TGF-β1在口腔颌面部恶性肿瘤中的表达

目的 探讨转化生长因子β1（TGF－β1）在人口腔颌面部恶性肿瘤细胞中的表达水平与其生物学行为的关系。方法 以ELISA法分别检测人口腔颌面部手术切除恶性肿瘤组织细胞，人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113，人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC－2和人高转移性涎腺腺样囊性癌细胞系ACC－M，及正常口腔黏膜与黏膜下组织细胞各样本的TGF－β1的表达水平。结果 口腔合面部恶性肿瘤组织TGF－β1的表达水平与正常对照组有非常显著差异（P＜0．01）。Tca8113,ACC-2细胞TGF－β1的表达水平增高正常对照组细胞（P＜0．05）；舌鳞癌系Tca8113与腺要囊性癌细胞系ACC－2的TGF－β1的表达水平无显著差异；高转移腺样囊性癌细胞系ACC－M的TGF－β1的表达水平与ACC－2相比，有非常显著的降低（P＜0．01）；高转移腺样囊性癌细胞系ACC－M无血清培养液中TGF－β1的分泌量亦低于任何其它细胞。结论 TGF－β1的表达水平可能与恶性肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移有密切关系。     

膜联蛋白A1表达下降在口腔鳞癌中的意义

目的：研究膜联蛋白A1（ANXA1）在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理的关系。方法：应用实时定量PCR、Western印迹方法和免疫组化方法检测ANXA1在口腔鳞癌细胞株和30例原发口腔鳞癌中的表达，采用SPSS10．0软件包对数据进行非参数检验。结果：与人永生化口腔黏膜上皮细胞（HIOEC）相比，Tca8113、TSCC、OSC和NT细胞中ANXA1的mRNA表达降低；Tca8113、TSCC、CAL-27、OSC和NT细胞中ANXA1的蛋白表达降低。30例口腔鳞癌组织标本中，ANXA1的mRNA和蛋白表达均较癌旁组织降低（p〈0．001）。ANXA1的表达水平与肿瘤的病理分化程度有关（mRNA：P=0．007；蛋白：P=0．006），与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移无关。结论：ANXA1在口腔鳞癌中表达降低，可能与肿瘤的发生、发展和组织分化有关。     

E-Cadherin和CD44v6对Tca8113细胞系侵袭性影响的实验研究

目的：通过检测粘附分子在立体胶原凝胶培养系统中对口腔黏膜鳞状细胞癌（SCC）细胞侵袭性的影响，加深了解口腔癌细胞侵袭和转移的可能机制，并评估其作为口腔癌预后判断指标的可行性。方法：应用免疫组织化学方法检测粘附分子E-cadherin(E-cad)和CD44v6在舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的表达；同时在体外建立鼠尾胶原凝胶三维立体侵袭系统，在此系统中观察粘附分子对Tca8113细胞侵袭胶原能力的影响。结果：免疫组织化学检测显示，E－cad在Tca8113细胞有阳性表达，而CD44v6表达阴性；胶原凝胶侵袭实验表明：E-cad可以有效地减少Tca8113细胞在胶原凝胶中的浸润细胞数和程度（0．01＜P＜0．05）。结论：虽然粘附分子只是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素之一，但体外实验表明：E-cad具有抑制肿瘤细胞胶原侵袭的作用，提示E-cad有可能成为一种较好的临床评判口腔黏膜鳞癌预后的有用指标。     

口腔鳞状细胞癌中趋化因子受体CCR7的表达及其与颈部淋巴结转移的关系

目的 探讨趋化因子受体CCR7在口腔鳞状细胞癌中的表达及在口腔鳞癌颈淋巴结定向转移中的作用.方法 应用免疫组化、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting等方法检测85例口腔鳞状细胞癌组织以及口腔鳞癌细胞系Tca8113和腺样囊性癌细胞系(adenoid cysticcareinoma,ACC-M)中CCR7的表达,分析CCR7表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系.比较Tca8113和ACC-M对淋巴结的黏附能力,以及CCR7抗体对其黏附能力的影响.结果 66%(56/85)的口腔鳞癌组织存在CCR7的阳性表达,其中淋巴结转移组的CCR7阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P=0.015).RT-PCR和Western blotting检测结果也证实,CCR7在口腔鳞癌中有阳性表达.Tca8113细胞系对淋巴结的黏附能力明显高于ACC-M细胞系,并且能够被CCR7抗体有效阻断.结论 趋化因子受体CCR7在口腔鳞癌的发生发展及淋巴结转移中起着重要的作用.     

TGF-β1、Smad4和CyclinD1在口腔鳞癌中的表达和意义

目的：探讨TGF-β1、smad4及cyclinD1在口腔鳞癌发生发展过程中的作用。方法：采用免疫组化SP法分析TGF-β1、smad4、cyclinD1在正常口腔黏膜和口腔鳞癌组织中的表达情况。结果：TGF-β1蛋白阳性表达率在正常口腔黏膜组织为35．7％,口腔鳞癌组织中为69．0％（P〈0．05）;smad4在口腔鳞癌组织中的表达率为54．7％,明显低于口腔正常黏膜85．7％（P〈0．05）;TGF-β1、smad4表达的改变与口腔鳞癌淋巴结转移有关;smad4和cy-clinD1的表达呈负相关（P〈0．05）。结论：TGF-β1的过表达与口腔鳞癌侵袭转移紧密相关;smad4的失表达不仅有利于提高细胞对TGF-β1的生长抵抗,也增强了口腔鳞癌的侵袭性;cyclinD1过表达与口腔鳞癌的发生和发展密切相关。     

LncRNA FOXCUT在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能研究

目的：分析LncRNA( long non-coding RNA,LncRNA) FOXCUT基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能,探讨口腔鳞癌分子标志物及靶基因。方法采用实时定量荧光聚合酶链反应检测23例鳞状细胞组织及口腔鳞癌细胞Tca8113和SCC-9中FOXCUT的表达,然后采用MTS(细胞增殖实验)单细胞克隆及细胞划痕等细胞功能实验检测FOXCUT基因下调以后在口腔鳞癌细胞Tca8113中的功能。结果 LncRNA FOXCUT在23例口腔鳞癌有21例高表达,在Tca8113和SCC-9细胞中表达均高于人正常黏膜HOK细胞中的表达。当Tca8113细胞转染FOXCUT siRNAs后,FOXCUT的表达降低了,在体外口腔鳞癌Tca8113细胞功能实验中,FOXCUT表达下调后抑制细胞增殖和细胞迁移能力。结论 LncRNAFOXCUT可能与口腔鳞癌的发生发展相关,可能成为口腔鳞癌潜在的新型生物标志物及治疗靶标。     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。     

PTTG和bFGF在口腔鳞癌中的表达及意义

目的：探讨垂体肿瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene，PTFG）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）在口腔鳞癌中的表达及相互关系，研究它们的表达与肿瘤临床病理指标的联系。方法：应用SP染色法检测PTTG蛋白和bFGF在55例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织中的阳性率。结果：在口腔鳞癌中PTTG和bFGF的阳性表达率分别为78．2％和67．3％，其阳性率及表达等级均显著高于正常对照组（P〈0．05）。PTTG在中一低分化组和有淋巴结转移组中的表达显著高于高分化组和无淋巴结转移组（P〈0．05）。PTTG表达与bFGF表达成等级正相关（r=0．382，P〈0．05）。结论：PTFG或bFGF与口腔鳞癌生物学行为及预后有密切关系，二者的联合检测，有助于口腔鳞癌恶性程度和预后的判断。     

MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达

我们采用RT PCR法检测人舌鳞癌Tca8113细胞株的总RNA ,以确定一些基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达状况 ,为进一步在口腔肿瘤组织中检测相关的基因以及开展肿瘤特异性免疫治疗和基因治疗奠定基础。1.材料和方法 :(1)实验对象 :Tca8113细胞株购于上海细胞研究所。另选用 10例正常舌部组织标本对照。(2 )研究方法 :用RT PCR法分别检测MAGE 1、MAGE 3、GAGE1 6、GAGE1 2及BAGE基因mRNA表达水平 ,以GAPDH基因作为检测内对照。①用Trizol(Gibco产品 )提取细胞株和组织标本总RNA ;②用逆转录酶和Oligo dT引物 (Sagontech…     

热放疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的：探讨热放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：实时定量逆转录PCR（RT—PCR）检测热放疗对Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1基因（MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（GST-π）表达的影响和检测热放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA和Tca 8113细胞热放疗后耐药基因MDR1的表达在4h和24h无明显改变（P〉0．05）。MRP1基因的表达在4h和24h组均有明显下降（P〈0．05），GST-π基因表达在4h组Tca 8113和Tca 8113／CBDEA的表达无明显改变（P〉0．05），在24h组有明显下降（P〈0．05）．热放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显上升。结论：热放疗联合应用抑制了放疗造成的耐药基因表达上升，增加了细胞内的药物浓度，热放疗联用不会促使肿瘤细胞产生MDR。     

组织蛋白酶B在口腔黏膜上皮癌变过程中的表达及意义

目的：探讨组织蛋白酶B（Cathepsin B,CB）在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法：以口腔黏膜上皮永生化细胞系（human immortalized oral epithelia cell line,HIOEC）及经过苯丙芘[benzo（a）pyrene,B（a）P]诱导产生鳞状细胞癌细胞（HB）而形成的口腔鳞癌体外癌变模型为研究对象,通过双向凝胶电泳（2-DE）和质谱分析（LC-MS/MS）筛选和鉴定出差异蛋白质CB。采用实时定量PCR、Western印迹和免疫组化方法,检测口腔鳞癌细胞和30例原发口腔鳞癌标本中的mRNA及蛋白质表达水平。采用SPSS10.0软件包对数据进行非参数检验。结果：与永生化HIOEC相比,HB和CAL27细胞中CB的mRNA水平显著升高,HB、Tca8113、TSCC、CAL27和OSC细胞中CB蛋白表达水平明显升高。30例口腔鳞癌患者癌组织中CB的mRNA和蛋白表达水平均较癌旁组织升高（P〈0.01）。CB的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、病理分化程度无显著相关性。结论：CB在口腔鳞癌中的表达明显升高,提示其与肿瘤的发生、发展具有一定关系。     

蛋白磷酸酶2A-Aβ在口腔鳞状细胞癌中表达的研究

目的研究蛋白磷酸酶2A-Aβ(PP2A-Aβ)在正常口腔黏膜和口腔鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达及意义。方法通过免疫组化S-P方法检测30例口腔鳞癌标本和10例正常口腔黏膜组织中蛋白磷酸酶2A-Aβ蛋白的表达,采用SPSS12.0对数据进行分析。结果PP2A-Aβ蛋白在口腔鳞癌及正常口腔黏膜阳性表达率分别为33.3%和90.0%,两组之间差异有显著性(P=0.006);在高-中分化和低分化鳞癌中表达阳性率分别为47.4%和9.1%,两组之间差异有显著性(P=0.049)。而PP2A-Aβ蛋白的表达与临床分期、淋巴结转移、病例的性别和年龄等因素无关。结论PP2A-Aβ蛋白与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,与口腔鳞癌的组织学分级相关,而与临床分期、淋巴结转移、年龄和性别未显示相关性。     

口腔鳞癌中间隙连接蛋白43和E-钙粘素表达及相关性研究

目的：探讨间隙连接蛋白43（Cx43）和E-钙粘素（E-cad）在口腔鳞癌中的表达及其相关性：细胞分化诱导剂全反式维甲酸（ATRA）对人舌鳞癌细胞株（Tea8113）中Cx43和E-cad表达的影响。方法：应用免疫组织、细胞化学结合免疫印迹（western blot）技术，观察口腔鳞癌组织中及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43和E-cad的变化。结果：正常口腔鳞状上皮中Cx43和E-cad主要表达于细胞膜：在鳞癌组织中，Cx43和E-cad细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异（Cx43：x^2=7．42、12．43，p〈0．05、p〈0．01；E-cad：x^2=7．79、9．688，p〈0．05、p〈0．01）。在鳞癌组织同一标本中Cx43和E-cad表达具有正相关性和一致性（r=0．577，p〈0．0005）；舌鳞癌细胞经ATRA诱导后，Cx43和E-cad蛋白表达增加。结论：Cx43和E-cad在口腔鳞癌的发生和发展过程中具有协同作用；ATRA可以通过上调Cx43和E-cad的表达，实现对肿瘤生长的抑制。     

TGF-β1和Smad7在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7在口腔鳞状细胞癌(OSCC)、正常口腔黏膜组织中的表达和意义。方法通过免疫组织化学SP法检测TGF-β1、Smad7在31例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常口腔黏膜组织中的表达,探讨TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性因素。结果 TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌中的阳性率高于正常口腔黏膜组织(P<0.05),二者在口腔鳞癌有淋巴结转移组的表达率明显高于无淋巴结转移组的表达率(P<0.05),二者在口腔鳞癌TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期中的阳性表达率低于Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率(P<0.05),与患者年龄和性别无关。TGF-β1和Smad7在口腔鳞癌中的表达呈显著正相关(r=0.379,P<0.05)。结论 TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌组织中呈过表达,可能作为判断口腔鳞状细胞癌预后的指标。     

基质金属蛋白酶-2与口腔鳞癌颈淋巴结转移关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶－2（MMP－2）与口腔鳞癌颈淋巴结转移的关系。方法 通过免疫组化法和蛋白明胶酶谱法对40例口腔鳞癌（OSCC）癌组织、正常口腔黏膜组织及血浆中（MMP－2）的表达和含量进行研究，并与口腔鳞癌的临床病理特征进行统计学分析。结果 OSCC癌组织、正常口腔黏膜中均表达MMP－2，而OSCC癌组织中MMP－2表达与正常口腔黏膜组织相比呈过量表达，MMP－2表达升高和活性增加与口腔鳞癌病理分级临床分期无关，但与口腔鳞癌颈淋韦结转移密切相关。结论 MMP－2可作为判断口腔鳞癌颈淋巴结转移的指标。     

Naa10p 表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素敏感性的影响

目的：观察 N-α乙酰基转移酶（Naa10p）表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素（PYM）敏感性的影响。方法：采用慢病毒体系分别构建干扰及过表达 Naa10p 的 Tca8113细胞株,并设立相应的对照细胞 Tca8113-LV-NC,鉴定干扰和过表达效率,MTS 法检测药物处理后各处理组细胞对 PYM的敏感性。结果：干扰 Naa10p 的 Tca8113-LV-shNaa10p 细胞、过表达Naa10p 的 Tca8113-LV-Naa10p 细胞与对照细胞 Tca8113-LV-NC 对平阳霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（20．772±0．106）μg／ml、（2．157±0．123）μg／ml、（6．301±0．069）μg／ml（组间比较,P ＜0．05）。结论：下调 Naa10p 表达可降低口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性,上调 Naa10p 表达可增强口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性。     

XIAP、XAF1在正常口腔黏膜角化细胞和Tca8113细胞中的表达与定位

目的 明确人正常口腔黏膜角化细胞（hNOK）和舌鳞癌细胞系Tca8113细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）与XIAP相关因子1（XAF1）的表达与定位情况。方法 对hNOK和Tca8113细胞进行体外培养，间接免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜检测细胞中XIAP和XAF1蛋白的表达与亚细胞定位。结果 在hNOK中XIAP微弱表达，主要分布于胞质和核周区域，而Tca8113细胞中XIAP呈高强度表达，胞质和胞核中均有分布。在hNOK中XAF1主要分布于胞核内，而Tca8113细胞中XAF1均匀分布于胞质与胞核。结论 在口腔黏膜癌变过程中，XIAP可能通过过度表达发挥重要的抗凋亡作用，而XAF1不能有效拮抗XIAP的作用。     

S100A4基因与口腔鳞癌相关性分析

目的：研究S100A4mRNA表达与口腔鳞癌分化、转移关系。方法：分别提取40例口腔鳞癌组织及远端正常口腔黏膜组织的RNA,用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法测定S100A4基因在口腔鳞癌和配对组织mRNA水平的差异表达情况。并结合临床资料,对S100A4基因差异表达与口腔鳞癌病人临床病理参数进行相关性分析。结果：S100A4mRNA在口腔鳞癌中高表达,与癌旁正常口腔黏膜组织比较,具有显著性差异（P〈0．01）。S100A4mRNA的表达水平与口腔鳞癌的分化、淋巴结转移成负相关。S100A4mRNA与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关。结论：S100A4基因表达和口腔鳞癌的发生发展、分化、侵袭转移密切关}S100A4mRNA可作为判定口腔鳞癌恶性程度及评价预后的重要指标,也可作为新的生物标志物及治疗口腔鳞癌浸润转移的潜在靶目标。     

Tca8113细胞系下颌下淋巴结转移动物模型的建立

目的:建立人口腔鳞癌Tca8113裸鼠舌体及颊黏膜移植瘤淋巴结转移模型,研究分析两种转移模型的特性。方法:通过在裸鼠舌体及颊黏膜内注射接种Tca8113细胞,建立移植瘤动物模型。舌体及颊部原发灶分别在2周和4周时被切除,观察6周时下颌下淋巴结转移情况。通过组织切片HE染色法计算淋巴结转移率,并采用CK蛋白免疫组织化学染色方法计算淋巴结微灶转移率。结果:13只舌体接种移植瘤裸鼠中,有3只出现下颌下淋巴结转移,5只出现淋巴结微灶转移,转移率达到61.54%。15只颊黏膜接种移植瘤裸鼠中,3只出现下颌下淋巴结转移,3只出现淋巴结微灶转移,转移率为40.00%。结论:裸鼠舌体及颊黏膜接种Tca8113建立的转移模型具有一定的转移率,并能较好地模拟临床口腔鳞癌的转移,为实验研究提供了良好的动物模型。     

TrkB在口腔鳞癌浸润和淋巴结转移中的功能

目的：通过实验对比口腔鳞癌（oral squamous-cell carcinoma,OSCC）与口腔正常黏膜中酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase B,TrkB）的表达,观察TrkB和生存基因蛋白Survivin的表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系,从而了解TrkB在口腔鳞癌中的功能。方法：选用人正常口腔黏膜组织10例OSCC标本57例,采用免疫组化方法检测TrkB和Survivin的表达。结果：在口腔鳞癌中TrkB和Survivin的阳性表达率显著高于它们在正常口腔黏膜组织中的表达（P〈0.05）。有淋巴结转移组和肌层浸润组的OSCC组织TrkB和Survivin的阳性表达显著高于无淋巴结转移组和黏膜及黏膜下层浸润组（P〈0.05）。结论：TrkB在OSCC中呈高表达,并与Survivin联合表达,可能对OSCC的浸润和转移有促进作用。