良性增生前列腺组织中鸟氨酸脱羧酶基因表达的研究

为探讨鸟氨酸羧酶（ＯＤＣ）基因表达与前列腺良性增生的关系，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹和ＲＮＡ斑点杂交技术，测定分析了正常人（１０例）和良性前列腺增生症（ＢＰＨ）病人（１５例）前列腺组织中ＯＤＣｍＲＮＡ的丰度。结果显示，良性增生前列腺组织中ＯＤＣｍＲＮＡ丰度较正常前列腺组织显著升高。经密度扫描测定结果显示，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ迷分析中ＢＰＨ前列腺组织中ＯＤＣｍＲＮＡ丰度的为对照组的６－２０倍，斑点杂交为５     

EGF 对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论 :EGF诱导ODC基因表达可能是其促进前列腺细胞增殖的分子机制之一     

雄激素与培养前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的关系

为研究雄激素致前列腺良性增生的分子机理，分离培养了人胎儿前列腺间质细胞，并给予ＤＨＴ（１～１００００μｇ／Ｌ）刺激，ＭＴＴ法测定。结果显示，ＤＨＴ对该细胞具有刺激增殖作用，其最适刺激浓度为１０００μｇ／Ｌ。斑点杂交结果显示，鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ的表达在ＤＨＴ（１０００μｇ／Ｌ）刺激６ｈ时开始升高，２４ｈ时达高峰，３０ｈ时有所降低。提示雄激素刺激前列腺间质细胞增殖的分子机理部分是通过刺激前列腺间质细胞的ＯＤＣ基因表达来完成的。     

老年人肺癌组织中鸟氨酸脱羧酶基因表达及其临床意义

目的：从mRNA和蛋白质水平探讨ODC基因表达和老年人肺癌的关系，为肺癌基因诊断和基因治疗的研究提供理论依据。方法：分别应用RT PCR和免疫组化方法检测42例老年人肺癌组织和癌旁正常肺组织中ODC mRNA和ODC蛋白的表达，应用Western Blot检测肺癌组织中ODC表达，同时用MTT法观察不同转染组肿瘤细胞的增殖状况，探讨上述指标与肺癌临床病理学特性的关系。结果：RT PCR显示，老年人肺癌组织中ODC mRNA表达明显高于癌旁正常肺组织（P＜0.05），不同类型和分化程度肺癌组织中ODC mRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05），Ⅲ期肺癌组织中ODC mRNA表达明显高于Ⅰ期+Ⅱ期（P＜0.05）；免疫组化显示，肺癌组织中ODC蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织(P＜0.05);不同病理类型和分化程度肺癌组织中ODC蛋白表达未见明显差异（P＞0.05），Ⅲ期肺癌组织中ODC蛋白表达较Ⅰ期+Ⅱ期明显升高（P＜0.05）；Western Blot显示，肺癌组织中ODC蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织；MTT法观察生长曲线检测数据表明，ODC的反义RNA表达载体转染组细胞的增殖明显比对照组细胞和空载体转染组细胞缓慢。结论：ODC表达增强与老年人肺癌发生、发展、浸润及转移有关，可作为判断肺癌生物学行为的参考指标; ODC的反义RNA表达载体对A 549肺癌细胞株的生长具有一定的抑制作用。     

雄激素与培养前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酸基因表达的关系

为研究雄激素致前列腺良性增生的分子机理，分离培养了人胎儿前列腺间质细胞，并给予ＤＨＴ（１￣１００００μｇ／Ｌ）刺激，ＭＴＴ法测定。结果显示，ＤＨＴ对该细胞具有刺激增殖作用，其最适刺激浓度为１０００μｇ／Ｌ。斑点杂交结果显示，鸟氨酸脱羧酸（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ的表达在ＤＨＴ（１０００μｇ／Ｌ）刺激６ｈ时开始升高，２４ｈ时达高峰，３０ｈ时有所降低。提示雄激素刺激前列腺间质细胞增殖的分子机理部分是通过刺激前     

胃癌鸟氨酸脱羧酶基因表达及临床意义

目的从mRNA和蛋白质水平研究鸟氨酸脱羧酶在胃癌中的表达，探讨其在胃癌形成中的作用。方法采用半定量RT PCR技术检测胃癌及相应癌旁组织中ODC mRNA的表达量，采用Western blot在蛋白质水平检测胃癌及相应癌旁组织中ODC的表达量，并做统计学分析。结果21例胃癌组织中ODC在mRNA和蛋白质水平的表达量均高于癌旁组织（P<0.01）。ODC的表达量低分化胃癌组织显著高于高中分化（P<0.01）。结论ODC表达增强在胃癌发生发展中起重要作用，提示ODC可作为胃癌的基因诊断与治疗的靶点。     

脑胶质瘤中鸟氨酸脱羧酶的基因表达及其临床意义

目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)在脑胶质瘤中的基因表达,以了解脑胶质瘤中多胺代谢及ODCmRNA表达的临床意义。方法:采用RT-PCR检测30例脑胶质瘤及其邻近正常脑组织手术标本中的ODCmRNA表达情况,采用配对样本t检验及Spearman等级相关分析对实验结果进行统计学处理。结果:脑胶质瘤组织ODCmRNA扫描值较正常脑组织明显升高(P<0.0001)。肿瘤组织ODCmRNA表达与肿瘤分级之间无显著相关性(P>0.05)。结论:ODC基因表达增强在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

人良性增生前列腺组织中GSH的含量

测定了9例正常人和20例良性前列腺增生症(BPH)患者前列腺组织全匀浆、上皮细胞及间质细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果表明BPH前列腺组织全匀浆、上皮细胞及间质细胞中GSH的含量均明显低于正常前列腺,以DNA为基数表示GSH相对含量时,正常和增生前列腺上皮细胞中GSH的含量均明显低于间质细胞。提示前列腺组织中GSH含量降低可能与BPH的形成有关。     

鸟氨酸脱羧酶与细胞增殖

鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)为多胺生物合成途径中的第一个限速酶(催化合成多胺的第一步反应,即催化L-鸟氨酸脱羧生成腐胺),具有超常转变率和对于刺激的迅速反应性。而多胺广泛存在于生物体的各种细胞和组织中,是一种重要的代谢调控物质,它可直接与DNA相互作用,调节DNA构象,并参与RNA及蛋白质的合成,与细胞增殖、分化密切相关。已有研究表明,哺乳动物细胞增殖体现出完全的多胺依赖性。     

茶多酚对成纤维细胞L929中鸟氨酸脱羧酶的抑制作用

目的:探讨茶多酚对成纤维细胞L929的增殖抑制作用及其作用机制。方法:体外培养小鼠成纤维细胞L929,加入茶多酚、二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作用于细胞。用MTT法观察茶多酚对细胞增殖抑制作用,利用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞技术检测细胞的调亡,RT鄄PCR技术检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的表达。结果:20μmol/L的茶多酚即能明显抑制L929细胞的增殖,促进细胞的调亡,其半数有效浓度为200μmol/L。RT鄄PCR显示细胞中ODCmRNA表达明显下降(P<0.05)。200μmol/L的茶多酚的抑制效果与5mmol/L的DFMO的作用效果相似。二者共同作用于细胞时,对ODC的活性抑制作用更强,抑制效果更佳。结论:茶多酚能通过抑制细胞中ODC的表达来抑制细胞的增殖。     

过氧化苯甲酰对小鼠皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶mRNA表达的影响

过氧化苯甲酰是一种可产生自由基、具有促癌活性的化合物。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析研究表明，ＢＰＯ在４０ｍｇ一次局部涂用于小鼠皮肤后，皮肤表皮鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）ｍＲＮＡ水平在涂用ＢＰＯ后６小时左右升至最高，而ＢＰＯ多次涂用，也可增加ｍＲＮＡ水平，并以第６小时最明显。提示，ＢＰＯ可能通过促进ＯＤＣｍＲＮＡ表达、增加ＯＤＣ酶量以诱导ＯＤＣ活性。     

经尿道前列腺电汽化术治疗前列腺增生症（附118例报告）

目的：评价经尿道前列腺电汽化术（TUEVP）治疗尿道内型良性前列腺增生症（BPH）的作用。方法：回顾性分析我院1996年9月－1999年12月经TUEVP治疗的118例尿道内型BPH病人的临床资料。结果：平均手术时间40min,术后尿液转清时间平均9.5h,留置尿管时间平均4天。1例丙型肝炎病人因TUEVP术后出血持续8h改为开放性手术,其余117例病人术中、术后均未输血,未发生严重术后并发症,且恢复快。106（92％)例获得随访。随访3－39个月（平均19个月）,均排尿通畅、尿线粗大有力。结论：TUEVP是治疗尿道内型BPH的一种安全、有效的方法。与TURP相比较TREVP具有技术易掌握、手术时间短、出血少、冲洗液用量少等优点。     

正常与BPH前列腺生长因子的研究

收集正常的及良性前列腺增生症（ＢＰＨ）的前列腺组织，用细胞培养、同位素掺入法分别测定各例标本的组织液对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞增殖的影响。结果表明，ＢＰＨ组织液促细胞增殖效应为正常前列腺的５倍。正常前列腺组织用硫酸铵分级沉淀、肝素亲和层析、ＮａＣｌ浓度梯度洗脱（收集１．３～１．７ｍｏｌ部分），分离纯化人前列腺生长因子（ｈＰＧＦ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定达电泳纯，分子量约为１７０００，纯化约８００倍。所得的ｈＰＧＦ对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞的增殖刺激作用呈现浓度依赖性，ＢＰＨ组织ｈＰＧＦ活性显著高于正常前列腺     

bcl-2 mRNA在正常和增生前列腺组织中的表达及意义

目的:探讨bcl-2 mRNA在良性前列腺增生发病过程中所起的作用.方法:采用斑点杂交技术研究正常和增生前列腺组织中bcl-2 mRNA表达情况,并加以比较,同时采用原位杂交技术了解bcl-2 mRNA在增生前列腺中表达.结果:bcl-2 mRNA在增生前列腺组织中表达明显高于在正常前列腺组织中的表达,增生组织中平均表达值是正常组织的(1.71±0.72)倍;原位杂交显示:bcl-2 mRNA主要在前列腺上皮组织中表达,并呈现由基底细胞向表层上皮细胞表达逐渐减弱趋势.结论:bcl-2 mRNA 在增生组织中高表达表明增生前列腺上皮细胞抗凋亡作用强于正常组织,提示bcl-2参与前列腺细胞增殖与凋亡过程,增生前列腺中bcl-2高表达可能是诱发良性前列腺增生的重要病因.     

经尿道前列腺气化电切术治疗前列腺增生症

目的 探讨经尿道野列腺气化电切术（ＴＶＰ）治疗良性前列腺增生症（ＢＰＨ）疗效。方法 采用ＴＶＰ治疗ＢＰＨ３５例,其中Ⅰ度４例,Ⅱ度２３例,Ⅲ度８例。结果 全部患者手术均成功,手术时间平均６５ｍｉｎ,术中心电图、血压平稳,无电切综合征发生;术后仅８例作膀胱冲洗６～３６ｈ,所有患者均于术后３～５ｄ拔除导尿管排尿通畅;随访１～１８个月,患者主、客观症状均有显著改善。结论 ＴＶＰ治疗ＢＰＨ具有安全性高,治     

抑癌基因P16INK4在sf9细胞中的表达和鉴定

目的利用杆状病毒表达系统在体外表达抑癌蛋白P16,为研究P16蛋白的结构与功能及其在肿瘤生物治疗中的应用奠定基础.方法①利用定向克隆的方法将P16全基因序列插入转移载体pSX-IVVI+X3的EcoRI、Sall位点上,经氨苄青霉素平板初筛、菌落原位杂交、PCR扩增酶切电泳鉴定后,分离含P16的重组转移载体一pSXIVVI+X3.16;②用昆虫杆状病毒TnNPV-SVI-G感染sf9细胞扩增病毒,用PEG法沉淀病毒、酚/氟仿抽提纯化病毒DNA;③CaCl2沉淀法使重组转移载体一pSXIVVI+X3-16和病毒TnNPV-SVI-G DNA共转染sf9细胞.通过多角体观察和PCR法鉴定重组病毒;④经空斑纯化法纯化重组病毒,重组病毒感染草地夜蛾细胞(sf9)使P16大量表达,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定所表达的P16蛋白.结果①筛选出两株含P16全基因的重组转移载体-pSXIVVI+X3-16;②构建了含P16全基因序列的重组杆状病毒TnNPV-p16;③SDS-PAGE电泳显示重组病毒TnNPV-P16感染sf9细胞的培养上清及胞体裂解物和阳性对照Hela细胞裂解物在16kD左右均有蛋白条带,而阴性对照TnNPV-SVI-G感染的sf9细胞培养上清中无此蛋白条带,经免疫印迹染色证实此蛋白为抑癌蛋白P16.结论利用我国自己构建的昆杆状病毒表达系统成功了表达P16蛋白,分子量大小及特异性与国外报道相同.     

内皮素基因在大鼠不同器官中的表达

目的：定量检测内皮素ｍＲＮＡ在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录－多聚酶链反应（Ｓ＿ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交方法。结果：内皮素ｍＲ－ＮＡ在上述器官及ＭＣ中均有表达，其表达水平从高到低依次为肺、心、肾、肝。结论：内皮素基因在不同器官有着不同表达；除血管内皮细胞外，ＭＣ是产生内皮素的又一种细胞。     

BMP-2基因在兔自体静脉移植中的动态表达

目的观察BMP-2基因在静脉移植模型中的动态表达及与内膜增生的关系。方法建立兔自体静脉移植动物模型,分别于术后3、7、14、28d取材。Verhoeff染色观察各时间点内膜厚度及管壁厚度;Western blot检测BMP-2蛋白的变化,免疫组化(SABC)法检测BMP-2、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果术后7d内膜明显增厚,14d内膜增厚达到高峰(P<0.01)。BMP-2蛋白在正常对照血管可见表达,术后3d内无表达,术后第七天开始表达,第十四天明显增高,28d达到高峰(P<0.01)。PC-NA的表达于术后7～14d达到高峰。结论 BMP-2基因的表达可能是抑制移植静脉内膜增生的环节之一,可能成为治疗移植血管再狭窄的目的基因。     

APC基因表达异常在国人大肠肿瘤形成中的作用研究

应用免疫组化和斑点杂交技术检测３０例大肠癌和１５例大肠腺瘤ｍＲＮＡ和蛋白表达水平，结果显示ｐ３００ＡＰＣ在大肠正常粘膜，腺瘤和癌组织的表达分别为７０％、６６．７％、２０％，在伴有重度非典型性增生腺瘤中为２５％。提示在大肠癌和重度非典型性增生腺瘤中ＡＰＣ基因产物呈低表达状态，且与腺瘤的分化程度密切相关。