伴高脂血症性重症急性胰腺炎大鼠肠道细菌移位的实验研究

目的建立高脂血症重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型,观察比较伴或不伴高脂血症SAP大鼠的内毒素水平及细菌移位情况,以了解肠源性感染在伴有高脂血症SAP中的地位。方法40只雄性SD大鼠随机等分为4组:正常组、高脂血症组、重症急性胰腺炎组、高脂血症重症急性胰腺炎组。建立大鼠高脂血症及大鼠SAP模型,观察胰腺组织病理改变;检测大鼠血清淀粉酶及三酰甘油、门静脉血内毒素水平;取标本(门静脉血、腹水、肠系膜淋巴结及回盲末端肠管)进行细菌培养,鉴定其菌种并计算细菌移位率。结果SAP组及HSAP组胰腺组织病理见明显的水肿、炎性细胞浸润、出血、坏死等改变,评分值较正常组有显著升高(P0.05),其中HSAP组胰腺组织坏死程度较SAP组严重,评分值差异有统计学意义(P0.05)。HL组血清TG值较正常组明显升高(P0.05),HSAP组血清TG值较SAP组升高(P0.05);SAP组血清AMS值、血内毒素水平及细菌移位率较正常组显著升高(P0.05),HSAP组血清AMS值较SAP组明显降低(P0.05),HSAP组血内毒素水平及细菌移位率较SAP组升高(P0.05);SAP组及HSAP组各标本移位细菌种类与肠管相同。结论伴或不伴高脂血症SAP大鼠在发病早期均可发生肠道黏膜损伤、内毒素血症和细菌移位,伴有高脂血症SAP组较单纯SAP组更易发生细菌移位及内毒素血症,肠源性感染有可能是其病情加重的原因之一。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ在大鼠慢性胰腺炎进程中的表达及意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)在大鼠慢性胰腺炎(CP)进程中的表达及其意义.方法 经大鼠尾静脉一次性注射二丁基二氯基锡方法制备CP模型.按体重随机分为对照组及造模后1、3、5、7、14、42 d组.行胰腺常规病理检查,Sirius Red染色观察胶原含量,测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,免疫组化法测定α-SMA、PPAR-γ蛋白的表达.结果 造模7d内胰腺呈急性炎症改变,42 d时出现不同程度的腺泡坏死、萎缩,淋巴细胞、单核细胞浸润,小叶内或小叶周围纤维化形成,伴胰管改变,符合从急性胰腺炎(AP)向CP的进展过程.造模后1d,胰腺组织MPO活性、α-SMA蛋白表达即显著增加[(0.78±0.71) U/g比(0.15±0.05)U/g,6.67 ±3.14比0,P值均＜0.05],之后随造模时间延长未继续增加.造模后7d,胶原含量达峰值,为(45.42±15.99)％,较对照组的( 10.87±2.28)％显著增加(P＜0.05),胶原沉积从仅在血管壁进展到沉积在导管周围至小叶内和(或)小叶周围.对照组PPAR-γ仅在血管壁呈阳性表达,表达量为0.17±0.41,随造模时间延长表达渐增强,42d达峰值,为4.83±2.71.结论 在CP造模过程中PPAR-γ蛋白表达逐渐增强,并发挥有限的抗炎症和抗纤维化作用.     

脂质过氧化损伤对高脂血症大鼠重症急性胰腺炎的作用及机制

目的:观察高脂血症对大鼠急性胰腺炎病情的影响,探讨脂质过氧化损伤在伴高脂血症重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及其机制.方法:SD大鼠脂肪乳剂灌胃2 wk建立高脂血症模型,逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠诱发SAP模型.将大鼠50只随机分为4组:正常组(n=10);高脂血症对照组(HL组,n=10);SAP组(n=15);伴高脂血症SAP(HAP,n=15).检测血清淀粉酶(AMS)、甘油三酯(TG)及胆固醇(CH)水平,并检测血清及胰腺组织的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、一氧化氮(NO),观察胰腺组织病理改变.结果:HAP组胰腺组织病理改变较SAP组严重:HAP组血清及胰腺组织MDA、XOD水平显著高于SAP组(血清:30.76±2.67 nmol/mLvs 23.14±3.42 nmol/mL,55.72±10.49 U/L vs 45.78±8.98 U/L,均P<0.01:胰腺组织:4.33±0.48 nmol/mgprot vs 2.87±0.45 nmol/mgprot,5.57±0.63 U/gprot vs 4.33±0.79 U/gprot,均P<0.01):其血清及胰腺组织SOD、NO水平显著低于SAP组(血清:85.46±13.56 U/mLvs 97.16±13.77 U/mL,31.72±10.50μmol/Lvs 52.97±6.01μmol/L,均P<0.05;胰腺组织:22.65±3.85 U/mgprot vs 27.88±4.43 U/mgprot,均P<0.01;1.09±0.21 μmol/gprot vs 1.48±0.40μmol/gprot,均P<0.05).结论:高脂血症可加SAP的胰腺病理改变;脂质过氧化损伤可能在高脂血症加重SAP的机制中发挥重要作用.     

PPAR-γ激动剂对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮对ANP大鼠肺损伤的作用及其机制.方法 雄性Wistar大鼠54只,按完全随机法分为假手术组(SO组)、ANP组、罗格列酮组.胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备ANP模型.SO组、ANP组在造模前30 min股静脉注射10%DMSO(0.2 ml/100 g体重);罗格列酮组则注射等量10%DMSO溶解的罗格列酮(6 mg/kg体重).术后3 h、6 h、12 h分批剖杀,每个时间点6只.检测血清淀粉酶、肺组织髓过氧化物酶(MPO)、肺湿干重比、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量.取胰头部胰腺组织和肺组织行病理学检查.RT-PCR检测肺组织TNF-α mRNA和ICAM-1 mRNA的表达.结果 ANP组血淀粉酶、肺MPO、湿干重比、BALF蛋白含量、胰腺及肺病理分值、肺脏TNF-α mRNA和ICAM-1 mRNA的表达水平均随时间延长而逐渐升高,12 h时分另0为(5353.0±728.2)U/L、(1.12±0.14)U/g、3.00±0.14、(0.438±0.056)g/L、11.17±0.93、8.17±0.75、0.57±0.03和1.53±0.08,均明显高于SO组(P<0.05或P<0.01).罗格列酮12 h组上述指标分别为(2847.4±841.0)U/L、(0.84±0.06)U/g、2.13±0.36、(0.283±0.078)g/L、7.75±0.27和4.33±0.82、0.26±0.04和0.84±0.02,均明显低于ANP 12 h组(P<0.05或P<0.01),但仍高于SO组(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮对ANP大鼠胰腺及肺损伤具有一定程度保护作用,其机制可能与抑制肺组织TNF-α、ICAM-1 mRNA的表达有关.     

罗格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的干预作用

目的:观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROSI)预处理后重症急性胰腺类(SAP)大鼠胰腺组织中PPARγ与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,探讨ROSI对大鼠SAP的干预作用.方法:将72只6 SD大鼠随机分为假手术(SO)组、SAP组及ROSI组.每组24只.逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)制备SAP模型.ROSI组在制模前1 h腹腔注射1%罗格列酮(1mL/kg),然后制备SAP模型.术后3、6、12 h经腹主动脉取血处死大鼠(每个时间点8只),胰腺组织病理切片HE染色后评分,留取胰腺组织检测髓过氧化物酶(MPO)、iNOS、NO含量,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中PPARγ和iNOS mRNA的表达水平.结果:与SAP组比较,ROSI组12 h点胰腺组织中MPO活性下降(2.09±0.36 U/g vs 2.67±0.58U/g,P<0.01),胰腺病理学评分改善(10.50±1.67 vs 12.50±1.77,P<0.05);ROSI组6、12 h点iNOS、NO活性低于同时间点SAP组(6 h点:4.39±1.20 U/mgprot vs 6.44±1.73 U/mgprot;22.58±5.49 μmol/gprot vs 36.90±7.28μmol/gprot;12 h点:9.87±2.69 U/mgprot vs 15.68±1.74 U/mgprot;17.06±5.40μmol/gprot vs24.47±4.98 gmol/gprot,均P<0.0 1);ROSI组胰腺组织中PPARV mRNA表达在3 h点明显增加,6 h点达最高峰,单次剂量(10 mg/kg)至12 h点仍持续表达,其表达水平分别为0.229±0.091,0.394±0.081,0.364±0.064.与SAP组比较.而6 h点与12 h点iNOS mRNA表达较同时段sAP组均有下降,差异有统计学意义(0.197±0.049 vs 0.269±0.068;0.266±0.067 vs 0.415±0.076,P<0.05或<0.01).结论:罗格列酮通过活化PPARγ途径,抑制胰腺组织中iNOS mRNA表达,减少iNOS和NO生成,减轻中性粒细胞浸润,从而减轻SAP时胰腺病理损害.     

急性脑梗死患者血清PPARγ表达变化及意义

目前认为高血压、糖尿病、肥胖、脂代谢异常、动脉粥样硬化等是脑血管疾病发生的主要危险因素[1].过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ是一种与代谢调节相关的配体激活核受体转录因子,具有多种生物效应,在血压调节、糖脂代谢、能量代谢、炎症、细胞生长和分化等过程中具有关键调节作用.本研究探讨急性脑梗死患者PPARγ与血糖、血脂、血压及动脉粥样硬化程度之间的关系.     

急性胰腺炎大鼠胰腺过氧化酶体增殖物激活受体的表达

目的 检测ANP大鼠过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达的变化,探讨其意义.方法 36只SD大鼠按完全随机法分成对照组和ANP组.于术后3 h、6 h、12 h处死大鼠,分别检测血清淀粉酶含量,观察胰腺组织大体及镜下病理学改变,并采用RT-PCR和免疫组化分别检测胰腺PPARγmRNA和蛋白的表达.结果 ANP组术后6 h血清淀粉酶、胰腺大体及镜下病理分值分别为(7170.83±1635.59)U/L、6.67±1.03和13.00±2.36,均显著高于对照组(P<0.01);PPARγmRNA相对表达量为0.18±0.05,与对照组的0.22±0.03无显著差异;PPARγ蛋白相对表达量为4.17±0.98.较对照组的1.83±0.71显著升高(P<0.05).结论 ANP时PPARγ mRNA无明显下降,而PPARr蛋白明显增加.表明炎症损伤时,失活状态的PPARγ增多,同时反馈性抑制了PPARγ基因的表达.     

一氧化氮在伴高脂血症急性出血坏死性胰腺炎大鼠胰腺及肾损害中的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)含量变化对伴高脂血症急性出血坏死性胰腺炎(ANPl大鼠胰腺、肾损害的作用和对肾小球足细胞的影响.方法:♂SD大鼠30只,高脂饲料喂养4 wk建立大鼠高脂血症模型,将大鼠随机等分为3组;A组即高脂血症+ANP;B组即高脂血症+ANP+L-精氨酸(L-arg);C组即高脂血症+ANP+L-硝基精氨...     

脂联素在重症急性胰腺炎脂肪组织中的表达及意义

目的探讨脂联素在重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)脂肪组织中的表达、作用及意义。方法通过牛磺胆酸钠诱导建立大鼠SAP模型,12只SD大鼠随机分成2组:假手术对照组(N组)、SAP组;分别于24 h内处死,取附睾旁脂肪组织,采用RT-PCR行mRNA表达量检测,HE染色观察脂肪组织炎症改变情况。结果与N组相比,SAP组炎症因子IL-10、TNF-αmRNA表达上升(P0.05),而TGF-β1及脂联素的表达明显下降(P0.01)。结论脂联素在SAP中起保护性作用,有可能成为预测SAP严重程度及判断预后的指标。     

重症急性胰腺炎大鼠肺组织中LIF的表达变化及意义

目的:观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠白血病抑制因子(LIF)在肺组织中表达的时相变化, 探讨LIF在SAP病程及肺损伤中的意义．方法:36只♂SD大鼠随机分为正常对照组(N 组,n=6)、假手术组(Sham组,n=6)和重症急性胰腺炎组(SAP组,n=24)．采用胰管逆行灌注50 g/L牛磺胆酸钠的方法复制大鼠SAP模型．用RT-PCR法检测肺组织中LIF mRNA的表达水平,免疫组织化学方法检测NLIF在肺组织中的表达变化．结果:SAP组3 h后肺组织LIF mRNA的表达量明显高于对照组和假手术组(灰度值:1．018± 0．065 vs 1．451±0．067,1．322±0．072,P<0,05), 并且6,12,24 h持续升高(0．853±0．058,0．635 ±0．064,0．582±0．089)(P<0．01)．同样,SAP组 LIF蛋白表达在3和6 h后明显高于对照组和假手术(127．36±2．76,122．53±2．43 vs 159．46 ±2．78,156．35±3．12,P<0．05),并且12,24 h后也维持在很高的水平(109．37±2．87,102．42± 2．27)．结论:LIF作为促炎症因子参与了SAP肺组织的炎症反应．     

TLR2在大鼠急性坏死性胰腺炎中末端回肠的表达及意义

目的:研究大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)末端回肠组织中Toll样受体2(TLR2)的表达及意义.方法:60只大鼠随机分为2组:假手术组20R,ANP组40只.采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制作大鼠ANP模型,并又分为8 h和16 h组.应用实时定量PCR检测不同组、不同时点末端回肠组织TLR2 mRNA的表达,应用Western blot和免疫组化分析各组TLR2蛋白表达变化及组织学定位.结果:与假手术组相比,ANP时末端回肠组织TLR2 mRNA2L蛋白表达显著升高,TLR2的表达水平分别与肠黏膜的病理学评分(r=0.42,P＜0.01)和肠黏膜通透性(r=0.41,P＜0.01)呈正相关.免疫组化发现,ANP组的回肠黏膜表面、黏膜固有层的T、B淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞、黏膜下层的动静脉、纵形和环形肌层等处都有比较强的TLR2的表达.结论:ANP时末端回肠组织内TLR2 mRNA和蛋白表达上调,可能与ANP肠黏膜的病理改变和肠源性感染的发生与发展有关.     

SOCS3在重症急性胰腺炎大鼠胰腺中的表达和作用

目的:探讨细胞因子信号转导抑制子3(SOCS3)在实验生重症急性胰腺炎(SAP)中的表达和作用.方法:32只♂ Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(NC组)和3组SAP 6 h、12 h、18h组,每组8只.以4％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导SAP模型,动态测定各组血清淀粉酶(AMY)水平;光镜下观察胰腺大...     

急性坏死性胰腺炎大鼠血清消褪素的表达变化及意义

目的观察急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠血清消褪素D1（resolvin D1,RvD1）和白细胞介素-6（IL-6）、IL-10的变化情况,探讨RvD1在急性坏死性胰腺炎发病机制中的作用。方法70只SD大鼠随机分为ANP模型组（n=35）和假手术组（r／=35）。经十二指肠乳头逆行胆胰管注射4％牛磺胆酸钠来制备大鼠ANP模型。大鼠分别于造模后3h、6h、12h、24h、48h处死,测定大鼠血清淀粉酶,光镜下进行胰腺病理学观察及评分,应用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清RvD1和IL-6、IL-10的变化情况。结果ANP组大鼠血清淀粉酶从造模后3h开始升高,6h达峰值（8244．00±2949．83）u／L,各时点血清淀粉酶显著高于假手术组（P〈0．05）;ANP组胰腺病理损伤及评分于造模后3h～24h随时间延长逐渐加重,24h评分为（11．91±1．312）分,均较假手术组高（P〈0．05）。ANP组血清RvD1水平于造模后3h～24h随时间延长逐渐升高,24h达峰值（39．48±15．28）pg／mL,较假手术组显著升高（P〈0．05）,并与血清IL-6水平呈正相关（r=0．362,P〈0．05）;在造模后6h、12h、24h,ANP组的血清IL-6水平均较假手术组高（P〈0．05）,并随时间延长逐渐升高,于24h达峰值（1293．26±428．12）pg／mL;在造模后3h、24h和48h,ANP组的血清IL-10水平均较假手术组显著升高（P〈0．05）。结论血清Rv的变化可能与急性胰腺炎（AP）严重程度有关,在AP中起抗炎及促进炎性反应消退的作用。     

低分子肝素对伴高脂血症急性坏死性胰腺炎大鼠PAF、ET-1/NO的影响

目的:研究低分子肝素(LMWH)治疗伴高脂血症性急性胰腺炎(HL-AP)大鼠微循环障碍的作用.方法:SD大鼠80只,高脂饲料喂养4wk建立高脂血症模型后,随机分成3组:假手术(S)组,n=16;NS对照(N)组,n=32;低分子肝素(L)组,n=32.N组与L组大鼠建立ANP模型,S组大鼠仅开腹翻动胰腺.L组造模后分别于0h,6h,12h及18h开始使用LMWH皮下注射.N、S组同时点同方法用生理盐水对照,24h后抽门静脉检测血小板活化因子(PAF)、内皮素-1(ET-1)/一氧化氮(NO)浓度并行电镜观察胰腺组织微循环结构.结果:L组PAF、ET-1/NO浓度分别为5.9250mmol/L±0.6113mmol/L及3.5368±0.26;N组为7.4059mmol/L±0.4281mmol/L及4.1697±0.08;SO组为4.4950mmol/L±0.2628mmol/L及2.5133±0.20;L组PAF、ET-1/NO浓度均低于N组但高于SO组,有统计学意义;L组中0h及6h开始用LMWH的大鼠PAF、ET-1/NO浓度低于12h及18h组,有统计学意义.电镜观察L组胰腺病变程度轻于N组.结论:高脂血症急性胰腺炎大鼠存在胰腺微循环障碍;LMWH可以改善高脂血症大鼠SAP胰腺微循环障碍,并且早期应用优于晚期应用.     

急性胰腺炎大鼠胰腺组织中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达及其意义

目的 检测急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺组织中促凋亡基因Smac/DIABLO和凋亡抑制基因XIAP的mRNA表达,分析其与疾病严重程度的关系.方法 54只SD大鼠按数字表法随机分成假手术组、急性水肿性胰腺炎(AEP)组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组.通过胰胆管逆行注射1%、3.5%脱氧胆酸钠方法分别制备AEP、ANP模型.收集制模后3、6、12 h胰腺标本,常规病理检查;TUNEL法检测细胞凋亡;实时定量PCR法检测Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表达.结果 胰腺病理改变表示模型制备成功.术后6 h假手术组、AEP组、ANP组胰腺腺泡细胞凋亡指数分别为0.67±0.82、6.62±0.78和4.70±0.82,各组间相差显著(P＜0.05).AEP组Smac/DIABLO mRNA的表达随时间延长而逐渐增加,ANP组则随时间延长而逐渐下降,以假手术组为参考,6 h时AEP组和ANP组的表达量分别为2.41±0.92和1.47±0.53,相差显著(P＜0.05).相反,AEP组XIAP mRNA的表达随时间延长逐渐下降,而ANP组表达逐渐增加,6 h时表达量分别为5.51±1.07和6.99±1.00,相差显著(P＜0.05).结论 AP时胰腺组织Smac/DIABLO mRNA的表达与细胞凋亡指数一致,与病情严重程度相反,而XIAP mRNA的表达与病情严重程度一致.XIAP、Smac/DIABLO基因参与细胞凋亡的调节.     

Ghrelin及GHSR在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达

目的 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织ghrelin以及生长激素促分泌素受体(GHSR)的表达,探讨ghrelin在ANP发病机制中的作用.方法 70只大鼠按完全随机法分为ANP组和对照组,每组35只.采用逆行胆胰管注射4％牛磺胆酸钠的方法制备大鼠ANP模型;对照组仅开腹,轻翻动胰腺.术后3、6、12、24、48 h处死大鼠,取血测血清淀粉酶,取胰腺行常规病理检查并评分,应用RTPCR和蛋白质印迹法检测胰腺组织ghrelin、GHSR的mRNA及蛋白表达.结果 ANP组大鼠血清淀粉酶浓度从造模后3h开始升高,6h达(8244±2950) U/L,显著高于对照组(P＜0.05);胰腺病理损伤及评分随时间延长逐渐加重,24h评分为(11.91 ±1.31)分,显著高于对照组的(3.12±1.60)分.ANP组大鼠胰腺组织ghrelin mRNA和GHSR mRNA表达随时间的延长而逐渐升高,48 h达峰值,分别为1.29 ±0.64和0.94±0.16,均显著高于对照组的0.58 ±0.05和0.19±0.03(P值均＜0.05).ANP组大鼠胰腺组织ghrelin和GHSR蛋白的表达在48 h时达峰值,分别为3.05±0.48和2.34±0.32,均显著高于对照组的2.18±0.23和1.55 ±0.10(P值均＜0.05).结论 ANP大鼠胰腺组织ghrelin、GHSR的mRNA及蛋白表达均显著增加,且与胰腺病变严重程度有关.     

高脂血症、微循环障碍与急性胰腺炎关系的探讨

目的探讨高脂血症（特别是高三酰甘油血症）、微循环障碍与急性胰腺炎严重度的关系,加强对高脂血症性急性胰腺炎（hyperlpidemic acute pancreatitis,HLAP）的认识。方法将我院2006年1月～2009年8月收治的143例急性胰腺炎患者,按临床表现分为轻型急性胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）82例,占57.34%,重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）61例,占42.66%;按病因分为脂源性胰腺炎（hyperlipemia acute pancreatitis,HLAP）42例,占29.37%,非脂源性胰腺炎（non-hyperlipemia a-cute pancreatitis）101例,占70.63%。探讨高脂血症与MAP和SAP的关系。结果脂源性胰腺炎与非脂源性胰腺炎组比较,全血黏度（高切）、全血黏度（低切）、CRP差异有统计学意义（P〈0.001）,脂源性胰腺炎组并发症发生率较高且严重。结论故高三酰甘油（TG）血症、微循环障碍是AP持续和加剧损害的因素。