青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

摘 要 目的:探讨青蒿琥酯（Artesunate,Art）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖和凋亡的影响。方法: 选用活性良好的HSC-T6细胞进行体外培养,应用倒置显微镜观察药物作用后的细胞形态改变;用CCK-8测定不同浓度、不同时间Art对该细胞增殖的抑制作用的影响;用Annexin Ⅴ和PI双染的流式细胞术检测HSC-T6的细胞凋亡率的影响。结果:①倒置显微镜结果显示,Art作用过的贴壁细胞数目变少、突触变短变细、细胞表面变皱、由星形变成圆形。②12.5～200 μg·ml^-1的Art在0～72 h范围内对HSC的增殖有明显的抑制作用（P＜0.01）,抑制率有时间和剂量依赖性。③流式细胞仪结果显示随着剂量、时间的增加,凋亡率显著增加（P＜0.05）。结论:Art能抑制HSC T6细胞的增殖,并可促进细胞凋亡。     

渥漫青霉素对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的探讨渥漫青霉素对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,进行体外培养;并以MTT比色法观察渥漫青霉素对HSC增殖的影响.结果低浓度渥漫青霉素的抑制作用不明显(P>0.05),当药物浓度上升为2.5mg/L时,抑制作用增强,呈明显药物浓度依赖关系.结论渥漫青霉素抗肝纤维化的作用是抑制了HSC的增殖,它对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景.     

维拉帕米对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度的维拉帕米对HSCs处理48 h,CCK-8试剂盒(cell counting Kit-8)检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化,流式细胞仪Annexin-V/PI双染法检测HSCs的凋亡率。结果维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为(150±10)mmol·L-1;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变;Annexin-V/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs凋亡,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论维拉帕米可抑制HSCs的增殖,诱导其凋亡。     

三七总皂甙对传代肝星状细胞增殖的影响

目的用体外培养的传代细胞研究三七总皂甙对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法分别将0 mg/ml、0.01 mg/ml、0.05 mg/ml、0.25 mg/ml、1.00 mg/ml和1.25 mg/ml浓度的三七总皂甙作用于HSC-T6细胞,用MTT比色法研究三七总皂甙对细胞增殖的影响。结果培养24 h和48 h后,0.25 mg/ml,1.00 mg/ml和1.25 mg/mI浓度的三七总皂甙对HSC-T6细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05);0 mg/mI、0.01 mg/ml、0.05 mg/ml、0.25 mg/ml,1.00 mg/ml和1.25 mg/ml浓度的三七总皂甙对HSC-T6细胞增殖抑制率呈线性关系,并有明显剂量效应关系,经相关回归分析,培养24 h后,Y=0.486402X 0.037362,r=0.982181,P<0.002;培养48 h后,Y=0.526087X 0.071327,r=0.992046,P<0.001。结论三七总皂甙对HSC-T6细胞增殖有明显抑制作用。     

哌唑嗪和去氧肾上腺素对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨α1-肾上腺素受体(α1-AR)拮抗剂哌唑嗪(PZ)和激动剂去氧肾上腺素(PE)对体外活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养HSC-T6;MTT法检测HSC-T6的增殖;ELISA法检测HSC-T6内cAMP含量;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测核蛋白因子κBp65(NF-κBp65)的表达。结果:在体外培养的活化大鼠肝星状细胞中,α1-AR激动剂PE(10-5、10-7、10-9mol/L)对HSC-T6具有明显的抑制cAMP合成,促进增殖,增强核转录因子κBp65的表达及抑制凋亡的作用,而α1-AR拮抗剂PZ(10-5、10-7、10-9mol/L)具有相反的作用。结论:α1-肾上腺素激动剂PE对体外活化的HSC-T6具有促进增殖和抑制凋亡的作用,而拮抗剂PZ具有抑制增殖和促进凋亡的作用,可能主要通过α1受体调控cAMP合成及NFκ-Bp65的表达起作用。     

氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的作用

目的：观察氯沙坦对肝星状细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用CCK8试剂盒检测氯沙坦对肝星状细胞增殖的抑制情况；重复实验可计算IC50；采用AnnexinV-FITC/PI双染法经流式细胞仪检测肝星状细胞的凋亡情况。结果：氯沙坦可抑制肝星状细胞的增殖，并呈明显的剂量依赖性，1 000 μmol?L-1时肝细胞的抑制率可达（95.22±3.54）%，IC50值为（326.21±30.27） μmol?L-1；AnnexinV-FITC/PI双染法检测显示，各浓度的氯沙坦均能促进细胞凋亡，与对照组比较有显著性差异（P<0.01）。结论：氯沙坦有抑制肝星状细胞细胞增殖及促进其凋亡的作用。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

阿米洛利对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨阿米洛利对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法：将HSC T6细胞与不同浓度的阿米洛利共同培养24 h。MTT法观察阿米洛利对HSC T6增殖的效应，以乳酸脱氢酶(LDH)法观察阿米洛利对HSC T6的毒性作用。结果：阿米洛利浓度＞1.875 μmol·L 1时对HSC增殖有抑制作用(P＜0.01)，1.875～60 μmol·L 1未发现阿米洛利对HSC有毒性作用(P＞0.05)。结论：阿米洛利可抑制HSC的增殖，其作用不是非特异性细胞毒作用所致。     

联苯双酯对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡及PPARγ表达的影响

摘 要 目的： 探讨联苯双酯(dimethyl dicarboxylate biphenyl,DDB)对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖和凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)表达的影响。方法: 接种HSC T6细胞于96孔板和6孔板中,分别用CCK 8法和流式细胞术测定不同浓度联苯双酯作用于细胞24 h后对细胞增殖和凋亡的影响;实时荧光定量PCR（Quantitative Real time PCR,Q-PCR）和Western blotting分别检测药物对HSC-T6细胞PPARγ mRNA和蛋白的表达的影响。结果: 相比于对照组（0 μmol·L^-1）,DDB在实验浓度（8～64 μmol·L^-1）能明显抑制HSC T6的增殖（P<0.05),促进HSC T6的凋亡（P<0.05);药物处理过的HSC T6细胞PPARγ mRNA及其蛋白表达均有显著提高。结论:DDB可通过上调HSC T6细胞中PPARγ的表达抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡。     

草苁蓉甲醇提取物(BR)对大鼠肝癌细胞功能的影响

目的:MTT比色法检测草苁蓉甲醇提取物(BR)对大鼠肝癌细胞功能的影响和倒置显微镜下观察形态学改变情况.方法:将大鼠肝癌细胞随机分为5个组:分别为1个对照组、4个实验组.4个实验组加入草苁蓉甲醇提取物,使药物终浓度分别达到0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L;对照组除加等体积的生理盐水代替用药外,...     

白芍总苷治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用与其影响肝星状细胞功能的关系*

目的:研究白芍总苷(TGP)通过影响肝星状细胞(HSC)的功能发挥治疗四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的作用。方法:建立CCl_4诱导化学性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法检测血清及体外HSC培养上清中透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;流式细胞仪检测HSC凋亡率。苏木素-伊红染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变。结果:在CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,TGP给药(40,80,160mg·kg~(-1),ig)均明显降低血清ALT,AST,ALP,HA和PCⅢ水平;升高白蛋白水平及白蛋白球蛋白比值(A/G)。TGP(60,120和240mg·L~(-1))能明显降低HSC体外分泌的HA和PCⅢ水平,促进HSC凋亡,明显改善肝脏病理组织状况。结论:TGP对CCl_4致大鼠肝纤维化具有治疗作用,该作用与其降低HSC分泌HA和PCⅢ、促进HSC凋亡有关。     

黄芪总提物对大鼠肝星状细胞增殖及产生胶原的影响

目的　研究黄芪总提物　（　TEA　）　对体外肝星状细胞增殖和产生胶原的影响　。方法　采用IV型胶原酶灌流分离大鼠肝星状细胞进行原代培养,　用CCl4急性损伤的大鼠肝枯否细胞条件培养基　（　KCCM　）　刺激肝星状细胞,　用3H-TdR和3H-Proline的掺入法分别检测肝星状细胞的增殖和胶原的产生　。结果　TEA(5～40　mg     

维拉帕米对肝星状细胞凋亡和Bcl-2表达的影响

目的:观察维拉帕米对人肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)凋亡的影响以及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。方法:流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测HSCs细胞的凋亡率,免疫组化SABC法检测Bcl-2表达的变化。结果:AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的维拉帕米均可诱导HSCs细胞凋亡,且有剂量相关性,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测显示,与对照组比较,维拉帕米组Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:维拉帕米可诱导HSCs凋亡,减弱Bcl-2的表达。     

肝星状细胞凋亡信号途径及其药物治疗的研究进展

各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的激活是肝纤维化发生发展的中心环节,促进其凋亡被认为是肝纤维化逆转的始动因素。HSC的凋亡机制十分复杂,调控活化HSC凋亡的信号转导途径研究甚少。目前已知的HSC凋亡信号途径主要包括线粒体途径、死亡受体途径和非死亡受体途径。基于这些信号转导途径,研究出选择性诱导HSC凋亡的药物将成为抗肝纤维化治疗的重要手段。该文将对HSC凋亡信号转导通路的最新进展进行综述,并对目前已知的具有促HSC凋亡作用的药物进行总结分类。     

去甲肾上腺素和酚妥拉明对大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨α-肾上腺素激动剂去甲肾上腺素和拮抗剂酚妥拉明对体外活化的肝星状细胞（HSC-T6）的影响。方法：体外对HSC-T6进行复苏和培养传代;MTT法检测HSC-T6的增殖;放射免疫法检测HSC-T6培养上清液中透明质酸(HA)和III型前胶原（PCIII）的浓度;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡率;免疫细胞化学染色检测组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和基质金属酶-13(MMP-13)蛋白的表达。结果：在体外培养的活化HSC-T6中,去甲肾上腺素（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能促进细胞增殖,升高分泌HA和PCIII水平,增强TIMP-1蛋白的阳性表达并降低其凋亡率;酚妥拉明（10-5,10-7,10-9 mol&#8226;L-1）能抑制细胞增殖,促进MMP-13的阳性表达并增加HSC-T6的凋亡率。结论：去甲肾上腺素具有促进肝纤维化的作用,酚妥拉明则具有抗纤维化的作用,该作用与其对HSC-T6增殖、凋亡及HA和PCIII分泌水平调控有关。     

蛇葡萄根提取物的含药血清对肝星状细胞凋亡及基因Bax/Bcl-2表达的影响

目的:研究中药蛇葡萄根提取物的含药血清对HSC/T6凋亡及凋亡基因Bax/Bcl-2表达的影响,从细胞学和分子生物学水平探讨中药蛇葡萄根抗纤维化的作用机制。方法:用流式细胞仪测定各体积分数(5%,10%和20%)的含药血清对HSC/T6作用后的DNA含量,计算细胞凋亡率;用SABC染色检测凋亡基因Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果:含药血清体积分数为5%,10%和20%的蛇葡萄根提取物对HSC/T6的凋亡率分别为8.50%,14.30%和22.65%,均显著大于含生理氯化钠溶液的血清对照组(P<0.01);且均上调HSC/T6的促凋亡基因Bax的蛋白表达,同时下调抗凋亡基因Bcl-2的基因表达。结论:蛇葡萄根提取物含药血清能诱导HSC/T6的凋亡,上调促凋亡基因Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达。     

姜黄素通过激活过氧化物酶体增殖子活化受体γ诱导肝星状细胞凋亡

目的研究姜黄素对肝星状细胞(HSC)凋亡的作用,以及与过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)信号之间的关系。方法肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心方法分离培养大鼠HSC,传代培养并使用药物处理。Ho-echst33258染色检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测PPARγ的细胞内分布。收集裂解细胞分别抽提RNA、总蛋白和核蛋白,半定量RT-PCR和Westernblot方法检测目标基因和蛋白表达水平。结果活化HSC几乎没有凋亡发生,而姜黄素处理诱导了HSC凋亡,促进了HSC中PPARγ的核转位和(或)重分布。姜黄素在转录和翻译水平,增强HSC胞核PPARγ表达,抑制了抗凋亡因子Bcl-2的表达,促进了促凋亡因子Bax表达;这些作用能够被PPARγ阻断剂所拮抗。结论姜黄素促进过氧化物酶体增殖因子活化受体γ表达和核转位/重分布,诱导肝星状细胞凋亡。