肝移植术后HBV再感染的治疗

目的分析肝移植术后乙型肝炎病毒（HBV）再感染患者的抗病毒治疗与乙肝病毒基因变异情况。方法317例HBV相关终末期肝病患者肝移植术后15例单独使用LAM，302例使用小剂量乙肝免疫球蛋白（hepatitis B immune globulin，HBIG）和拉米夫定（lamivudine，LAM）（或adefovir dipivoxil，ADV）联合预防HBV再感染，同时检测HBV血清标志物、血清HBV DNA、YMDD区变异、及肝活检组织乙型肝炎标记物。结果术后LAM组有4例术前HBV DNA阳性患者术后HBV再感染，LAM＋HBIG联合用药组16例HBV再感染，两组术后HBV再感染差异有统计学意义（26．7％VS．5．30％，P〈0．01）。317例患者术后12例发生YMDD变异，发生率为3．79％，再感染病例60％（12／20）。经加用ADV治疗后5例HBV DNA转阴性，4名患者HBV DNA滴度下降，肝功能显著改善，3例发生纤维淤胆性肝炎，2例死亡，1例经再次肝移植治愈。结论小剂量HBIG＋LAM可以有效地预防肝移植术后HBV再感染；在小剂量HBIG＋LAM用药基础上HBV再感染可能产生YMDD（tyrosine，methionine，aspartate，aspartate）变异；ADV可作为LAM耐药后用药，对于发生突破性感染的患者应采取以ADV为主的综合治疗。     

原位肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的预防(附68例报告)

目的探讨原位肝移植术后乙型肝炎病毒(HBV)再感染的预防。方法68例病人分别为慢性乙型重型肝炎、终末期肝硬化和肝硬化合并肝癌病人,移植前后给予抗病毒药物预防HBV再感染,拉米夫定2例,拉米夫定加乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)63例,阿德夫韦加HBIG3例;观察预防性治疗后的临床表现、血清HBV、HBVDNA及肝活检免疫组织化学法检测等指标。结果应用拉米夫定的2例病人,有1例发生再感染,其血清HBsAg、抗Hbe、抗HBc和HBVDNA均呈阳性,肝活检免疫组织化学检测有HBsAg表达。用拉米夫定加HBIG预防的63例中,有2例再感染,血清均呈HBsAg、抗HBe和抗HBc阳性,肝活检免疫组织化学法检测有HBsAg表达,其中1例血清HBVDNA阳性。用阿德夫韦加HBIG预防的3例中,血清学和肝活检免疫组织化学法检测均无HBsAg表达。结论原位肝移植术是治疗HBV感染相关的终末期肝病的有效手段,拉米夫定加HBIG或阿德夫韦加HBIG联合应用可以有效地预防HBV的再感染。     

肝移植后采用阿德福韦二匹伏酯联合抗乙型肝炎球蛋白预防乙型肝炎复发

目的 探讨阿德福韦二匹伏酯(ADV)联合抗乙型肝炎球蛋白(HBIG)预防存在YMDD变异者肝移植后乙型肝炎复发的效果.方法 16例患者肝移植前乙型肝炎病毒(HBV)DNA阳性,其HBV DNA聚合酶发生YMDD变异,对拉米夫定产生耐受,术前患者开始口服ADV,并肌肉注射小剂量HBIG,以预防移植后乙型肝炎复发.术后监测移植肝功能以及血清和肝组织中HBV标志物.结果 术后平均随访19.4个月,除1例死于肝癌复发外,其余患者存活.15例于术后4周内、1例于术后6个月HBVDNA转阴,此后HBV DNA持续阴性.结论 采用ADV联合小剂量HBIG肌肉注射可以有效预防存在YMDD变异者肝移植后的乙型肝炎复发.     

重型乙型肝炎肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的防治

目的探讨重型乙型肝炎肝移植术后乙型肝炎病毒(HBV)再感染的防治。方法回顾性分析了73例重型乙型肝炎患者,移植前后给予抗病毒药物预防乙型肝炎病毒再感染,拉米夫定 乙肝免疫球蛋白(HBIG)71例,阿德夫韦 拉米夫定 乙肝免疫球蛋白2例,观察临床表现、血清HBSAg、血清HBeAg、血清HBV DNA及肝活检免疫组织化学检测等指标。结果应用拉米夫定 HBIG预防的71例中,有2例再感染,血清HBSAg为阳性,肝活检免疫组织化学检测有HBSAg表达,其中1例血清HBV DNA阳性,另1例经治疗后HBSAg又转阴。用阿德夫韦 拉米夫定 HBIG预防的2例中,血清学和肝活检免疫组织化学检测均无HBSAg表达。结论拉米夫定 HBIG或拉米夫定 阿德夫韦 HBIG联合应用以及合理的使用免疫抑制剂可以有效预防重型乙型肝炎患者移植术后乙型肝炎病毒的再感染。     

肝移植术后HBV再感染患者HBV X区基因变异研究

目的 分析肝移植术后HBV再感染患者血清乙型肝炎病毒(hepatitis B viral,HBV)DNA X区基因的变异情况.方法 选择2002年6月至2003年12月期间因乙肝相关终末期肝病在本院行肝移植手术的320例患者,移植术后患者血清采用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBV DNA X区,并做直接测序分析.术后随访1.5～3年.结果 本组11例患者肝移植前、后HBV X区基因序列都有程度不等的点突变(5～39),有6例术前与术后同时具有nt1762(A→T)、ntl764(C→A)变异,11例患者同时存在ntl636～nt1741多处位点变异.结论 HBV DNA X区核苷酸nt1762、nt1764双位点变异在肝移植术后HBV再感染患者中是常见现象,免疫抑制剂不能改变该双位点变异.     

原位肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的相关因素分析

目的 分析原位肝移植（OLT）术后HBV再感染的相关因素,评价联合应用乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）和核苷（酸）类似物预防HBV再感染的疗效.方法 收集2003年10月-2007年8月在中山大学附属第三医院行OLT治疗的160例HBV相关性终末期肝病患者,117例患者术前服用核苷（酸）类似物.所有患者术后长期肌肉注射HBIG,并联合服用核苷（酸）类似物,采用回顾性调查方法分析患者术前资料,并前瞻性长期随访OLT术后HBV再感染情况.正态分布计量资料2组间的比较采用独立样本t检验;组间率的比较采用Fisher＇s精确概率检验,P〈0.05表示差异具有统计学意义.结果 160例患者中,19例患者出现HBV再感染,再感染率为11.88%（19/160）.患者术前HBV DNA载量、HBeAg状态及抗病毒治疗时间与OLT术后HBV再感染之间无显著相关性（r值分别为0.108、0.127和0.033,P值均〉0.05）.19例HBV再感染患者中有17例是长期使用拉米夫定治疗的患者,其中8例酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸（YMDD）变异株阳性,其HBV DNA载量为（7.0±2.0）log拷贝/mL,而YMDD变异阴性组为（3.2±2.5）log拷贝/mL,2组比较差异有统计学意义（t=3.531,P=0.003）.17例长期服用拉米夫定治疗的患者中,12例加用阿德福韦酯,3例改用恩替卡韦,均获得满意疗效.结论 OLT术后长期小剂量肌肉注射HBIG,并联合核苷（酸）类似物可有效预防HBV再感染.OLT术后使用拉米夫定易出现YMDD变异,而YMDD变异是HBV再感染的重要因素,临床上要予以重视.     

肝移植术后乙型肝炎病毒再感染的预防和处理

效果.结论 小剂量HBIG和拉米夫定联合应用预防原位肝移植后HBV再感染疗效确切;对于HBV再感染的患者则应分别采用提高HBIG剂量、加用阿德福韦或改用恩替卡韦等措施;对证实为术后乙型肝炎复发患者,需同时应用合理的护肝药物、免疫调节和抗肝纤维化等治疗以促进移植肝组织学改善,恢复肝功能正常.     

拉米夫定及乙型肝炎免疫球蛋白预防肝移植后乙型肝炎复发的疗效观察

目的:研究单用拉米夫定或与乙型肝炎(乙肝)免疫球蛋白(HBIG)联合应用对乙肝相关肝病病人肝移植术后预防乙肝复发的效果。方法:应用酶联免疫试验(EIA)检测HBsAg、抗鄄HBs、HBeAg、抗鄄HBe及抗鄄HBc;用聚合酶链反应法(PCR)检测乙肝病毒(HBV)DNA。26例单用拉米夫定15例,联合应用拉米夫定和HBIG11例。结果:26例乙肝相关肝病病人于肝移植术后随访3～24个月,2例死亡,4例出现乙肝复发,其余20例病人HBsAg持续阴性。结论:肝移植是治疗乙肝终末期病人的有效方法,拉米夫定与HBIG联合应用可有效预防肝移植术后乙肝复发。     

湖南省怀化市少数民族及汉族慢性乙型肝炎患者病毒基因分型及临床分析

目的 了解湖南省怀化市少数民族及汉族慢性乙型肝炎患者病毒基因型分布特点及不同基因型与临床肝病的相关性.方法 采用S基因序列分析法对湖南省怀化市111例慢性乙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒基因分型,并分析相关流行病学、病例构成、HBV DNA载量、HBeAg阳性率及肝功能情况.结果 该地区111例慢性乙型肝炎患者HBV基因型检测到B型及C型,其中B型90例(81.08%),C型19例(17.12%),2例(1.80%)无法分型. B、C基因型分布情况:33例少数民族组患者B基因型31例(93.93%),C型2例(6.07%);76例汉族组患者B基因型59例(77.63%),C基因型17例(22.37%).C基因型患者肝硬化及肝癌构成比高于B基因型患者,HBV DNA载量、HBeAg阳性率及球蛋白水平高于B基因型,而白蛋白水平低于B基因型.结论 该地区乙型肝炎病毒基因型以B型为优势基因型,少数民族与汉族患者HBV基因型构成有显著差异,C基因型患者HBeAg血清转换率低,可能较易发生肝病进展.     

乙型肝炎病毒基因分型与拉米夫定临床应用反应

目的了解常州地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特征,探讨基因型与肝功能损害、病毒复制水平及其与拉米夫定疗效关系.方法 76例慢性乙型病毒性肝炎患者每天口服拉米夫定100mg治疗,并于治疗4～6周时测定不同基因型患者的丙氨酸转氨酶(ALT)和HBV DNA,治疗48周后测定HBV DNA反跳和YMDD变异.采用巢式聚合酶链反应(nest PCR)法扩增HBV S基因区,以4色荧光标记PCR产物末端,在以毛细管高压电泳为核心技术的核酸序列分析仪上自动测序,将测序结果与基因库中登录的标准基因型序列相比较.结果 76例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA基因分型示:B型株感染26例(34.2%),C型株感染50例(65.8%).B和C基因型患者ALT值分别为(246.3±138.8)U和(283.7±125.6)U,(t=0.335,P>0.05),HBV DNA含量分别为107.124±101.49和107.189±101.56拷贝/ml(t=0.138, P>0.05),HBeAg阳性数分别为20例和41例(χ2=0.159,P>0.05).拉米夫定治疗4～6周后,B基因型和C基因型患者ALT、HBV-DNA(阴转)、HBV DNA(拷贝/ml)均呈良好恢复状态,两组间差异无显著性.治疗48周后,HBV DNA反跳者B基因型20例,C基因型16例(χ2=13.49,P<0.001).结论常州地区HBV DNA基因型以单一B或C型为主;不同基因型患者ALT水平、病毒复制水平以及HBeAg表达水平差异均无显著性,拉米夫定对C基因型患者的疗效优于B基因型.     

基因直接测序分析HBV多聚酶区基因突变与基因分型

HBV是一种嗜肝DNA病毒,其基因组为3200bp的双链DNA分子,按照全基因序列的异质性,HBV可分为A-H等8个基因型。HBV的变异率极高,而且具有很高的复制率,在由共价闭合环状DNA反转录过程中因HBV聚合酶和反转录酶缺乏校正活性,因此不能去除错误掺入的碱基。HBV常引起慢性持续感染,在长期反复感染和复制中发生变异,并受人体免疫应答、抗病毒药物等环境因素的影响。核苷（酸）类似物拉米夫定和替比夫定等抗病毒药物的作用靶点均为HBV聚合酶和反转录酶,     

乙型肝炎病毒感染与肾小球肾炎

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与肾小球肾炎，尤其是与ＩｇＡ肾病（ＩｇＡＮ）、狼疮肾炎（ＬＮ）间的关系，并初步观察α干扰素（αＩＦＮ）对成人乙肝相关性肾炎（ＨＢＶＧＮ）的疗效。方法对１５７例肾活检标本采用免疫组织化学的方法检测肾组织中ＨＢＡｇ，配对比较３２例ＩｇＡＮ，３０例ＬＮ中ＨＢＡｇ阳性组与阴性组肾组织病理改变，和４２例ＧＮ中ＨＢｃＡｇ阳性组与阴性组对激素治疗的反应，并随访３例ＨＢＶＧＮ经αＩＦＮ治疗的临床演变。结果ＩｇＡＮ中ＨＢｃＡｇ阳性组肾小管及间质病变程度均较阴性组严重（Ｐ＜００５）；ＬＮ中ＨＢｃＡｇ阳性组肾小球硬化及间质炎症程度较阴性组显著（Ｐ＜００５）；ＨＢｃＡｇ阳性组对激素治疗的反应较阴性组差（Ｐ＜００５）；３例ＨＢＶＧＮ经αＩＦＮ治疗后临床症状缓解。结论肾小球肾炎部分病例起病与ＨＢＶ感染有关，ＩｇＡＮ、ＬＮ与ＨＢＶ感染有相关性，αＩＦＮ对成人ＨＢＶＧＮ可能有良好的治疗作用。     

胚胎中HBV mRNA的表达与父婴传播关系的研究

目的:通过检测HBV感染父亲体外受精胚胎中的HBV mRNA以明确HBV父婴传播的意义。方法:以慢性HBV感染父亲体外受精后遗弃胚胎为研究对象,用单细胞RT-PCR检测胚胎中的HBV mRNA。结果:父亲HBV血清标志物阳性者而母亲为HBV血清标志物阴性的9例18个废弃胚胎,在1个胚胎中检测到HBVmRNA,阳性率为1/18(5.6%),84个阴性对照胚胎中未检出特异性HBV mRNA。随访发现实验组和阴性对照组之间临床妊娠率分别为33.3%和44.0%,两者之间差异无明显意义(P>0.05);早期流产率分别为33.3%和9.1%,两者之间无明显统计学意义(P>0.05);胚胎中HBV mRNA信号阳性父亲的体外受精胚胎成功种植,但发生了早期流产;两组均未发生子代HBV感染。结论:HBV mRNA的阳性结果证实了HBV可以通过精子进入早期卵裂胚胎并在其中复制,可能是父婴传播的主要途径;而且HBV可能会干扰胚胎的发育,进一步造成流产等不良结果。     

乙型肝炎病毒感染与小儿膜性肾炎

目的研究ＨＢＶ感染在小儿膜性肾炎的致病作用。方法３２例肾穿刺活组织检查诊为膜性肾炎的小儿作为研究对象。所有病例检测血清ＨＢＶ感染标志物，２９例应用免疫组化技术检测肾组织ＨＢＶ抗原，１２例应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测肾组织ＨＢＶＤＮＡ，采用３２Ｐα－ｄＣＴＰ标记的探针；２８例应用原位杂交检测肾组织ＨＢＶＤＮＡ，采用地高辛标记的探针。结果三种方法综合分析，３２例膜性肾炎中，肾组织ＨＢＶ抗原和（或）ＨＢＶＤＮＡ阳性者共３０例，达９３．７４％。结论进一步证实ＨＢＶ感染在我国小儿膜性肾炎起主要致病作用     

乙型肝炎后肝硬化肝移植乙型肝炎病毒再感染检测

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA、YMDD变异及血清标志物在乙型肝炎肝硬化患者肝移植后HBV再感染检测的临床意义。方法定量聚合酶链反应（PCR）检测HBV DNA；HBV PCR产物限制性片段长度多态性分析检测YMDD变异；酶联免疫检测HBV血清标志物；分析乙型肝炎患者肝移植后YMDD变异、HBV DNA及血清标志物检测结果。结果乙型肝炎肝硬化患者肝移植术后HBV再感染率为8．9％（17／189）；YMDD变异病例达HBV再感染病例58．8％（10／17）；HBV DNA定量检测有较高的灵敏度，能早期诊断HBV的再感染，有利于临床治疗；对HBV DNA阴性但HBsAg阳性病例，PreS1和HBeAg血清标志物可用于病毒复制的补充检测。结论乙型肝炎肝硬化患者肝移植后预防乙型肝炎复发应采用HBV DNA、YMDD变异及血清标志物联合检测。     

重组逆转录病毒转导HBV载体表达显性阴性突变体抗HBV作用的研究

目的 探讨重组逆转录病毒转导HBV载体表达显性阴性突变体的抗HBV作用.方法 在逆转录病毒载体中插入两种不同类型表达显性阴性突变体的HBV基因复制单元,制备重组逆转录病毒pRV-CP、pRV-CS和空载体G1Na对照,并转染HepG2.2.15细胞,ELISA法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBV DNA,PCR检测上清液中重组HBV颗粒.结果 转染HepG2.2.15细胞后3 d、5 d、7 d、9 d和11 d,pRV-CP、pRV-CS和G1Na对照组对HBsAg表达的平均抑制率分别为(28.9±4.73)%(P＜0.01)、(39.3±7.04)%(P＜0.01)和(2.6±3.77)%;对HBeAg表达的平均抑制率分别为(40.38±2.59)%(P＜0.01)、(33.1 4±4.27)%(P＜0.01)和(3.1±3.02)%;对HBV复制的抑制率分别为67.2%和55.8%,对照组为13.4%.只有pRV-CP组培养上清液中检测出突变型HBV颗粒.结论 重组逆转录病毒能转导HBV载体表达显性阴性突变体,对HBV复制及抗原表达有抑制作用,有望用于抗HBV治疗.     

HBV感染者胚胎中HBV DNA的测定及其相关因素分析

目的检测父/母为乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者的胚胎中是否存在HBV DNA,探讨HBV经配子垂直传播的可能性,同时评估影响垂直传播发生的相关因素。方法收集单方HBV感染的229对夫妻的310个废弃胚胎。采用套式聚合酶链反应(PCR)法测定胚胎样本中的HBV DNA。采用Logistic回归分析患者年龄、血清HBV DNA载量、血清HBV多种抗原或抗体存在情况及授精方法等因素与HBV DNA存在的相关性。结果 7.74%(24/310)的胚胎中检出了HBV DNA;血清HBV DNA载量与胚胎中存在HBV DNA呈显著正相关[OR4.128,95%CI(1.319,12.914),P=0.015];授精方式(IVF或ICSI)的差异对胚胎HBV DNA阳性检查率几乎无影响(P0.05);同一对夫妻的多个胚胎中只有部分胚胎存在HBV DNA。结论垂直传播可能是HBV重要的传播途径之一。对于HBV DNA高载量的父/母,自然受孕或助孕治疗前建议进行针对性治疗,以降低胚胎感染HBV的风险。     

3.0倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建3.0倍乙型肝炎病毒(HBV)全基因的真核表达载体,稳定转染HepG2细胞,建立HBV感染的细胞模型.方法:从pUC19-3HBV载体上将约9.6kb的3.0倍HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRⅠ和HindⅢ位点,将构建的pcDNA3-3HBV以脂质体转染HepG2肝癌细胞,经G418稳定筛选.ELISA检测转染细胞培养上清中HBsAg、HBeAg的表达.RT-PCR检测转染细胞中HBpreS2、HBX的表达.结果:成功构建了3.0倍HBV全基因真核表达载体,稳定转染HepG2后,建立了新的肝癌细胞系HepG2.3Z,其培养上清中可检测到HBsAg、HBeAg的稳定表达,并可检测到HBpreS2、HBX RNA在转染细胞中表达.结论:构建的3.0倍HBV全基因真核表达载体可介导病毒复制,其稳定转染的细胞可作为一种新型的HBV体外感染模型.     

HLA associations with HBV carriage and proteinuria

Human leucocyte antigen (HLA) associations have been reported in children with hepatitis B virus (HBV) associated membranous nephropathy (MN). In a previous study, we found an association with HLA DQB1*0603 in black children with HBVMN. To determine whether HLA DQB1*0603 predisposes to HBV carriage and development of abnormal proteinuria, we studied 70 family members of 14 children with HBVMN positive for HLA DQB1*0603. HBV was determined using third generation ELISA, slot-blot hybridisation, and nested polymerase chain reaction. HLA class I antigens were determined using a two-staged lymphocytotoxic test whereas class II antigen typing was done using sequence-specific primers. Abnormal proteinuria was defined by a protein/creatinine ratio > or =0.2. Associations of HLA DQB1*0603 with HBV carriage and abnormal proteinuria were determined using the mean probability ratio (LOD scores). Forty-seven (67%) family members were positive for HBV infection. Nineteen (27%) had abnormal range proteinuria. LOD scores in the study subjects with DQB1*0603 who were HBV negative versus those with DQB1*0603 who were HBV positive was not significant (anti-log sum =2.0559 and average 0.23). When a similar calculation was made for abnormal proteinuria, there were no significant findings (anti-log sum =3.8587 and average 0.43). This lack of association of HLA DQB1*0603 with either HBV carriage or abnormal proteinuria in family members suggests that additional factors may play a role in predisposing children to chronic HBV carriage and the development of MN. We therefore conclude that the main effect of HLA DQB1*0603 that distinguishes family members from HBVMN is the degree of proteinuria, which is a reflection of the severity of glomerular basement membrane damage in the latter.     

不同HBVDNA水平乙型病毒性肝炎肝硬化患者的临床特征及HBeAg状态比较

目的研究乙型病毒性肝炎（乙肝）肝硬化活动期患者HBVDNA水平与HBeAg状态的分布和临床特点及意义。方法调查337例乙肝肝硬化住院患者,采用荧光定量PCR方法检测HBVDNA载量,MEIA法检测HBV血清标志物,常规方法检测肝功能,同时行超声检查。比较不同HBVDNA水平患者中HBeAg阳性和阴性、不同Child—Push分级和肝癌患者的比例,以及不同年龄患者中不同HBVDNA水平和HBeAg状态患者的比例。结果80．4％（271／337）患者HBVDNA阳性,31．5％（106／337）患者HBeAg阳性,68．5％（231／337）患者HBeAg阴性。HBVDNA水平越高者中HBeAg阳性者比例越高,HBeAg阴性者比例越低;不同HBVDNA水平患者中不同Child-Pugh分级患者比例差异无统计学意义,但HBVDNA3～41g拷贝／ml患者中肝癌的比例高于HBVDNA〈31g拷贝／ml患者（P=0．014）和≥71g拷贝／ml患者（P=0．009）;HBeAg阴性患者比例随年龄增大而增加,但HBeAg阳性患者与阴性患者的临床特征差异无统计学意义。结论绝大多数乙肝肝硬化患者HBVDNA阳性,且2／3患者HBeAg阴性。长期抗病毒治疗可能有助于改善乙肝肝硬化患者的病情和预后。