血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对炎症因子分泌的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及对白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响,进一步探讨AngⅡ在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生、发展过程中所发挥的作用. 方法 体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6 mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组.以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力2种衰老标志物为主要观察指标,其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;酶联免疫吸附法(E LISA)检测培养液中IL-6、TNF-α浓度. 结果 与对照组相比,AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)％;(81.80±0.92)％的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1[(89.4±3.4)％],证实细胞衰老;IL-6、TNF-α分泌增加(P均＜0.01). 结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与IL-.6、TNF-α分泌增加有关.     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对细胞骨架的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老及对细胞骨架的影响。方法体外培养HUVEC,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ干预,分为对照组、10mol/LAngⅡ诱导组(AngⅡ组)。主要观察衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞增殖能力;考马斯亮蓝染色显示内皮细胞骨架,利用Western blot印迹法分析波形蛋白表达的变化。结果与10~(-6)mol/L AngⅡ细胞存活率(77.15±6.83)%比较,10~(-5)mol/L AngⅡ存活率(55.61±7.92)%明显降低(P<0.01);AngⅡ组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目明显增加(P<0.001),流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1期[(80.11±7.92)%];AngⅡ组细胞骨架及波形蛋白较对照组明显降解。结论 AngⅡ可以诱导HUVEC衰老,其分子机制可能与细胞骨架蛋白裂解有关。     

AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老相关基因表达的研究

目的 探讨血管紧张索Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老相关基因p16INK4a、p21cip1的表达.方法 体外培养HU-VECs并予AngⅡ(10-6mol/L)干预,采用光镜观察细胞形态学改变,β-半乳糖苷酶(β-gal)染色和流式细胞术鉴定细胞衰老,并利用免疫细胞化学染色法分析Ang Ⅱ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的p16INK4a阳性细胞表达率,Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的p16INK4a、p21cip1蛋白表达的时间效应关系.结果 AngⅡ诱导组HUVECs出现典型的细胞体积增大,形态不规则;约80%的细胞呈现β-gal阳性染色(80.10±6.81)%,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1(91.36±6.45)%,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调p16IK4a、p21cip1蛋白表达.结论 AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老的分子机制之一可能与上调衰老细胞内细胞周期蛋白p16INK4a、p21cip1的表达,使细胞周期停滞于G1期有关.     

阿托伐他汀通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达延缓血管内皮细胞衰老

目的探讨阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中凋亡调控基因Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及阿托伐他汀干预,分为对照组、血管紧张素Ⅱ诱导组及阿托伐他汀组,采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老,并利用免疫细胞化学染色法、Western blot法分析各组凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导组存活的细胞数与对照组相比81.90%±0.04%;约80%的细胞呈现β-半乳糖苷酶活性阳性染色和流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1,证实细胞衰老;与血管紧张素Ⅱ诱导组相比,阿托伐他汀组Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.05),Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著增加(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ可诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞老化,从而复制细胞衰老。Bcl-2、Bax蛋白表达的失衡可能是血管衰老的重要分子机制之一,阿托伐他汀有一定的延缓血管衰老的作用。     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老和P-选择素表达的影响

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）衰老和P-选择素表达的影响。方法体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组（10-8～10-5mmol/L）共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶（β-gal）染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;CCK-8法检测细胞存活率情况;ELISA检测各组培养基上清中P-选择素表达含量。结果 AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多（P均〈0.01）;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,与对照组相比,10-8和10-7mmol/LAngⅡ组无明显差异（P〉0.05）,10-6和10-5mmol/LAngⅡ组有统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）;细胞存活率与对照组相比明显下降;P-选择素表达含量随着AngⅡ浓度的增加明显增多（P均〈0.01）。结论 AngⅡ诱导HUVEC衰老,并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖与增加P-选择素的表达。     

血管紧张素(1-7)通过p53/Drp1轴对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老的影响

目的 观察血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老的作用及机制。方法 体外用含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基培养HUVEC 48 h,随机分为对照组、Ang(1-7)组(1 μmol/L)、AngⅡ组(1 μmol/L)和AngⅡ＋Ang(1-7)组。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测各组衰老细胞数量(光学显微镜观察),通过活性氧检测试剂盒测定各组细胞活性氧(ROS)的水平,通过Western blot检测各组细胞p53和动力蛋白相关蛋白1(Drp1)的表达。结果 与对照组比较,AngⅡ组SA-β-Gal染色阳性细胞明显增多(P＜0.001),细胞ROS水平增加(P＜0.001),p53及Drp1蛋白表达量明显增加(P＜0.01)。与AngⅡ组比较,AngⅡ＋Ang(1-7)组SA-β-Gal染色阳性细胞率(P＜0.01)、细胞ROS水平(P＜0.001)、p53及Drp1蛋白表达量(P＜0.05)均降低。结论 Ang(1-7)可能通过影响p53/Drp1通路,抑制HUVEC内ROS生成,减轻AngⅡ诱导的HUVEC衰老。     

正五聚蛋白3对血管紧张素Ⅱ刺激后血管内皮细胞凋亡及血管活性物质分泌的影响

目的探讨正五聚蛋白(PTX)3对血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激后的血管内皮细胞(HUVECs)凋亡及血管活性物质分泌的影响。方法以10~(-7) mol/L AngⅡ刺激体外培养的HUVECs 0、12、24和48 h后,Western印迹检测HUVECs中PTX3蛋白的表达。利用Lipofectamine2000将PTX3 siRNA转染至HUVECs,Western印迹检测其转染效果。将HUVECs随机分为空白组(未做任何处理)、AngⅡ组(10~(-7)mol/L AngⅡ刺激)、AngⅡ+siNC组(转染阴性对照序列后,给予10~(-7) mol/L AngⅡ刺激)和AngⅡ+siPTX3组(转染PTX3 siRNA后,给予10~(-7)mol/L AngⅡ刺激),噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中血管活性物质内皮素(ET)-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达。结果随着AngⅡ刺激时间的延长,PTX3蛋白表达水平显著升高。转染PTX3 siRNA后成功下调了AngⅡ引起的PTX3表达。AngⅡ刺激可引起HUVECs增殖减弱,凋亡增强,ET-1和iNOS mRNA表达升高;下调PTX3表达能够减弱AngⅡ引起的HUVECs损伤,促进HUVECs增殖,抑制凋亡,并下调ET-1和iNOS mRNA表达。结论 PTX3在AngⅡ刺激后HUVECs中表达升高,下调其表达可抑制AngⅡ诱导的细胞凋亡及血管活性物质的分泌。     

细胞外信号调节激酶1/2在血管内皮细胞衰老中的表达变化及作用

目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的内皮细胞中不同时点的表达变化。方法制备AngⅡRPMI1640培养液(10-6 mol/L)培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT测定内皮细胞存活率,β-gal染色、细胞周期分析鉴定细胞衰老,透射电子显微镜观察衰老细胞超微结构。细胞免疫化学染色法分析Bcl-2、Bax蛋白表达变化,Western印迹测定磷酸化ERK1/2水平。结果 AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的〔(81.9±0.04)%,P<0.01)〕;约80%的细胞呈现β-gal阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;透射电子显微镜可见AngⅡ诱导组衰老的细胞体积较大,核形不规则,细胞核染色质浓缩和凝聚。与对照组相比,Bcl-2 mRNA表达呈持续性降低,Bcl-2/Bax比值下降,ERK1/2磷酸化水平于12 h明显增加,24 h达到高峰(P<0.01),36 h下降至稳定,总ERK1/2蛋白水平无明显变化。结论ERK1/2信号转导途径参与AngⅡ诱导内皮细胞衰老的发生、发展过程,并可能通过调控内皮细胞Bcl-2/Bax比值来实现。     

黄芪甲甙对衰老HELF细胞端粒酶活性及klotho表达的影响

目的 探讨黄芪甲甙对衰老人胚肺成纤维细胞(HELF)端粒酶活性及抗衰老基因klotho mRNA表达的影响.方法 体外培养 HELF,实验组从50代开始加入黄芪甲甙,倒置显微镜观察细胞形态,MTT方法检查细胞活力,Dimiri氏法检测β-半乳糖苷酶活性,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测klotho mRNA表达.结果 与青年组比较:衰老组细胞活力和klotho mRNA表达均降低(P<0.01)、β-半乳糖苷酶活性升高(P<0.01);与衰老组相比:黄芪甲甙可降低β-半乳糖苷酶活性(P<0.01)、提高细胞活力、端粒酶活性和klotho mRNA表达(P<0.01).结论 黄芪甲甙可以通过改变细胞端粒酶活性、klotho基因的表达而发挥其抗HELF细胞衰老的作用.     

雌激素受体α在睾酮影响人脐静脉内皮细胞衰老中的重要作用

目的观察睾酮对过氧化氢(H2O2)诱导衰老的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响,并初步探讨其作用机制。方法将内皮细胞分为正常对照组、H2O2对照组、不同浓度睾酮组(3×10-9～3×10-6mol/L)、ICI182,780组和氟他胺组。用SA-β-半乳糖苷酶细胞化学检测法观察各组细胞衰老情况,Western blot法检测细胞中雌激素受体α(ERα)水平。结果与正常对照组比较,H2O2对照组可以引起HUVECs衰老细胞明显增加。3×10-9mol/L、3×10-8mol/L、3×10-7mol/L睾酮组均具有延缓H2O2诱导HUVECs衰老的趋势,3×10-6mol/L睾酮组却具有相反的作用。3×10-9～3×10-6mol/L睾酮组ERα各条带吸光度值分别为113.54±8.09、165.69±7.09、143.63±6.84、80.81±5.29。结论睾酮对H2O2诱导HUVECs衰老的影响与其剂量有关,而且睾酮还呈剂量相关性调节H2O2诱导HUVECs的ERα表达。     

前列腺腺癌中整合素αvβ3、基质金属蛋白酶-2和-9表达及关系

目的检测前列腺腺癌中整合素αvβ3、基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9表达,分析其相关性及在不同临床病理特征中的意义。方法观察组为58例前列腺腺癌患者,对照组为31例前列腺增生患者,均留取术后新鲜组织,两组中整合素αvβ3、MMP-2和MMP-9表达应用流式细胞术检测。结果整合素αvβ3、MMP-2和MMP-9在观察组中表达量明显高于对照组。观察组中整合素αvβ3、MMP-2和MMP-9表达量均与增殖指数、Gleason评分和转移相关。观察组中整合素αvβ3和MMP-2、整合素αvβ3和MMP-9的表达呈正相关。结论前列腺腺癌中存在着明显的整合素αvβ3、MMP-2和MMP-9的高表达,三种蛋白在肿瘤发生中可能有一定促进作用。整合素αvβ3可能通过对细胞外基质进行降解促进肿瘤进展。     

血管紧张素Ⅱ体外诱导人肾小球系膜细胞衰老

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用不同时间后对人系膜细胞(GMC)衰老指标的影响。方法应用10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L AngⅡ刺激人GMC,刺激时间为24、48、72、96 h,通过检测细胞增殖情况、衰老相关β半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色阳性细胞百分率、细胞周期变化及细胞形态改变确定AngⅡ诱导人GMC衰老的最佳浓度和时间。结果 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h,可抑制GMC增殖,且80%以上的GMC SAβ-gal染色阳性,82%以上的GMC进入G0^G1期;10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h诱导的衰老GMC,光镜下表现为体积增大,胞体扁平,胞质内颗粒增多,细胞排列不规则,多型核及双核细胞增多;电镜下显示核膜内陷,染色质凝集、边集,细胞质空泡形成,出现髓样溶酶体,粗面内质网扩张。结论 10-6mol/L AngⅡ刺激GMC 72 h可作为诱导GMC发生衰老的最佳刺激因素。     

活性氧诱导血管平滑肌细胞衰老及脱氢表雄酮的干预研究

目的 观察三丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老的诱导作用,及脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的干预作用.方法 将VSMC分为4组:对照组、t-BHP刺激组(在80 μmol/L t-BHP的DMEM培养液中72 h);10 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用10 nmol/LDHEA);100 nmol/L DHEA干预组(给予t-BHP刺激前30 min先加用100 nmol/L DHEA).以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标.其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力. 结果 经80 mmol/L的t-BHP持续作用72 h后,VSMC的G_0/G_1期细胞比例和SA-β半乳糖苷酶染色阳性细胞百分比增加[分别为(49.5±5.5)%和(89.4±3.4)%;(3.5±1.2)%和(75.3±4.3)%],差异有统计学意义(P<0.01).表明t-BHP成功诱导了VSMC衰老,而给予100 nmol/L DHEA干预后上述变化改善,为(71.3±3.9)%. 结论 随增龄,活性氧损害的累积可能是VSMC衰老的机制之一,DHEA可能通过抗氧化作用延缓VSMC的衰老.     

灵芝多糖抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及其机制的研究

目的 探讨不同剂量灵芝多糖(GLP)对抗H2O2诱导的HDF细胞衰老及可能的细胞周期调控机制.方法 将HDF细胞培养至24代时分成6组:即青年组、对照组、衰老模型组及GLP小剂量(50 mg/L)、中剂量(100 mg/L)、大剂量(150 mg/L)组,体外DMEM培养,各GLP组和衰老模型组自30代始添加 H2O2诱导HDF细胞衰老,直至38代.采用MTT法检测细胞活力;Dimri法检测β-半乳糖苷酶活性;RT-PCR法检测p16INK4a、CyclinD1、CDK4的表达;Western印迹法检测Rb蛋白表达和磷酸化Rb.结果 与青年组及对照组比较,衰老模型组细胞活力下降(P＜0.01),β-半乳糖苷酶活性升高(P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达升高(P＜0.01),CDK4 mRNA表达下降(P＜0.01),p16INK4a表达升高(P＜0.01),Rb磷酸化减少(P＜0.01);与衰老模型组细胞比较,中剂量和大剂量GLP细胞活力明显提高(均P＜0.01),而β-半乳糖苷酶活性降低(均P＜0.01),CyclinD1 mRNA表达降低(均P＜0.01),CDK4 mRNA表达升高(均P＜0.01),p16INK4a表达降低,Rb磷酸化增多(均P＜0.01),但两组之间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 GLP可通过改变细胞周期调控因子CyclinD1/CDK4/p16INK4a进而调节Rb的磷酸化状态,发挥抗H2O2诱导的HDF细胞衰老作用.     

Valsartan延缓血管内皮细胞衰老及p16INK4a表达变化的研究

目的 探讨Valsartan对血管内皮细胞衰老与p16INK4a表达变化的影响,为寻求廷缓内皮细胞衰老途径提供理论和实验依据.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,子血管紧张素Ⅱ及Valsartan干预,实验分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ诱导组及Valsartan组,采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化;免疫细胞化学染色法、Western blot分析各组细胞p16INK4a蛋白的表达.结果 与对照组比较,血管紧张素Ⅱ诱导组β-半乳糖苷酶阳性染色率显著增多81.24％±6.46％,细胞周期停滞于G0-G1(88.36％±6.45％),p16INK4a 蛋白表达水平上调(P＜0.05);予以Valsartan干预后,β-半乳糖苷酶阳性细胞染色率减少,G0-G1细胞减少,p16INK4a蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 血管内皮细胞衰老分子机制可能通过下调p16INK4a的表达,使细胞周期停滞于G1期有关,Valsartan对血管内皮细胞衰老有一定保护作用,可能通过调控p16INK4a的表达发挥其延缓3血管内皮细胞衰老的作用.     

Wnt/β-catenin通路在大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中的作用

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)分化为心肌细胞过程中的作用。 方法 选BMMSCs为种子细胞培养到第3代,分为血管紧张素(Ang) Ⅱ+ 5-氮杂胞苷(5-aza)组及对照组,共诱导24 h,再用完全培养液共培养4周。用倒置显微镜、MTT法检测、流式细胞、免疫荧光染色、透射电镜依次检测细胞的形态变化、生长能力、诱导分化率、α肌动蛋白（α-actin）的表达以及超微结构,用Western blot法检测诱导后Wnt及其下游分子β-catenin的表达水平。 结果 BMMSCs原代培养时呈现多种形态,经过传代体积增大,诱导后呈长梭形且均匀一致生长。MTT结果表明AngⅡ + 5-aza组细胞的生长速度比对照组快。流式细胞检测示:AngⅡ + 5-aza组的心肌细胞诱导率是（31.2 ± 1.7）%,而对照组是（1.1± 0.2）%。免疫荧光染色结果示AngⅡ + 5-aza组诱导后的BMMSCs阳性表达α-actin。透射电镜观察可见肌丝和缝隙连接。Western blot提示AngⅡ + 5-aza组的Wnt以及β-catenin的表达明显高于对照组（P < 0.05）。 结论 AngⅡ+ 5-aza在诱导BMMSCs向心肌细胞的分化中有促进作用,其可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞衰老的形态学研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老与细胞凋亡的关系。方法制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养基培养人脐静脉内皮细胞,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率,β-半乳糖苷酶染色、细胞周期分析鉴定细胞衰老;通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学的变化,透射电子显微镜观察衰老细胞的超微结构。结果血管紧张素Ⅱ诱导组存活的细胞数为对照组的81.9%±0.04%(P<0.01),约80%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(P<0.05),透射电子显微镜可见血管紧张素Ⅱ诱导组细胞核染色质浓缩和凝聚。结论血管紧张素Ⅱ可诱导体外培养的内皮细胞衰老,衰老的内皮细胞发生凋亡,提示细胞凋亡参与了血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞衰老的过程。     

抑制泛素特异性蛋白酶7改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大

目的 探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制。方法 将H9c2细胞随机分为四组：对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+AngⅡ组。利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平。结果 与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组心肌细胞面积减小;...     

白藜芦醇对氧化应激环境中HUVECs细胞衰老、增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨白藜芦醇(RSV)在氧化应激环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老、增殖及凋亡的影响,并对相关机制进行探索。方法利用β-半乳糖苷酶染色HUVECs衰老的细胞并记录阳性细胞数,观察过氧化氢(H_2O_2)单独处理以及联合RSV后,细胞衰老情况的变化;采用长时程动态活细胞成像及分析系统检测H_2O_2单独处理以及联合RSV后细胞增殖能力的变化并绘制生长曲线;利用流式细胞技术检测H_2O_2单独及联合RSV对HUVECs细胞周期及细胞凋亡情况的影响;采用Western印迹检测相关蛋白表达情况。结果 HUVECs经H_2O_2处理后,相比于H_2O_2组,RSV组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例明显减低,细胞增殖能力增强,二者差异显著(P0.05);相比于RSV组,H_2O_2组细胞周期多被阻滞在G1期,且细胞增殖相关蛋白(p-AKT和pERK)表达减少,而衰老相关蛋白p53、 p21、 p16、 p-Rb表达明显增多;而RSV可拮抗H_2O_2对HUVECs的作用,使HUVECs凋亡细胞数显著减少,Survivin蛋白表达明显增多(P0.05)。结论 RSV可抑制氧化应激环境中HUVECs细胞的衰老及凋亡、促进细胞增殖,对HUVECs细胞具有保护作用,其机制与RSV改变相关蛋白表达有关。     

汉滩病毒感染与整合素β3表达的相关性

目的　探讨整合素 β3表达与汉滩病毒 (HTNV)感染的关系。 方法　将人整合素 β3、αv及αⅡb真核表达载体分别及共转染至CHO细胞 ,采用间接免疫荧光测定 (IFA)、流式细胞计数(FCM)检测外源基因的表达 ;然后用HTNVA9株感染稳定转染的CHO细胞 ,应用IFA和FCM检测病毒抗原。结果　整合素 β3在共转染组细胞中高效表达 ,且目的蛋白主要定位于细胞膜上 ;β3单转染组目的蛋白虽有一定量的细胞膜表达 ,但表达量低于共转染组 (P <0 0 5 ) ;αv和αⅡb单转染组目的蛋白的表达量明显低于共转染组 (P <0 0 1) ,且定位发生变化。病毒感染率共转染细胞较高 ,CHO/αvβ3和CHO/αⅡbβ3细胞分别为 6 0 1%和 5 5 9% ;未转染 β3的细胞感染率较低 ,CHO细胞仅为 1% ;而单转染 β3细胞介于两者之间 ( 38 7% )。结论　汉滩病毒感染率与整合素 β3表达水平密切相关 ,整合素 β3可以促进HTNV的入胞作用