帕金森病模型大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元改变的实验研究

目的：探讨帕金森病（Parkinson’s disease，PD）大鼠模型中脑腹侧被盖区（ventral tegmentalarea，VTA）多巴胺能神经元的改变。方法：应用6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）注射右侧黑质致密区（substantia nigra compacta，SNc）制作PD大鼠模型，进行阿朴吗啡（apomorphine，APO）诱发行为学观察、电镜、尼氏染色观察中脑VTA神经元的改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）免疫组织化学ABC观察其DA能神经元的改变并进行图像分析。结果：APO诱发PD大鼠模型异常旋转行为，尼氏染色见PD大鼠中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化，VTA TH阳性神经元数量减少，形态学改变。结论：中脑VTA DA能神经参与PD模型大鼠的改变；APO能诱导6-OHDAPD模型大鼠的旋转行为，其强弱可能与TH^＋神经元数量直接相关。     

胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植治疗Parkinson病的实验研究

为了提高移植多巴胺(DA)能神经元的存活率和促进神经元生长,将胚鼠腹侧中脑和胚肾联合移植入Parkinson病(PD)模型大鼠脑内,检测胚肾对移植DA能神经元的影响。先用神经毒剂6 OHDA损毁大鼠左侧中脑被盖腹侧区和黑质致密部建立PD动物模型,再将胚脑的腹侧中脑(A组)、胚脑的腹侧中脑和胚肾(B组)分别移植入左侧纹状体尾壳核,C组为空白对照。于移植后3d、1月、3月将动物处死,采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化法观察3组动物移植部位DA能神经元的存活和生长状况。在移植部位可见B组较A组的TH阳性神经元和纤维的数量明显增多,C组的移植部位未见TH阳性神经元和纤维;A、B两组的移植针道及其周围也有TH阳性神经元和纤维;B组的TH阳性神经元数量、体积和神经纤维的密度均大于A组。移植1个月和3个月后,A、B两组大鼠的旋转行为均较C组减少(P<0. 05)。以上结果提示胚肾具有良好的神经营养作用,能促进移植DA能神经元的存活和生长。     

胚基底前脑原位移植与靶区移植对修复Alzheimer病鼠的影响

本文用使君子酸(quisqualic acid,QA)分两点注入Sprague-Dawley大鼠左侧基底大细胞核制成Alzheimer病动物模型。破坏1周后,一组动物将同种胚基底前脑悬液注入模型鼠的额叶和顶叶,另一组动物则将胚基底前脑悬液原点注入破坏区。移植后5个月行为测试被动回避试验及主动回避试验,与破坏后1周的测试结果相比有显著性差异(p<0.05),表明移植后行为有明显改善。但两组动物移植后行为改善的程度无明显差异。形态学观察发现两组动物移植区均有AChE阳性神经元及阳性纤维终末形成的斑片。原位移植区范围较皮质移植区略大,移植区所见AChE阳性神经元形态与正常基底大细胞核的细胞相似。实验结果表明原位移植亦能获得与靶区移植同样的效应,提示基底大细胞核区在受损后可能产生某种神经营养因子,促进了胚脑细胞的存活。Alzheimer病模型鼠机能的恢复不一定与神经网络的重建有关,而与具有产生ACh递质的内源性微泵有关。     

帕金森病模型大鼠中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元的改变

目的探讨帕金森病(PD)模型大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的改变。方法将6-羟基多巴胺(6-OHDA)分别注入实验组大鼠左侧黑质致密部和中脑被盖腹侧区以建立帕金森病模型,于术后4d、7d、14d、21d、28d腹腔注射阿扑吗啡(apomorphine,APO),观察并记录大鼠行为学变化情况,利用Nissl染色、酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色观察大鼠中脑腹侧被盖区神经组织及TH免疫阳性神经元的改变。结果APO诱发实验组PD大鼠均向健侧(右侧)旋转,旋转启动时间逐渐缩短,持续时间逐渐延长,旋转速度逐渐加快,至术后2周旋转行为趋于稳定;Nissl染色见实验组PD大鼠损毁侧(左侧)中脑VTA区神经元数目显著减少,尼氏体模糊,颗粒及密度均降低,伴有大量胶质细胞增生,术后2周、4周注射侧神经元数目较术后1周明显减少(P<0.05);实验组PD大鼠损毁侧(左侧)中脑VTA的TH阳性神经元明显减少,神经元胞体轮廓及突起不清晰,TH阳性纤维也明显减少,分布稀疏,术后2周、4周注射侧阳性神经元数目较术后1周明显减少(P<0.05)。结论PD大鼠损毁侧中脑VTA神经组织有明显破坏,TH阳性神经元显著减少,提示中脑腹侧被盖区TH免疫阳性神经元的改变参与了PD模型大鼠的病理学变化。     

胚中脑黑质移植入震颤麻痹模型鼠脑内的实验研究

胚中脑黑质移植入震颤麻痹模型鼠脑内的实验研究朱道立（江苏省南通师专生物系）采用６－羟基多巴胺（６－ＯＨＤＡ）分２点注入ＳＤ鼠右侧中脑黑质内侧端，制成震颤麻痹模型，毁损后６～８周，用胚龄１４～１６天同种胚鼠中脑黑质细胞悬液植入模型鼠尾壳核。实验分实验对...     

大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞的分离和培养

目的:体外培养大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞(NSCs),观察其生长及诱导分化培养特点。方法:取孕12.5~14.5 d的SD大鼠,采用机械分离法获取中脑腹侧组织,剪碎并吹打成单细胞悬液后,以2×10~5个细胞/ml的密度接种到无血清NSCs培养基中以神经球法培养。培养神经球5~7 d后,按原密度进行传代培养,并取第三代培养的神经球用含10%胎牛血清(FBS)分化培养液分化培养,分化培养7 d后行免疫细胞化学鉴定。结果:神经球呈巢蛋白(nestin)阳性,诱导分化后的细胞作分别呈微管蛋白(βIII-Tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。结论:经神经球法培养得到的大鼠胚胎中脑腹侧来源神经干细胞可自我增值,并可诱导分化成神经元和胶质细胞。     

大鼠中脑腹侧被盖区向嗅结节的投射

应用ＨＲＰ逆轴突传递法观察了２０只大鼠腹测被盖区向嗅结切的投射。将ＨＲＰ注入一侧嗅结节，在注射同侧腹被盖区－Ａ１０区出现标记细胞。标记细胞主要分布于腹侧被盖区的外侧并以中１／３段最多，尾１／３段次之，吻侧１／３段最少，其数量由外向内递减。标记细胞形态多为大、中梭形，少量的大三角形细胞、大多极细胞。研究证明了腹侧被盖区向嗅结节投谢，为边缘中脑多巴胺系统提供了形态学依据。     

脑内移植治疗帕金森病的移植神经元凋亡时程的研究

为了探讨将 E14腹侧中脑 ( VM)细胞悬液植入 Parkinson病大鼠纹状体后的移植神经元的凋亡时程及其数量的变化规律 ,将实验动物分为移植组和空白对照组 ,两组均包括移植后 1、4、7和 2 8d四个时间点。分别运用 TU NEL 法、TH免疫组化法、H-E染色及透射电镜观察了凋亡细胞的生化和形态特征 ,藉以估计其凋亡细胞的数量变化状况。结果表明 ,移植组中用 TU NEL法观察移植神经元具有 TU NEL 阳性反应胞核的细胞在移植后 1、4、7、2 8d所占的百分比分别为 0 .14 9%、0 .13 1%、0 .0 66%和0 .0 0 5 % ,移植后 1、4d与 7、2 8d之间的比较差异显著 ( P<0 .0 0 1)。 TH免疫组化反应显示 ,在移植后 1、4、7、2 8d TH免疫反应阳性细胞存活率分别为 15 .7%、6.3 %、5 .9%和 4.9% ,移植后 1d与 4、7、2 8d之间的比较差异显著 ( P<0 .0 0 1)。本研究结果提示 :( 1)移植的胚 VM细胞凋亡主要见于移植后的头 7d,这一期间内大约有 90 %移植神经元发生凋亡 ;( 2 )这种凋亡对移植的TH细胞存活率的影响仅见于移植后的 4d。     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

目的探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）对ＡＤ模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响。方法用使君子酸损毁ＳＤ大鼠基底大细胞核制成ＡＤ模型,分成ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ及单纯移植对照４组。在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液,前３组含相应神经营养因子,移植后每２ｄ向侧脑室灌注相应神经营养因子共７次。移植后１、２．５和４个月时行避暗回避试验和跳台试验,最后脑切片经ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ和ＬＮＧＦＲ免疫组织化学等染色,对移植区中的神经元及纤维作定量分析和图像处理。结果移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组行为改善又较ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组明显。形态学证实,应用神经营养因子动物移植区中ＡＣｈＥ阳性神经元数、１６９００μｍ２网格中ＡＣｈＥ阳性纤维交点数及ＡＣｈＥ阳性神经元面积均优于对照组,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组的结果又好于ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组。结论ＢＤＮＦ与ＮＧＦ一样能促进植入胚基底前脑的ＡＤ模型鼠行为改善和移植区胚胆碱能神经元的发育生长,ＢＤＮＦ和ＮＧＦ联合使用比单独使用一种因子更为有效。     

偏侧帕金森病大鼠模型丘脑底核谷氨酸能神经元的免疫组织化学研究

为探讨丘脑底核中谷氨酸能神经元在帕金森病时的变化 ,本研究应用免疫组织化学和形态计量学技术对用 6-OHDA脑内注射制备的偏侧帕金森病大鼠模型丘脑底核谷氨酸能神经元的变化进行了观察和计数。结果发现 ,6-OHDA损毁侧丘脑底核中谷氨酸免疫反应阳性神经元的数量显著高于非损毁侧 (P<0 .0 1)。本研究结果提示 ,帕金森病时黑质多巴胺能神经元的减少可能导致丘脑底核过度兴奋 ,这很可能是产生帕金森病症状及其病情渐进发展的原因之一。     

损毁Parkinson病大鼠腹侧苍白球对纹状体内多巴胺的影响

应用6羟基多巴胺(6OHDA)制备Parkinson病(PD)大鼠模型,插入电极通过直流电毁损腹侧苍白球(VP),观察毁损术后PD大鼠旋转行为的变化,并应用高压液相色谱检测纹状体内多巴胺(DA)及3,4二羟甲基苯丙氨酸(DOPAC)和去甲肾上腺素(NA)的含量。结果显示:直流电毁损VP可使PD模型大鼠的旋转行为明显减少;毁损侧纹状体内DA的含量减少,DOPAC和NA的含量增加。上述结果提示VP毁损可明显改善PD大鼠的旋转行为,此效应可能与抑制VP的异常兴奋有关。     

GDNF转基因成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型

为了观察表达胶质细胞系源性神经营养因子 (GDNF)的基因工程细胞在脑内移植后对帕金森病大鼠的治疗作用 ,将 6-羟基多巴胺脑内定位单侧 (损伤侧 )注射制备大鼠帕金森病模型。随机将动物分为实验组 (2 0只 )和对照组 (15只 ) ,分别植入GDNF和 Lac Z转基因的原代培养大鼠成纤维细胞于损伤侧纹状体内 ,动态观察动物单侧旋转行为以及多巴胺及其代谢产物 3 ,4-二羟苯乙酸和高香草酸含量的变化。结果表明 :实验组帕金森病大鼠单侧旋转行为明显减少 ,为移植前旋转圈数的 (64 .8± 5 .8) % (P<0 .0 5 ) ;其纹状体内多巴胺含量显著提高 ,恢复至移植前水平的 (14 .5± 2 .2 ) % (P<0 .0 5 ) ,而对照组仅为 (1.92± 0 .15 ) % ;转基因细胞在脑内可存活 1年以上。本研究结果提示 GDNF基因治疗对大鼠帕金森病具有潜在的临床应用价值。     

神经节苷脂GM_1对胚基底前脑移植入Alzheimer病鼠的影响

用使君子酸毁损大鼠左侧基底大细胞核,制成Alzheimer病模型鼠。2周后进行移植,移植组分单纯胚基底前脑细胞悬液移植组(ST组)和含单唾液酸神经节苷脂(GM_1)的胚基底前脑悬液移植组(GM_1组)。移植后2月、6月行为测试发现,两移植组学习和记忆行为均有改善,GM_1T组行为指标在2月和6月时均与模型组有显著差异。而与正常组无显著差异;ST组仅在6月时与GM_1T组相似。GM_1T组动物在移植前后进行了体感诱发电位检测,结果发现移植前损毁侧正常出现的10 ms正波消失,而在移植后2月和6月时此波重新出现或潜伏期呈轻或中度延长。形态学观察发现,破坏后1周或6月时破坏侧基底大细胞核的AChE阳性细胞大部消失,同侧额、顶叶皮质AChE阳性纤维和终末明显减少。GM_1T组移植区较ST组移植区大。GM_1T组移植区AChE阳性细胞较ST组多而且突起长。两组均见有ChAT免疫阳性细胞。实验表明GM_1能保护植入受体脑内的胚脑细胞并促进它们在受体脑内发育生长并发挥功能效应。     

基因治疗巴金森氏病大鼠模型的实验研究

巴金森氏病以黑质多巴胺能神经元变性减少为特征，以６－羟多巴胺单侧损毁大鼠脑内多巴胺能系统可建立巴金森氏病的动物模型，当给予阿普吗啡后通过检测这些大鼠的旋转圈数和纹状体多巴胺及其主要代谢产物的水平则可反映多巴胺的减少或恢复程度。为达到基因治疗巴金森氏病大鼠模型的目的，本研究将带有酪氨酸羟化酶基因的重组载体－质粒ｐＣＭＶＴＨ（６．０４ｋｂ）在体外通过脂质体转染技术转入原代培养的骨骼肌细胞内；再将这些经遗传改造、能表达酪氨酸羟化酶的骨骼肌细胞植入模型大鼠脑的纹状体内。结果显示，这些表达酪氨酸羟化酶的肌细胞可在大鼠模型脑内长期存活，这些模型大鼠的异常运动显现实质性改善，它们的纹状体多巴胺水平明显升高。     

大鼠胚胎神经上皮细胞脑内移植治疗帕金森病的实验研究

目的 观察大鼠胚胎神经上皮细胞植入帕金森病大鼠纹状体后的存活、分化情况及治疗作用。方法 孕11d大鼠剖腹取胚胎,剥离神经管,胰酶消化后获取神经管壁上的神经上皮细胞,在脑立体定位仪下植入帕金森病大鼠毁损侧纹状体内,于移植后不同时间诱发旋转实验,观察症状的改善,并灌注取脑,切片后做酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,检测胚胎神经上皮细胞的存活及分化状况。结果 胚胎神经上皮细胞脑内移植后,帕金森病鼠的旋转行为有明显改善。移植后2、4及8周时可检测到成片或散在的TH-免疫阳性细胞。结论 胚胎神经上皮细胞移植至帕金森病大鼠纹状体后,可分化为多巴胺能神经元并能改善旋转症状。