培养神经元及肝细胞蛋白质样品制备方法的比较研究

目的 :优化神经元和肝细胞蛋白样品的制备方法 ,以提高双向电泳分析结果的正确性和可靠性。方法 :采用不同的细胞裂解液在不同的裂解条件下提取培养神经元或肝细胞的全细胞蛋白质 ,考马斯亮蓝G - 2 5 0测定蛋白质含量 ,SDS -PAGE、双向电泳对蛋白质进行电泳分离。结果 :蛋白质含量测定及电泳图谱的对比分析可见 ,用酶消化法和机械收集法所得蛋白质样品含量均较直接裂解法低 ;蛋白质抽提液中还原剂及去污剂的不同选择对结果的影响较大。结论 :采用培养瓶中细胞直接裂解法较酶消化或机械收集法收集细胞再提取蛋白质更为有效 ,还原剂TBP有利于提高蛋白质双向电泳结果的质量 ,在去污剂的使用方面神经元裂解宜采用 4 %CHAPS ,而肝细胞裂解则宜采用 2 %TritonX - 10 0。     

冻结破碎法提取组织蛋白方法初探

目的 比较冻结破碎法和匀浆法提取组织蛋白的效率,拟建立一种提取组织蛋白的新方法.方法 分别用冻结破碎器具SK-100和匀浆机处理小鼠不同部位的组织,提取总蛋白后进行蛋白定量,然后用Western blot检测β-actin蛋白表达.结果 冻结破碎法虽比匀浆法耗时稍长,但与匀浆法提取的总蛋白浓度以及β-actin蛋白表达无明显统计学差异.结论 匀浆法与冻结破碎法均可以用于提取小鼠各种组织的蛋白,都可以在实验室中展开,进而在蛋白质水平上进行相关功能的研究.     

PCR检测技术中模板DNA的简易快速提取法

本文报道用胰酶消化分散组织细胞,再用蛋白酶K和非离子去垢剂从肺癌组织细胞中提取DNA。结果表明:本方法只需 100mg左右的组织即可提取 10μg左右的 DNA,并且简单快速,省去以往用匀浆器破碎细胞的繁琐操作,提取的DNA不需用酚和氯仿抽提就可直接用于PCR。     

大鼠脑阿片受点溶脱中微量蛋白质的测定-一种简单的测定蛋白质方法

在阿片受体溶脱和纯化过程中,随着纯化倍数的增加,溶脱液中蛋白质总量(内含阿片受体)逐渐减少,达到一般蛋白质测定法测定范围以下。1985年Krystal等首创了一种微量蛋白质测定方法,可测范围为15～2000ng/100μl的微量蛋白质。本实验在Krrstal工作的基础上就戊二醛,离子、pH、去污剂对测     

循环微粒对大鼠肺动脉内皮的损害及与肺动脉高压的关系

目的:研究循环微粒(MPs)在肺动脉高压(PH)大鼠体内含量的改变及其与肺动脉高压的关系。方法:将48只雄性Wistar大鼠中30只随机分为对照组、MCT3组(M3组)、MCT5组(M5组)3组,每组10只。M3组、M5组用野百合碱一次性腹腔注射诱导PH模型,剩余的18只用于后续血管环检测。M3组和M5组分别在注射野百合碱后3周(中期)和5周(晚期)时右心导管法测定右心室收缩压(RVSP)来间接反映肺动脉压力,然后用腹主动脉采血法抽取大鼠血液并提取和检测MPs。用提取的三组MPs刺激大鼠肺动脉(每组6只)后检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、弹性蛋白(elastin)蛋白的变化。结果:大鼠血浆MPs含量随PH病情进展而逐渐升高(M5>M3>C);MPs处理肺动脉后可下调eNOS表达,但是上调elastin表达,而且这一作用与PH病情相关,即M5作用强于M3(P<0.05)。结论:MPs随PH进展逐渐升高,升高的MPs可以损害内皮功能,这一发现进一步完善了PH的发病机制,为将来防治PH提供理论依据。     

电泳分析白血病小鼠血清及脾细胞匀浆蛋白质

本文应用不连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定L615和我实验室制备的抗白血病生物活性物质治疗后的L615小鼠血清及脾细胞匀浆蛋白质组份。结果是L615纯系小鼠血清蛋白质谱中,含有13—16条分带,脾细胞匀浆蛋白质中α球蛋白含量最多。L615白血病小鼠血清,脾细胞匀浆蛋白质的α_1球蛋白呈现1条异常分带,而615小鼠和80—11小鼠则缺如。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的　建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法　用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果　提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论　本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的 建立一种快速简便提取嗜麦芽单胞菌（Xanthomonas maltophilia)基因组DNA的方法。方法 用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构，使胞内核酸释放，用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质，异丙醇沉淀DNA，TE溶解DNA。结果 提取的DNA琼脂糖电泳图谱与Hauben及Dufresne方法提取的DNA图谱相同，DNA含量为342-388μg/ml，OD240/OD280为1.88-1.90。DNA能被EorI酶切消化。结论 本方法能快速简便提取X.maltophilia DNA，提取的DNA含量较高、纯度较好，可用于酶切分析、构建文库及PCR操作。     

应用聚乙二醇分离SS-A抗原

应用非离子水溶性聚合物,如聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)分离蛋白质生物大分子已在研究中得到广泛应用,但用于分离 SS-A 抗原尚未见报导。我们应用 PEG-6000沉淀法从人脾脏中提取 SS-A 抗原。方法简便,可望在提取其他抗原时亦得到广泛应用。1 抗原制备将外科手术摘除的人脾用冷生理盐水冲洗,剔除筋膜后,剪碎,与等量0.01MPBS(pH7.2)混匀,在匀浆器中匀浆三次,每次30s。然后离心2h(4000×g),收集上清液备用。     

非离子去污剂提高双向电泳银染后胶内酶切的效率

目的 改进二维凝胶电泳银染色后的胶内酶切方法,提高蛋白质的鉴定率.方法 应用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(HD-MS),对改进方法(酶切中加入非离子去污剂正十二烷-β-D-麦芽糖苷)和原有方法进行比较.结果 2D胶上的10个蛋白质斑点中的蛋白质用两种方法均得到明确的鉴定结果,但60％的蛋白质用改进方法鉴定的氨基酸序列覆盖率较原有方法明显提高.结论 改进后的方法简便,适用于凝胶为基础的蛋白质组学研究.     

叶酸对硝喹小肠毒性防护的机制探讨

本文用232只小鼠进行4组实验。(1)灌服硝喹醋酸盐(N,570mg/kg×1)后分别肌注生理盐水(NS组)和叶酸(NF组,8mg/kg×1)。药后96h,NS组小肠绒毛显著减少、变短、上皮脱落、隐窝细胞退变,而NF组变化轻微。(2)硝喹能显著降低小肠DNA含量,随剂量增大和时间延长(至72h)而越明显。(3)分别伍用时酸及甲酰四氢叶酸钙后,与NS组比较,小肠DNA含量降低未见明显差异。(4)伍用叶酸后[~3H]TdR参入小肠DNA量比NS组增多。以上结果提示叶酸能加速DNA合成。从而有利于小肠粘膜上皮细胞的修复。     

右美托咪定改善术后早期认知功能障碍的研究

目的：探究右美托咪定对创伤大鼠术后早期认知功能的影响。方法：建立手术创伤手术模型,并进行水迷宫实验将界定为术后认知功能障碍（Postoperative Cognitive Dysfunction,POCD）的50只大鼠进行随机分组,即生理盐水对照组（对照组）、右美托咪定组（DEX组）。术后3天、7天分别进行Morris水迷宫实验测试大鼠定位航行和空间探索能力,并在药物或生理盐水干预结束后72小时从各组分别随机抓取3只大鼠,取海马组织通过Western blot测定相关蛋白表达情况。结果：术后第3天、第7天DEX组大鼠潜伏期时长较对照组明显降低,平台穿越次数较对照组明显上升,两组间比较有统计学差异（P<0.05）。术后3天,DEX组与对照组比较,IBAI、β-actin蛋白的表达水平明显降低（P<0.05）。结论：右美托咪定可以明显善大鼠术后的认知功能。     

镉对大鼠胚胎损害作用的实验研究

目的 :探讨镉对大鼠胚胎的毒性效应及可能机制。方法 :雌雄性 SD大鼠按 2∶ 1同笼交配获取 38只孕鼠 ,随机分为 4组 (对照组 ,低镉组 ,中镉组 ,高镉组 )。分别在妊第7、1 0、1 3天经腹腔注射生理盐水和不同剂量的氯化镉 ( Cd Cl2 ) ,妊 2 1 d,剖宫取胎鼠 ,活杀取出胎鼠的肝、脑组织称重后测定 Cd、Zn、Ach、AKP、DNA含量。结果 :1高镉组未见存活胎鼠 ;2染镉组胎鼠肝中镉增加 ( P<0 .0 5 ) ,脑中锌有下降趋势 ;3染镉组胎鼠肝组织中的AKP活性 ,脑组织中的 Ach、DNA含量较对照组减低。结论 :1高剂量的镉可使孕鼠胚胎发育异常 ;2母鼠染镉可致胎鼠肝中 AKP酶活性降低及脑组织中 Ach、DNA含量减少 ,抗脂质过氧化能力减弱。     

赐百龄胶囊质量标准的实验研究

赐百龄胶囊系选用螺旋藻为原料直接精制而成。本研究采用吸收光谱法鉴别蓝藻蛋白，可见６２０ｎｍ的特征吸收峰。采用三氯化锑试管反应鉴别β－胡萝卜素，显蓝绿色。采用ＴＬＣ鉴别氨基酸，可显７个斑点。采用ＴＬＣ鉴别多糖水解液，可显３个斑点，其中２个斑点与葡萄糖、半乳糖对应．采用氨基酸分析仪测定游离、水解氨基酸，含丰富的人体必需的氨基酸，总量高达５５％以上。采用凯氏定氮法测定总氮量，提示蛋白质总量高达６０％以上。采用柱层析－ＵＶ法测定β－胡萝卜素，含量为４４ｍｇ％。     

环孢素影响化疗药物对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用

[目的]评价不同浓度环孢素(cyclosporin,GSA)影响化疗药物卡铂与足叶乙甙抑制视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞的促效作用.[方法]实验分为卡铂组(G1)、卡铂 0.5 mg/L CSA组(G2)、卡铂 1.0mg/L CSA组(G3)及足叶乙甙组(G4)、足叶乙甙 0.5 mg/L CSA组(G5)、足叶乙甙 1.0 mg/L CSA组(G6),每组各加样5孔.G7组为不同浓度CSA单独作用于Rb细胞.用从0.004至1.00mg/L倍数增加的9个不同浓度含量化疗药物卡铂和足叶乙甙及加入0.5 mg/L和1.0 mg/L浓度的环孢素作用于体外培养的SO-Rb50细胞.采用MTT法比较各组Rb细胞的生长抑制情况,通过计算Rb细胞抑瘤率、半数细胞抑制所需药物浓度IC50值及倒置显微镜下Rb细胞形态学检查,观察环孢素影响化疗药物抑制Rb细胞的作用.[结果]卡铂及足叶乙甙加入CSA作用于SO-Rb50细胞,其细胞抑瘤率较单独应用卡铂及足叶乙甙时增高,G1～G6组的IC50值(mg/L)分别为:0.335、0.183、0.130、0.113、0.099、0.077,随着CSA的加用及浓度的增加,IC50值逐渐降低.G1与G2、G3组及G4与G5、G6组的抑瘤率分别作t检验,统计学分析均有显著性差异(P＜0.01).G1与G2、G3组及G4与G5、G6组IC50的分别作方差分析检验,统计学分析均有显著性差异(P=0.005).单纯CSA组抑瘤率与药物浓度无相关关系(P>0.1).倒置显微镜观察显示加用环孢素后随药物浓度增加Rb细胞坏死变形较卡铂组及足叶乙甙组明显.[结论]CSA单独作用于SO-Rb50细胞无抑制杀灭作用,但CSA能促进卡铂及足叶乙甙对SO-Rb50细胞的抑制杀灭作用.随着CSA浓度增加,卡铂及足叶乙甙对Rb细胞的抑制作用越明显.     

同型半胱氨酸对大鼠心肌细胞钙摄取的影响

目的：研究同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，ＨＣＹ）对心肌细胞钙摄取的影响及其作用机制。方法：采用同位素技术测定培养大鼠心肌细胞钙的摄取，观察不同ＨＣＹ浓度对培养心肌细胞钙摄取的影响及蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）抑制剂或蛋白磷酸酶抑制剂与ＨＣＹ同时培养对培养心肌细胞钙摄取的影响。结果：ＨＣＹ呈浓度依赖性促进心肌细胞钙的摄取，ＨＣＹ促进心肌细胞钙摄取的作用为ＰＫＣ抑制剂Ｈ７和多粘菌素（ｐｏｌｙｍｙｃｉｎＢ，ＰＢ）所抑制，并且受蛋白磷酸酶抑制剂Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ作用而增强。结论：ＨＣＹ促进心肌细胞钙摄取，可能与ＰＫＣ所介导的蛋白磷酸化过程有关。     

糖皮质激素对支气管哮喘患者嗜酸性粒细胞趋化因子作用临床探讨

目的:探讨糖皮质激素对支气管哮喘患者血清、痰液中嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达量的影响及其临床意义。方法:选取哮喘急性发作患者30例作为观察组,随机选取10名健康对照。通过对观察组用药前、后以及健康对照组所采集的血清以及诱导痰液上清中的嗜酸性粒细胞中趋化因子进行检测,并与哮喘患者肺功能进行相关性分析。结果:哮喘急性发作组,血清以及诱导痰液中eotaxin表达水平明显高于健康对照组,使用糖皮质激素控制症状后,eotaxin显著性下降,用药前后比较差异有显著性。哮喘发作组血清eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.51127,两者呈现负相关。痰液eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.4276,两者呈现负相关。结论:经糖皮质激素治疗后,哮喘患者eotaxin指标明显下降,eotaxin与FEV1%呈负相关,说明糖皮质激素控制哮喘炎症反应的机制,可能与eotaxin下降有关,从而起到治疗哮喘的作用。     

毛冬青甲素对豚鼠心肌收缩力及家兔主动脉条收缩张力的作用

毛冬青甲素(Ilexonin A)是从毛冬青叶提炼出来经半合成的一种化合物。本文用豚鼠离体心房肌灌流法及家兔主动脉条灌流法,观察到毛冬青甲素有增强豚鼠心房肌收缩力、阻遏去甲肾上腺素诱发的家兔主动脉条收缩张力升高的效应,对完全松弛的家兔主动脉条无增加其张力的作用。本文讨论了毛冬青甲素增强心肌收缩力及降低血管张力的可能机制。     

羟乙基淀粉对血液流变学的影响

目的 :观察羟乙基淀粉 ( HES)对手术病人血液流变学的影响。方法 :将 40例外科手术病例随机分为实验组 ( HES)和对照组 (乳酸林格液 )各 2 0例。全部病人采用硬膜外麻醉 ,术中分别输注 HES和乳酸林格液各 1 0 0 0 ml。采血对全血粘度、血浆粘度值、血沉、红细胞压积、全血还原粘度、血沉方程 K值、全血相对粘度、红细胞变形指数 TK等进行检测 ,以观察 HES对手术病人血液流变学的影响。结果 :HES组不同切变的全血粘度、红细胞压积、全血高切还原粘度及红细胞变形指数 TK输注后明显降低 ( P<0 .0 1 ) ,血浆粘度、全血低切还原粘度、全血高切相对粘度也有降低 ( P<0 .0 5 )。结论 :HES对手术病人血液流变学有明显影响     

多种抗心律失常药对大白鼠复灌性心律失常的影响

本文研究哌唑嗪,氨酰心安、普鲁卡因胺,氯卡胺、维拉帕米、利多卡因和胺碘酮对大白鼠复灌性心律失常的影响,结果表明:静注哌唑嗪0.2mg/kg、氯卡胺5mg/kg、维拉帕米0.5mg/kg、利多卡因5mg/kg、胺碘酮50mg/kg 均能显著降低复灌性心律失常的发生率、持续时间及室顺的发生率,普鲁卡因胺50mg/kg、氨酰心安5mg/kg 也能缩短复灌性心律失常的持续时间及降低室颤的发生率。