重组水蛭素对大鼠脑出血血肿周边组织炎性反应的干预作用

目的 探讨重组水蛭素对大鼠脑出血血肿周边组织炎性反应的干预作用。方法 采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,分别于注血时、注血后6h及12h血肿内给予重组水蛭素干预;分别检测脑出血组、各水蛭素干预组血肿周边组织肿瘤坏死因子（TNF-α）和细胞间黏附分子-1（ICAM—1）表达以及髓过氧化物酶（MPO）的活性,并与对照组比较。结果 脑出血后3d,血肿周围组织TNF-α免疫反应（IR）细胞数、ICAM—1阳性微血管数和MPO活性明显升高（均P〈0．01）;注血同时及注血后6h给予重组水蛭素可显著减少TNF—α、ICAM—1的表达,降低MPO活性（P〈0．01～0．05）,而出血后12h给予重组水蛭素干预对三者的表达无明显影响。结论 凝血酶参与脑出血血肿周围组织的炎性反应,并可能与TNF—α及ICAM—1的表达有关;出血后6h内采取抗凝血酶治疗可减轻局部炎性反应。     

水蛭素对大鼠实验性脑出血神经组织的保护作用

目的通过实验性大鼠脑出血模型研究水蛭素对脑出血后神经组织的保护作用。方法自体动脉血注入法建立实验性脑出血动物模型,而后实验组注入100U水蛭素,对照组注入生理盐水。于术后2d、3d和5d处死动物。分别行HE染色、caspase-3免疫组化染色和TUNEL染色。结果水蛭素干预组与对照组比较,血肿周围的细胞坏死和组织水肿明显减轻。各时间点caspase-3和TUNEL阳性细胞数均明显减少。结论脑出血后局部应用水蛭素可以减轻脑出血后的组织水肿,抑制神经细胞凋亡,对血肿周围的神经组织具有保护作用。     

局部应用重组水蛭素对脑出血模型大鼠血肿周边组织损伤的干预作用

目的探讨脑出血后局部应用凝血酶特异抑制剂——重组水蛭素治疗血肿周边组织损伤的价值和治疗时间窗。方法采用自体血注入方法建立大鼠脑出血模型，分别于50μl自体血注入同时、3h后以及9h后血肿内给予10U重组水蛭素干预，术后72h记录大鼠神经功能缺损评分(neurological deficit score，NDS)，检测血肿周边组织髓过氧化物酶(MPO)的活性、脑水含量及TUNEL阳性细胞数量的变化，并通过检测血红蛋白含量评价水蛭素对血肿容量的影响。结果脑出血同时及3h后给予水蛭素可显著减轻大鼠神经功能缺损。降低局部MPO活性、减少脑水含量及TUNEL阳性细胞数量，9h后给予水蛭素仍可减轻局部组织脑水含量。与出血组比较，局部应用水蛭素未导致血肿红蛋白含量增加。结论脑出血后早期(9h内)局部应用水蛭素可减轻血肿周边组织的白细胞浸润、脑水肿和细胞死亡，且无明显再出血副作用，抗凝血酶治疗有可能成为防治出血性脑损伤的有效措施之一。     

水蛭素对抗脑出血后脑水肿作用机制的研究

目的探讨凝血酶在脑出血后脑水肿形成中的作用和水蛭素抗水肿的作用.方法健康wistar大鼠80只,随机分为4组,每组20只.A组生理盐水+生理盐水;B组生理盐水+水蛭素;C组血+生理盐水;D组血+水蛭素.采用立体定向注射方法,用微量注射器在右侧尾状核部位注入自体未凝血(C、D组)或等量生理盐水(A、B组)50μl,留置20min后同部位2次注射10μl生理盐水(A、C组)或等量水蛭素溶液(B、D组,浓度2u/μl).术后第3d断头取脑,测定脑水含量.结果 A、B组比较无明显差异外,其余各组间均有统计学意义(P＜0.05).结论凝血酶可以引起脑出血后脑组织水肿,水蛭素可以抑制凝血酶所引起的脑水肿,且水蛭素本身不对脑组织产生任何负面影响.     

凝血酶对脑组织毒性损伤机制及水蛭素、尼莫地平干预作用的研究

目的 探讨凝血酶对脑组织损害的机制,及凝血酶抑制剂水蛭素和尼莫地平对其的影响。方法 将不同剂量的凝血酶或／和水蛭素注入SD大鼠尾状核,尼莫地平腹腔注射。采用干湿重法、免疫组化法、原位末端缺口标记法及镜下观察在不同时点大鼠脑含水量、细胞骨架蛋白、神经元凋亡数及组织学改变。结果 （1）大剂量凝血酶组出现以下改变：早期（4h）明显味水肿,其高峰时间为24～48h,3d后水肿逐渐消退,7d趋于正常;细胞骨架蛋门出现不同程度变形甚至崩解,24h损伤进一步加重,导致不可逆损伤,3～7d神经细胞坏死;神经细胞凋亡,其高峰时间为24～48h,持续到7d;小剂量凝血酶组及生理盐水组无以上作用。（2）水蛭素能特异性抑制凝血酶的作用,而钙离子拈抗剂可减轻或延迟细胞的损伤。结论 大剂量凝血酶可导致脑水肿、脑细胞不同逆损伤及脑细胞凋亡,其高峰时间均在24～48h。早期干预可改善脑出血（ICH）后血肿周围脑组织水肿和继发性神经几损伤,改善ICH的预后。     

凝血酶与神经细胞凋亡的实验观察

目的 观察凝血酶与脑细胞凋亡的关系及使用凝血酶抑制剂(如水蛭素)及钙离子拮抗剂(尼莫地平),能否减轻凝血酶对脑细胞的毒性损伤、存在治疗的有效时间。方法 分别以不同剂量的凝血酶注入SD大鼠尾状核,建立SD大鼠模型,在普通光镜(采用HE染色,TUNEL法)及电镜下观察脑细胞凋亡。SD大鼠随机分为6组。1组:生理盐水组;2组:小剂量凝血酶组;3组:大剂量凝血酶组;4组:小剂量凝血酶与小剂量水蛭素同时注入组;5组:大剂量凝血酶与大剂量水蛭素同时注入组;6组:尼莫地平组。每组每时相(4h、24h、48h、3d、7d)各5只SD大鼠)。结果 建立动物模型后各时相点大剂量凝血酶组凋亡细胞数与其余各组比PO.05。结论 大剂量凝血酶可导致神经细胞凋亡.早期(4h)即出现,其高峰时间在24～48h,可持续1周以上,水蛭素能特异性抑制凝血酶的作用,而钙离子拮抗剂可减少或延迟凋亡细胞的出现。脑出血后血肿释放的凝血酶是早期诱导细胞凋亡的重要因素,如能尽早抗凝血酶治疗或抗凋亡治疗(本实验提示最好在48h内),将为脑出血治疗提供新的途径。     

水蛭素和重组链激酶联合应用于脑出血血肿腔中的实验研究

目的研究水蛭素和重组链激酶联合应用于脑内出血(ICH)血肿腔中对血肿周围脑组织的影响.方法 72只SD雄性大鼠制成ICH模型,随机分为对照组、重组链激酶组、水蛭素 重组链激酶组(联合组),各组分别在ICH后8 h、16 h、24 h、48 h向血肿腔中注入生理盐水、重组链激酶、或重组链激酶加水蛭素.ICH后72 h处死大鼠,观察脑组织中的含水量、Na 、K 以及血脑屏障通透性的变化.结果在ICH后8 h、16 h、24 h、48 h应用重组链激酶,可引起脑组织含水量增加以及Na 、K 的变化(P<0.05),在ICH后8 h重组链激酶组,脑组织中伊文思蓝(Evans blue,EB)含量明显升高(P<0.05).联合组与重组链激酶组比较脑组织的含水量在8 h、16 h、24 h、48 h明显降低(P<0.05),脑组织中EB含量在8 h、16 h、24 h、48 h也明显降低(P<0.05).结论 ICH血肿腔内单独应用重组链激酶可加重ICH血肿周围脑组织的损伤,联合应用水蛭素不但可防治重组链激酶溶化血块时对脑组织的损伤,而且还可降低血肿本身所释放的毒性物质所引起的脑水肿及血脑屏障的破坏.     

大鼠脑出血后Fas表达与神经细胞凋亡的关系及氟桂利嗪的干预作用

目的 观察大鼠脑血肿周围脑组织Fas的表达和神经细胞的凋亡,探讨氟桂利嗪能否下调血肿周围Fas的表达而减轻神经细胞凋亡.方法 采用自体股动脉血注入大鼠尾壳核建立脑出血模型,分别于术后6h、12h、24h、2d、4d 5个时间点取脑组织,应用免疫组化方法 检测血肿周围组织Fas的表达情况,TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡.结果 脑出血组大鼠脑血肿周围组织Fas的表达及细胞凋亡明显高于其他组(P＜0.01),氟桂利嗪治疗组上述指标均低于脑出血组(P＜0.01),而高于假手术组(P＜0.01), Fas的表达与血肿周围神经细胞的凋亡呈正相关(r=0.953,P <0.05).结论 Fas、神经细胞凋亡参与了大鼠脑血肿周围脑组织损伤的病理生理过程;氟桂利嗪能抑制血肿周围Fas的表达,减轻神经细胞凋亡.     

凝血酶预处理对脑出血大鼠神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 探讨凝血酶预处理(TPC)对脑出血(ICH)大鼠神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响.方法 60只成年雄性SD大鼠随机平均分为10组:假手术(SO)组、TPC 3 h组、TPC6 h组、TPC 12 h组、TPC 1 d组、TPC 3 d组、TPC 7 d组、TPC 14 d组、TPC 21 d组及ICH组.TPC各组大鼠与ICH组大鼠予以右侧尾状核注射凝血酶10 U诱发脑出血,SO组大鼠予以同部位注射生理盐水50μl,用dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色及免疫组化染色法观察神经细胞凋亡及caspase-3表达的情况.结果 ICH组与TPC各组凋亡细胞及cmpase-3表达均明显多于SO组(均P<0.01),TPC 12 h、TIC 1 d、TPC 3 d、TPC 7 d、TIC 14 d和TPC 21 d组细胞凋亡及caspase-3阳性表达明显少于ICH组(均P<0.05),其中TIC 7 d组凋亡细胞数及caspase-3阳性表达最少(P<0.05～0.01).结论 TPC可减少ICH所致的神经细胞凋亡及caspase-3表达,其中以TPC 7 d的作用最强.     

黄芪注射液对脑出血大鼠细胞凋亡影响的研究

目的 研究脑出血大鼠细胞凋亡的规律及黄芪注射液对出血后脑组织含水量和血肿周围区细胞凋亡的影响.方法 采用肝素化Ⅶ型胶原酶脑内注入法制作大鼠(160只)脑出血模型.制模后根据药物干预的时间随机分成4个治疗组(手术同时组,术后6 h组、12 h组、24 h组,每组32只)和出血对照组(共32只).各治疗组每日经腹腔给予黄芪注射液1次,各组分别于第4 d及第7 d处死.再从上述5组中各选取12只大鼠用于脑组织含水量测定(干湿法),观察不同时间开始治疗对大鼠脑组织含水量、血肿周围区细胞凋亡(脑组织切片TUNEL荧光染色)的影响.结果 治疗组[出血同时组(第4 d)、6 h组(第4 d、7 d)、12 h组(第4 d)]脑组织含水量较出血对照组明显减少(均P<0.01);脑出血后6 h血肿周围凋亡细胞开始出现,3 d达高峰,7 d后明显减少;各治疗组血肿周围细胞凋亡均明显降低,出血同时治疗组和6 h治疗组比24 h治疗组细胞凋亡率明显降低(均P<0.01);脑出血后存在血管内皮细胞凋亡.结论 脑出血后血肿周围神经细胞凋亡是脑出血后继发性神经损伤机制之一;黄芪注射液治疗脑出血,具有减轻脑水肿和神经细胞凋亡作用,以早期用药疗效更好.     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡与自由基水平的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织不同自由基水平对于细胞凋亡的影响。方法成年SD大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、1mg/kg依达拉奉组、3mg/kg依达拉奉组，各组又根据造模后处死动物的不同时间（6h，12h，24h，48h，72h，7d，14d）分为七个亚组，假手术组中每个亚组1只大鼠，其余三组中每个亚组6只大鼠。左尾壳核立体定向注入白体血80μL，制作大鼠脑出血动物模型。分光光度计法检测血肿周围丙二醛（malonaldehyde，MDA）及羟自由基含量，末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL）检测血肿组织周围细胞凋亡数，并分析血肿周围组织自由基水平和凋亡相关性。结果（1）模型组羟自由基及MDA含量较假手术组明显增加，四组问进行统计学分析，具有显著性差异。（2）模型组和两种剂量的依达拉奉组均于6h即可观察到TUNEL阳性细胞，24h明显增加，72h时达到高峰，7d时明显减少，14d时于血肿周边仍可见少量阳性细胞。（3）凋亡细胞数与脑组织产生自由基能力（r=0．2003）及MDA含量（r=0．6563）具有相关性。结论脑出血后细胞凋亡数和自由基水平变化趋势相同，二者具有相关性，提示自由基可能参与诱导出血后神经元及胶质细胞凋亡。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量、细胞凋亡及行为变化的研究

目的通过观察大鼠脑出血模型血肿周围脑组织含水量、神经细胞凋亡及大鼠神经行为的动态变化,为临床有效治疗脑出血提供实验依据。方法制作胶原酶大鼠脑出血模型,检测大鼠脑出血后不同时间点血肿周围脑组织含水量、神经细胞调亡及神经功能缺损程度的动态变化。结果脑组织含水量在建模后2h尚未出现,9h开始出现,1～3d达到高峰,3d后逐渐消退,7d趋于正常;TUNEL阳性细胞在建模后2h只有少量,9h已明显增加,并持续增多,3d达到高峰,7d数量下降;建模后2h出现神经功能缺损症状,9～24h最明显,3d后开始减轻,7d明显减轻。结论出血后9h是临床治疗的重要时间窗。     

大鼠脑出血模型中神经细胞凋亡与自由基水平的相关性

目的 研究脑出血后血肿周围组织不同自由基水平对于细胞凋亡的影响.方法 成年SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、1mg/kg依达拉奉组、3 mg/kg依达拉奉组,各组又根据造模后处死动物的不同时间(6 h,12 h,24 h,48 h,72 h,7 d,14 d)分为七个亚组,假手术组中每个亚组1只大鼠,其余三组中每个亚组6只大鼠.左尾壳核立体定向注入自体血80 μL,制作大鼠脑出血动物模型.分光光度计法检测血肿周围丙二醛(mflonaldehyde,MDA)及羟自由基含量,末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyltransfemse-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TLINEL)检测血肿组织周围细胞凋亡数,并分析血肿周围组织自由基水平和凋亡相关性.结果 (1)模型组羟自由基及MDA含量较假手术组明显增加,四组间进行统计学分析,具有显著性差异.(2)模型组和两种剂量的依达拉奉组均于6 h即可观察到TUNEL阳性细胞,24 h明显增加,72 h时达到高峰,7 d时明显减少,14 d时于血肿周边仍可见少量阳性细胞.(3)凋亡细胞数与脑组织产生自由基能力(r=0.2003)及MDA含量(r=0.6563)具有相关性.结论 脑出血后细胞凋亡数和自由基水平变化趋势相同,二者具有相关性,提示自由基可能参与诱导出血后神经元及胶质细胞凋亡.     

Recombinant-activated factor VII and neuronal apoptosis in a rat model of intracerebral hemorrhage

BACKGROUND： Activated clotting factor VII has been demonstrated to exhibit obvious anti-apoptosis effects. OBJECTIVE： To observe the effect of activated clotting factor VII on neuronal apoptosis at different time points following rat intracerebral hemorrhage （ICH）. DESIGN, TIME AND SETTING： A randomized, controlled, animal experiment was performed at the Neurobiological Laboratory of Second Military Medical University from October 2005 to April 2006. MATERIALS： Recombinant-activated clotting factor Vlla （rFVtla） was purchased from Danish Novo Nordisk, Denmark. In situ cell death detection kit-POD kit was purchased from Roche, Switzerland. Caspase-3 activity determination kit from Biovision, USA. METHODS： A total of 72 healthy, male, Sprague Dawley rats, aged 5-8 months, were randomly assigned to three groups （n = 24）： sham-operated, ICH model, and rFVIla. In the ICH model and rFVIla groups, 80.0μL autologous non-clotting blood from rat tails was injected into the right caudate putamen to establish the ICH. The empty microinjector was inserted into the caudate putamen in the sham-operated group. The ICH model and rFVIla groups were subdivided into four subsets separately： 6, 24, 72 hours and 7 days following ICH. The rats in the rFVIla group were injected with 160 μg/kg rFVIla via the dorsal vein of the penis. MAIN OUTCOME MEASURES： Apoptotic cells were detected in the right caudate putamen by TUNEL; caspase-3 activity by spectrophotometry; and rat neurological function was evaluated by neurological functional impairment scales. RESULTS： Rat neurological function was deteriorated at 24, 72 hours, and 7 days following ICH. The TUNEL-positive cells and caspase-3 activity in the right caudate putamen was significantly increased in the ICH rats （P 〈 0.05）; rFVlla treatment reduced the number of TUNEL-positive cells and caspase-3 activity in the right caudate putamen （P 〈 0.05）, and neurological function was significantly improved （P 〈 0.05）. CONCLUSION： rFVIla was applied within 72 hours after tCH, which reduced the amount of neuronal apoptosis and promoted neurological function restoration by possibly inhibiting caspase-3 activity.     

白介素-10对脑出血大鼠脑组织核因子-кB、细胞间黏附分子-1表达及神经细胞凋亡的影响

目的探讨白介素(IL)-10对脑出血大鼠脑组织核因子(NF)-кB、细胞间黏附分子(ICAM)-1表达及神经细胞凋亡的影响。方法 96只SD大鼠随机分为正常组、对照组、IL-10低剂量组和高剂量组,后3组再随机分为6 h、12 h、1 d、3 d及7 d 5个时间点。应用Ⅶ型胶原酶注射法制备脑出血模型;制模成功后3 hIL-10低剂量组和高剂量组分别给予IL-10 5μg/kg或30μg/kg、对照组给予生理盐水腹腔注射,以后每天1次。应用免疫组化法测定各组血肿周围脑组织NF-кB及ICAM-1表达,原位末端标记法检测脑组织细胞凋亡。结果与正常组比较,其他各组各时间点脑组织NF-кB、ICAM-1表达明显升高,神经细胞凋亡数量明显增多(均P<0.01)。与对照组比较,IL-10低剂量组NF-кB表达制模后12 h开始降低,ICAM-1表达及神经细胞凋亡数量自1 d开始降低,7 d时降低最显著(P<0.05～0.01);IL-10高剂量组上述变化在制模后12 h开始,且下降程度更显著(P<0.05～0.01)。结论 IL-10可抑制脑组织NF-кB及ICAM-1表达,减轻血肿周边炎症反应及神经细胞凋亡,对出血性脑损伤起保护作用;高剂量组作用更明显。     

脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系

目的 探讨脑出血大鼠血肿周围脑组织白细胞和凋亡细胞变化及其与脑组织含水量的关系.方法 48只大鼠采用自体不凝血注入法制备脑出血模型,随机分为8组:假手术组、脑出血6h组、脑出血12h组、脑出血24h组、脑出血48 h组、脑出血72 h组、脑出血1周组和脑出血2周组.分别在相应时间点断头取脑,进行脑组织含水量测定和HE染...