在该组织中有mt1和MT2受体亚型的表达.     

下丘脑褪黑素受体亚型基因及蛋白表达的研究

目的：应用PT－PCR技术和免疫组织化学染色显示人胚胎下捕脑褪黑素受体及其亚型的分布。方法：取人胚胎下丘脑组织，抽提总RNA并应用RT－PCR方法检测其mRNA，扩增所得阳性产物用自动测序仪测序；石蜡包埋下丘脑组织，应用鼠抗人mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测褪黑素mt1和MT2受体亚型mRNA及其蛋白的表达。结果和结论：人胚胎下丘脑组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译，提示在该组织中有mt1和MT2两种受体亚型的表达。     

人外周血粒细胞褪黑素受体亚型的基因与蛋白表达

目的：研究人外周血粒细胞褪黑素受体(melatonin receptor，MR)亚型的基因与蛋白表达的特点。方法：通过密度梯度离心法分离得到健康成年人外周血粒细胞，采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA，分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA，并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序；同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在粒细胞内的分布特点。结果：Northern印迹方法检测出长约1．1kb的mt1mRNA，但未检出长约1．1kb的MT2mRNA；RT-PCR方法则得到了约370bp的mt1 cDNA片段，无320bp的MT2 cDNA片段，mt1阳性条带测序结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合；免疫组化结果显示：人外周血粒细胞存在mt1受体蛋白，主要分布于细胞膜和细胞质，呈棕褐色阳性颗粒，而细胞核上几乎未见阳性颗粒，MT2受体蛋白则未检出。结论：证实正常人外周血粒细胞存在mt1亚型的基因与蛋白的表达，而无MT2亚型的基因与蛋白的表达，提示外周血粒细胞为褪黑素(melatonin，Mel)作用的外周靶器官。     

人甲状腺肿瘤组织褪黑素受体改变及意义

目的:探讨成人甲状腺肿瘤及瘤旁正常组织褪黑素受体表达的改变及意义。方法:取成人甲状腺肿瘤(腺瘤及腺癌)组织及瘤旁正常组织,抽提总RNA,合成mt1、MT2受体引物,用RT—PCR半定量分析褪黑素受体亚型mRNA表达的改变。结果:人甲状腺腺瘤、腺癌及瘤旁正常甲状腺组织均有mt1、MT2受体表达。甲状腺腺瘤组织mt1、MT2受体亚型表达量与正常甲状腺组织无差异     

人HUT78细胞褪黑素受体的鉴定及生物学特征

目的:探讨人HUT78细胞是否存在褪黑素受体(melatonin receptor,MR)及其亚细胞分布特点。方法:采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA,通过RT-PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA,并将RT—PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点。结果:RT—PCR得到了368 bp mt1     

人外周血淋巴细胞和粒细胞褪黑素受体亚型mt1的鉴定及生物学特征

目的:检测人外周血淋巴细胞和粒细胞是否存在褪黑素(Mel)受体亚型mt1,为进一步研究Mel对免疫系统的调节作用提供证据.方法:选择健康成年人,抽取外周血,应用密度梯度离心法分离淋巴细胞和粒细胞.采用免疫组织化学法、RT-PCR和基因序列法,检测其mt1蛋白及mRNA的表达.结果:(1)免疫组织化学染色结果显示,人外周血淋巴细胞和粒细胞均存在mt1受体蛋白,分布于细胞膜、细胞质和细胞核,以细胞膜和细胞质为主.(2)RT-PCR产物电泳均出现阳性条带,大小均相当于370核苷酸左右,经测序证实与GenBank的人mt1受体亚型的基因序列相吻合.结论:人外周血淋巴细胞和粒细胞中均存在mt1受体蛋白及mRNA的表达,提示Mel对外周血淋巴细胞和粒细胞有直接作用.     

人骨骼肌组织褪黑素受体的定位和鉴定

目的:证实褪黑素受体(MR)存在于人骨骼肌组织，并研究其亚细胞分布。方法:采用免疫组织化学和逆转录-多聚酶链反应(RT—PCR)产物基因测序检测人骨骼肌组织的MR，并了解其亚细胞分布。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳出现的阳性条带经纯化后，其基因测序的序列与Genebank的MR亚型1(mt1)的cDNA序列相吻合，而未出现MR亚型2(MT2)mRNA阳性条带；免疫组织化学证实人骨骼肌组织的细胞膜、细胞浆、细胞核均有MR亚型mt1蛋白的表达，无MT2蛋白的表达。结论人骨骼肌组织存在MR亚型mt2分布于细胞膜、细胞浆和细胞核，骨骼肌是褪黑素作用的靶器官。     

人胚胎肾上腺皮质褪黑素受体亚型蛋白的分布

目的：研究褪黑素（Mel)受体亚型在人胚胎肾上腺皮质的分布。方法：应用免疫组化染色检测Ｍel受体亚型的人胚胎肾上腺皮质的分布。结果：在人胚胎肾上腺皮质的球状速、束状带和网状带均存在Ｍel受体mt1(Mella)和ＭＴ２（Ｍellb)亚型蛋白的表达,且主要分布于细胞质。结论：人胚胎肾上腺皮质存在Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型。     

成人甲状腺肿瘤褪黑素及褪黑素受体蛋白表达异常及意义

目的:研究甲状腺肿瘤患者褪黑素(Mel)及褪黑素受体(MR)蛋白表达的改变及意义。方法:取甲状腺肿瘤(腺瘤及腺癌)患者肿瘤(腺瘤旁1 cm为正常组织对照)匀浆及自身外周血用ELISA方法检测Mel浓度改变;取甲状腺肿瘤(腺瘤及腺癌)组织及瘤旁正常组织,石蜡包埋,切片,以免疫组化SP法检测MR蛋白改变。结果:ELISA方法显示甲状腺肿瘤组织匀浆上清Mel浓度较自身外周血明显增高(P<0.05,P<0.01);各组组织匀浆上清Mel浓度:甲状腺腺癌组高于腺瘤组和瘤旁组织组(P<0.05,P<0.01);甲状腺腺瘤组高于瘤旁组织组,但无统计学差异;免疫组化方法显示:成人甲状腺腺癌细胞细胞膜、细胞质和细胞核中MT2亚型蛋白均呈棕褐色强阳性染色卅,较腺瘤及瘤旁正常甲状腺组织±～+明显增加,mt1受体蛋白亚型表达无差异,均为±～+。结论:成人甲状腺肿瘤组织中Mel浓聚,存在mt1、MT2受体亚型。其中腺癌的细胞膜、细胞质、细胞核内MT2高表达。提示Mel与甲状腺肿瘤有一定关联,可能主要通过MT2受体发挥抗甲状腺腺癌作用。     

用原位杂交及免疫组化方法显示人胚胎甲状腺褪黑素受体

目的：在前期工作的基础上进一步观察人胚胎甲状腺组织中腿黑素（Ｍel)受体的存在及其分布。方法：取人胚胎（胎龄６个月）甲状腺,石蜡包埋,切片,以免疫组化ＡＢＣ法及原位杂交方法进行染色。结果：免疫组化方法显示,人胚胎甲状腺细胞的细胞膜、细胞质和细胞核中Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型均呈棕褐色阳性染色;原位杂交方法显示mt１和ＭＴ２分布于甲状腺细胞的细胞质及细胞核内,呈蓝紫色阳性染色。结论：人胚胎甲状腺组织中存在褪黑素受体mt1和ＭＴ２亚型,分布于甲状腺细胞的细胞膜、细胞质、细胞核内。     

人椎旁肌组织褪黑素受体的表达

目的 了解褪黑素(Mel)受体亚型在人椎旁肌组织的分布.方法 应用单克隆抗体免疫组化染色方法检测Mel受体亚型在人椎旁肌组织的分布.结果 在人椎旁肌组织中均存在Mel受体mt1和MT2亚型的表达,阳性颗粒分布于细胞浆和细胞核,主要分布于细胞浆.结论 人椎旁肌组织存在Mel受体,Mel缺乏可能引起Mel受体介导的椎旁肌的生物效用发生紊乱而影响其对称性生长,从而发生脊柱侧弯.     

人食管下括约肌毒蕈碱受体的表达

目的：研究毒蕈碱受体亚型在人食管下括约肌（LES）套索纤维和钩状纤维的表达,对LES胆碱能收缩机制作进一步分析．方法：选取高位食管中段癌,行食管大部切除术患者12例,取食管胃接合部标本分离套索纤维和钩状纤维．分别应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印记（Western Blot）检测5种M受体亚型在两种肌纤维中mRNA和蛋白的表达．结果：不同M受体亚型mRNA在两种肌纤维的表达有统计学差异（P〈0．05）,从数据观察5种受体亚型mRNA表达从强到弱顺序依次为M2,M3,M1,M4,M5;同一受体mRNA在两种肌纤维间表达无统计学差异;不同M受体亚型蛋白在两种肌纤维表达有统计学差异（P〈0．05）,5种受体亚型蛋白表达强弱同mRNA;同一受体在两种肌纤维间蛋白表达无差异．结论：5种M受体亚型mRNA和蛋白在两种肌纤维均有表达,M2受体表达量最高,其它依次是M3,M1,M4和M5受体;相同受体在两种肌纤维间mRNA和蛋白的表达相同．     

镉诱导大鼠睾丸三种类型细胞和肝脏金属硫蛋白基因表达的研究

目的：啮齿类动物睾丸较肝脏对镉毒性更敏感。通过对镉诱导早期大鼠睾丸三种类型细胞（支持细胞、同质细胞和生精细胞）与肝脏金属硫蛋白（MT）及其亚型MT1、MT2表达的研究，阐明大鼠睾丸对镉毒性较肝脏更敏感的分子机制。方法：采用半定量RT－PCR、ELISA、原子分光光度吸收法，观察镉处理后不同时相大鼠睾丸三种类型细胞与肝脏MT基因表达的变化。结果：睾丸组织中存在MT。同时还发现0h对照组大鼠镉处理后肝脏MT mRNA增加并保持较高的基础水平，3h达峰值后下降；而睾丸儿间质细胞则在6h达高峰。镉中毒大鼠睾丸支持细胞和肝脏MT1 mRNA的变化幅度要低于MT2 mRNA，而在间质细胞中则相反。此外，生精细胞MT1 mRNA在镉处理后0－3h减少，然后增加，而MT2 mRNA的变化则相反，而且它们的诱导变化幅度较其他细胞低。镉暴露后肝脏MT mRNA和MT均升高，但在睾丸三种类型细胞中MT的表达并没有增加。结论：镉诱导后MT mRNA的表达具有细胞和时间依赖性；镉虽然能诱导睾丸MT mRNA的转录但没有促进其MT的合成，可能是睾丸对镉毒性与致癌作用较肝脏更敏感的重要原因。     

膜型基质金属蛋白酶-1在肝癌组织中的表达及意义

【目的】比较膜型基质金属蛋白酶-1（membrane type-1 matrix metauopmteinase，MT1-MMP）在大肝癌（瘤体直径〉3cm）及小肝癌（单肿瘤结节且瘤体直径≤3cm）组织中的表达差异，并探讨其在肝癌肿瘤细胞浸润、转移过程中的作用。【方法】应用半定量RT—PCR方法检测MT1-MMP mRNA在22例大肝癌及12例小肝癌组织中的表达：应用免疫组化方法检测MT1-MMP蛋白在53例大肝癌及40例小肝癌组织中的表达，并分析MT1-MMP蛋白表达水平与肝癌浸润、转移之间的关系。【结果】MT1-MMP蛋白在大、小肝癌组织中的表达差异显著（P=0．007），但其mRNA水平的差异无统计学意义（P=0．693）；MT1-MMP蛋白表达水平与肝癌浸润及转移之间均呈正相关关系（P=0．021；P=0．001）。【结论】调控MT1-MMP蛋白在肝癌组织中异常表达的关键环节可能是在转录后水平进行，大肝癌肿瘤细胞的侵袭能力较小肝癌强与其高表达MT1-MMP蛋白有关。     

子宫肌瘤及子宫内膜癌患者褪黑素受体改变及意义

目的：探讨光照周期对大鼠脂肪组织褪黑素（Mel）受体（mtl、MT2）及肾上腺素能受体mRNA表达的影响。方法：健康、雄性、6～8周龄SD大鼠40只，体质量160～180g。先适应1周后随机分为5组，每组8只，分别为低剂量Mel组（LMel）、高剂量Mel组（HMel）、长光照组（LD）、短光照组（SD）、正常对照组。采用实时荧光定量RT-PCR方法观察大鼠附睾周围脂肪组织mt1、MT2及β-3肾上腺素能受体mRNA的表达。     

膜型基质金属蛋白酶-1在肝癌组织中的表达及意义

[目的]比较膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type-1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)在大肝癌(瘤体直径＞3 cm)及小肝癌(单肿瘤结节且瘤体直径≤3 ca)组织中的表达差异,并探讨其在肝癌肿瘤细胞浸润、转移过程中的作用.[方法]应用半定量RT-PCR方法检测MT1-MMP mRNA在22例大肝癌及12例小肝癌组织中的表达;应用免疫组化方法检测MT1-MMP蛋白在53例大肝癌及40例小肝癌组织中的表达,并分析MT1-MMP蛋白表达水平与肝癌浸润、转移之间的关系.[结果]MT1-MMP蛋白在大、小肝癌组织中的表达差异显著(P=-0.007),但其mRNA水平的差异无统计学意义(P=0.693);MT1-MMP蛋白表达水平与肝癌浸润及转移之间均呈正相关关系(P=0.021;P=-0.001).[结论]调控MT1-MMP蛋白在肝癌组织中异常表达的关键环节可能是在转录后水平进行,大肝癌肿瘤细胞的侵袭能力较小肝癌强与其高表达MT1-MMP蛋白有关.     

激光捕获显微切割技术检测卵巢癌组织中EphA2受体的表达

目的:检测卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平.方法:应用激光捕获显微切割技术(LCM)辅助的一步RT-PCR及Western blot方法检测30例卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平.结果:LCM成功地将卵巢癌细胞从卵巢癌冰冻组织切片中分离.RT-PCR结果显示,卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA表达,mRNA表达与卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织分化程度以及残余肿瘤大小均无关(P<0.05).Western blot结果显示EphA2受体表达与mRNA表达水平一致.结论:LCM能够精确分离少量卵巢癌细胞;卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA及蛋白质表达.     

正常豚鼠胆囊平滑肌M受体亚型mRNA表达的研究

目的 研究M受体亚型mRNA在正常豚鼠胆囊平滑肌的表达.方法 10周龄白化豚鼠10只,RT-PCR检测胆囊平滑肌M受体亚型mRNA的表达.结果 豚鼠胆囊平滑肌有M受体4种亚型mRNA的表达,各亚型mRNA表达从强到弱顺序依次为M3、M2、M4及M1,无M5受体mRNA的表达.M3与M2受体mRNA的表达量差异无显著性(P＞0.05),M3、M2受体mRNA的表达量分别与M4和M1受体mRNA的表达量相比,差异均有显著性(P＜0.05).结论 胆囊平滑肌有4种M受体亚型mRNA表达即M1～M4,提示这4种亚型可能均参与迷走神经递质乙酰胆碱激发的胆囊收缩.     

γ-谷氨酰转移酶ⅠmRNA亚型联合甲胎蛋白mRNA检测对肝癌的诊断价值

目的：探讨γ-谷氨酰转移酶ⅠmRNA（GGTⅠmRNA）亚型和甲胎蛋白（AFP）mRNA检测对肝癌的诊断价值。方法：运用RT—PCR检测肝脏组织标本和人肝细胞株QSG-7701、人肝癌细胞株HepG2中GGTⅠmRNAA、B、C3种亚型和AFP mRNA的表达。结果：AFP mRNA在肝癌组织中的表达显著高于非癌肝组织、癌旁组织和远癌组织。GGTⅠmRNAA亚型主要在非癌肝组织中表达，B亚型主要在远癌组织、癌旁组织、癌组织中表达。人肝细胞株QSC-7701中GGTⅠmRNAC亚型阳性表达。人肝癌细胞株HepG2中AFP mRNA、GGTⅠ mRNAB亚型表达阳性。GGTⅠmRNAB亚型联合AFP mRNA诊断肝癌的阳性率可达98．0％，小肝癌的阳性率达95．2％。结论：在肝脏癌变的过程中存在着GC-TⅠmRNAA亚型向B亚型的转化，联合监测GGTⅠmRNA亚型和AFPmRNA有助于对肝癌的早期诊断。     

RT—PCR分析探测人胚胎卵巢中的褪黑素受体

目的：研究入胚胎卵巢中是否存在褪黑素受体。方法：取人胚胎卵巢,用逆转录一多聚酶链反应方法鉴别褪黑素受体。结果：人胚胎卵巢总RNA以MT1及MT2两种受体引物进行的RT-PCR产物电泳呈现阳性条带,测序显示扩增产物与人类脑组织褪黑素受体cDNA相吻合,结论：人胚胎卵巢组织中存在有MT1、MT2两种褪黑素受体。证明卵巢是褪黑素作用的靶器官,褪黑素可能直接作用于卵巢,参与胚胎卵巢的发育或调节胚胎卵巢的功能。