离子交换柱层析分离霍乱类毒素

用超滤、离子交换层析等方法从霍乱弧菌培养液中提取霍乱类毒素,经免疫电泳、SDS-凝胶电泳、等电点聚焦电泳等方法检测表明此法纯化的霍乱类毒素是纯的,家兔蓝斑试验与杀弧菌抗体均为阴性。     

用离子色谱法同时测定消化道癌症患者血清铜,锌浓度

以离子色谱法（ＩＣ）同时测定３５例正常志愿者及４５例患有消化道良性疾病或不同期癌症患者的血清铜和锌。结果显示：正常志愿者、良性疾病及Ⅰ、Ⅱ期癌症患者的血清铜、锌和铜／锌比值均无明显差异；但Ⅲ、Ⅳ期癌症患者组的血清铜（２６．５３±１．４１μｍｏｌ／Ｌ）和铜／锌比值（２．２５±０．１６）均非常显著地升高（Ｐ＜０．０１），而血清锌（１１．７８±０．４６μｍｏｌ／Ｌ）则明显下降（Ｐ＜０．０５）。表明血清铜、锌和铜／锌比值在诊断Ⅰ、Ⅱ期消化道癌症及鉴别良、恶性疾病方面并无意义，但对术前癌症分期，进而选择更好的治疗措施是有帮助的。     

用亲和层析法纯化牛精浆蛋白

目的：从牛精浆中纯化牛精浆（BSP）蛋白。方法：利用盐析及亲和层析等方法对BSP蛋白进行纯化。结果：用Gelatin-Sephorase4B亲和胶纯化出一个蛋白峰,经电泳及氮基础测序证实为BSP－A1／－A2蛋白。结论：用市售Gelatin-Sephorase4B亲和胶可方便的纯化出BSP－A1／A2蛋白。     

灌注色谱法快速分离纯化糖基化终产物

目的:寻找一种快速有效地分离体外制备糖基化终产物(AGEs) 的方法。方法:通过葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA) 共同孵育体外制备AGEs- BSA, 建立快速灌注色谱法并优化各种参数,比较不同程度及药物干预糖基化反应后的分离结果。结果:经优化相关参数建立的快速灌注色谱法能满意地进行糖基化反应体系中AGEs- BSA和BSA的分析性和制备性分离,AGEs- BSA的峰高和峰下面积可作为糖基化程度的间接指标。结论:灌注色谱法是快速分离纯化糖基化终产物的理想方法     

联苯胺亲和层析纯化尿激酶

利用甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇甲基丙烯酸酯经悬浮聚合反应合成亲水性亲和载体骨架，骨架上的不环氧基与氨水反应，继之与丁二酸酐反应，最后与配基联苯胺偶联制备亲和载体，配基密度为５４μｍｏｌ／ｇ湿胶。亲和载体吸附激酶的最佳条件为ＰＨ４．６和２．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ；测定了吸附等温线，算得离常数Ｋｄ为３１６ＩＵ／ｍｌ，了大吸附量ｑｍ为２．３８３×１０＾４Ｕ／ｍＬ湿胶，洗脱条件为含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ     

El-Tor生物型霍乱弧菌可溶性血凝素的性质分析

用改进的 Finkelstein 方法从 Wg2(El-Tor 生物型)弧菌菌株中制备了可溶性血凝素(SHA)和细胞结合血凝素,并对其性质进行了研究。SHA 具有两种功能,它既能凝集鸡的红细胞又能降解某些蛋白质,具蛋白酶的活性。SHA 的最大活性需要 Ca~(2+),活性不被 D-甘露糖、D-果糖、L-果糖和 L-岩藻糖等单糖抑制。在4℃时其活性最稳定。     

亲和层析法纯化溶栓素

目的 :探讨亲和层析纯化溶栓素的方法。方法 :采用高碘酸钠法制备溶栓素抗体的亲和层析介质纯化溶栓素。结果 :提纯的溶栓素经聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)鉴定为一条带 ,活性回收率为 49.5 %。结论 :亲和层析的高碘酸钠法是纯化溶栓素的一种分离速度快、特异性强、经济、安全可靠的方法 ,并适合于大规模纯化     

Isolation and Purification of Isoaloeresin D and Aloin from Aloe vera by High-speed Counter-current Chromatography

Objective To develop an efficient method to isolate and purify the main components isoaloeresin D and aloin from Aloe vera for its industrial production. Methods High-speed counter-current chromatography was used to isolate isoaloeresin D and aloin in a one-step separation from dried crude extract of A. vera. The biphasic solvent system composed of hexane-ethyl acetate-acetone-water (0.2︰5︰1.5︰5) was used at a flow rate of 1.0 mL/min, while the lipophilic phase was selected as the mobile phase and the apparatus was rotated at 840 r/min. The effluent was detected at 254 nm. Results Isoaloeresin D (53.1 mg) and aloin (106.9 mg) were separated from the crude extract (384.7 mg) with the purities of 98.6% and 99.5%, respectively. Conclusion HSCCC is a powerful technique for isolation and separation of chemical composition from aloe.     

二磷酸腺苷琼脂糖亲和层析法纯化HSP70多肽复合物

采用二磷酸腺苷（ADP）琼脂糖亲和层析的方法，从小鼠肝脏或肿瘤组织中纯化热休克蛋白（HSP）70多肽复合物。用Western blot和硝酸银染色对所纯化的蛋白质进行鉴定，表明纯化的蛋白质为均一的HSP70。为了证实纯化的HSP70是否为HSP70多肽复合物，将此纯化物与10mmol/L ATP,3mmol/L MgCl2,0.5mmol/L CaCl2孵育后，用centricon 10滤过并收集小分子片段，经反向高压液相色谱分析，发现在215nm和220nm有很多吸收峰，证明此HSP70为HSP70多肽复合物。一般情况下，采用ADP琼脂糖亲和层析方法1g组织可以获得120μg HSP70多肽复合物。     

明胶柱纯化人血浆纤维连结蛋白实验条件的研究

用明胶与溴化氢活化琼脂糖珠４Ｂ亲和层析柱,对从人血浆中大规模提纯具有生物活性纤维连结蛋白（ＥＮ）的实验方法进行了研究,优选了加样最上、收得率高的较理想提取方法。实验表明：在明胶亲和柱体积不变的条件下,ＦＮ的吸附量与血浆在柱内的停留时间和血浆上柱总量有关。     

硼酸基亲和层析纯化5—甲基尿苷

利用聚乙烯系大孔聚合物与间氨基苯硼酸偶联制备亲和介质，配基密度为每克湿胶0．92mmol。最佳吸附条件为pH9．0和2．0mol/LNaCl；最佳洗脱条件为0．1mol/LHCl。测定了吸附等温线，算得解离常数Kd为0．155mol/L，最大吸附量qm为每克湿胶78．8mg。将含有胸腺嘧啶的5－甲基尿苷溶液进行亲和层析，5－甲基尿苷收率为56．3％。     

亲和层析法纯化尿激酶

目的研制尿激酶的纯化工艺,为临床尿激酶制剂提供原料。方法以琼脂糖凝胶为载体,对氨基苯甲脒为配基,采用亲和层析法纯化尿激酶。结果尿激酶活性回收率62．96％,精制品纯化4．03倍。结论该方法特异性强,纯化效果好,酶活性回收率高,可作为尿激酶纯化的一种有效方法。     

产肠毒素霍乱弧菌的快速鉴定及基因分型

目的：为适应临床诊断和食品检测的需要,探讨快速检测霍乱弧菌及其分型的方法。方法：用聚合酶链反应（PCR）检测霍乱弧菌肠毒素（CTX）A2-B亚单位靶序列基因,结合随机扩增多态性DNA（PAPD）,对霍乱弧菌进行基因分型。结果：检测的3株O139群霍乱弧菌、3株E1 Tor生物型和4株古典生物型均含有(CTX）A2-B亚单位基因,核苷酸序列分析证实其同源(97.1%～98.9%）。RAPD中用普通引物将不同弧菌分成2种基因谱;即①O139群和El Tor型;②古典型。用重复序列引物进一步将霍乱弧菌分成3型,即①O139群;②El Tor型;③古典型。重复实验结果稳定。结论：用PCR结合PAPD检测霍乱弧菌并对其进行分型,操作简便、快速、敏感而且准确,对临床诊断、食品检测和流行病学调查具有一定的实用性。     

单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析洗脱,病毒抗原,蛋白峰值基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS—PAGE经氨银染色主要有4条区带。     

霍乱弧菌脂多糖的提取与其生物学活性的测定

采用Ｗｅｓｔｐｈａｌ的热酚－水法及高速离心法从霍乱弧菌５６９Ｂ等菌株中提取脂多糖，用血凝法测其效价。并以提取的脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞诱生肿瘤坏死因子的能力测其生物学活性。实验表明霍乱弧菌５６９Ｂ菌株的脂多糖有较强的诱生肿瘤因子的能力，而且其血凝效价也较高。     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。     

人尿胰蛋白酶抑制剂中间品的纯化

人尿胰蛋白酶抑制剂是一种可药用的生物制品，人尿胰蛋白酶抑制剂的粗品经过超滤，离子交换层析和亲和层析三步纯化，获得人尿胰蛋白酶抑制剂的中间品，其效价由原来的１０ｉｕ／ｍｇ纯化到２２４０ｉｕ／ｍｇ，比活为２４５０ｉｕ／ｍｇ蛋白质。活性回收率为５８％     

用高速逆流色谱技术分离纯化莪术中的姜黄素

摘以莪术粗提物为原料，应用高速逆流色谱（HSCCC）技术，通过对制备分离方法和溶剂系统的筛选，采用溶剂系统正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水和正己烷-乙醚-乙醇-水，转速880r／min，流速1.5mL／min，进样量30mg，检测波长254nm，记录仪衰减为200，分离得到姜黄素。通过外标物的对照，^1H-NMR进行结构鉴定，HPLC进行纯度分析，确定得到的物质为姜黄素，纯度为94.069%。