外源野生型p53基因表达对人肺癌细胞药物敏感性影响

了解外源野生型ｐ５３（ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐ５３,ｗｔｐ５３）基因表达对人大细胞肺癌８０１－Ｄ细胞对化疗药物敏感性的影响。方法选用Ｐ５３基因突为的人大细胞肺癌８０１－Ｄ系。用脂质体介导构建的含ｗｔｐ５３基因载体转染８０１－Ｄ细胞,ＰＣＲ检测外源ｗｔｐ５３在宿主细胞存在情况,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定８０１－Ｄ细胞转染ｗｔｐ５３后药物敏感性变化,流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞死亡情况。结果转染ｗｔｐ５     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体，体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０，Ｋ５６２。通过细胞生长曲线，ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

增殖细胞核抗原基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌细胞的抑瘤效应

目的观察增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌细胞生长特性的影响，探讨其抗肿瘤作用。方法用ＤＮＡ重组方法将人ＰＣＮＡ基因反向克隆到真核表达质粒ｐＤＯＲｎｅｏ中，构建成人ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲＰＣＮＡ，用脂质体介导转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１。结果经Ｇ４１８筛选获得转染细胞ＳＧＣ／ＰＣＮＡ，与亲本细胞相比，其生长速度减慢，ＲＮＡ、蛋白质的生物合成受到抑制，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＤＮＡ含量降低。结论ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用。     

糖皮质激素诱导p53基因转染的人胃粘膜上皮细胞的凋亡反应

为了研究糖皮质激素对表达不同ｐ５３基因的人胃粘膜上皮细胞所诱导的凋亡反应，将外源性的野生型和突变型ｐ５３基因导入体外培养的人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１细胞中。在浓度为０．２～０．８ｇ／Ｌ的氢化可的松诱导下，转染细胞发生凋亡，但转染有不同的ｐ５３基因的细胞所发生的凋亡反应是不同的。实验结果表明，转染野生型ｐ５３基因的ＧＥＳ－１细胞凋亡反应明显强于突变型ｐ５３基因转染的细胞。由此推测，当胃上皮细胞处于炎症状态时，体内自生分泌的糖皮质激素在抑制炎症反应的同时亦诱导上皮细胞的凋亡。而当胃上皮细胞的ｐ５３基因发生了突变，则在糖皮质激素作用下使得带有ｐ５３基因突变细胞具有选择性生长优势，促进了肿瘤演进     

外源性p53基因增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

 目的 探讨外源性ｐ５３基因转染对人卵巢癌细胞株的化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的转染技术，将人野生型ｐ５３基因的真核表达载体导入不表达ｐ５３的卵巢癌ＳＫＯＶ－３细胞中，经Ｇ４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定后，观察其对顺铂作用后的 ＳＫＯＶ－３细胞的集落形成及凋亡的影响。结果 外源性Ｐ５３基因在转染细胞中有效表达，并增强了顺铂对ＳＫＯＶ－３细胞集落形成的抑制作用及促进了顺铂诱导的细胞凋亡。结论 外源性ｐ５３基因能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，两者联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的　观察外源性野生型p53对有p53基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法　用PCR SSCP及DNA测序 ,选择p53突变的人肺巨细胞癌系 80 1 D。构建野生型p53表达质粒PZiP p53。用基因枪介导外源基因。经G41 8筛选得到转染细胞系 80 1 D p53。用PCR检测外源基因 ,观察转染细胞恶性生长的变化。结果　转染细胞系 80 1 D p53体外长期传代有外源性p53基因存在 ,转染细胞生长明显受到抑制 ,集落形成抑制率达 96% ,裸鼠异种移植致瘤性降低 ,肿瘤生长明显缓慢。结论　外源性野生型p53经基因枪导入有p53基因突变的人肺癌细胞后可长期存在于转染细胞中 ,且明显抑制所转染的癌细胞的恶性生长。     

HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立 *

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系,以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系,并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９,用Ｇ４１８进行筛选,用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达,这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制,其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９　ＨＳＰ９０β蛋白表达降低,细胞的生长受到不同程度的抑制。     

增殖细胞核抗原基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌细胞的抑？…

观察增殖细胞核抗原基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌细胞生长特性的影响,探讨其抗肿瘤作用。方法 用ＤＮＡ重组方法将人ＰＣＮＡ基因反向克隆到真核表达质粒ｐＤＯＲｎｅｏ中,构建成人ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲ－ＰＣＮＡ,用指脂质体介导转梁人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１。     

肺癌组织中p53,K—ras,p53,p16基因的改变

目的 探讨ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ｐ１５、ｐ１６基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。方法 对５９例肺癌组织和１４例肺部良性组织,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测ｐ５３基因第５～８外显子突变情况;应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对Ｋ－ｒａｓ基因突变进行检测;并应用ＰＣＲ法检测ｐ１５、ｐ１６基因纯合缺失情况。结果肺癌组织中ｐ５３、ｐ１５、ｐ１６基因改变频率分别为３７．３％、１１．９％、２３．     

重组人GM—CSF逆转录病毒基因转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定…

建立逆转录病毒介导的ＧＭ－ＣＳＦ基因转移系统,为ＧＭ－ＣＳＦ基因悠我肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。应用基因重组技术将ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ克隆于逆转录病毒载体ｐＤＯＲｎｅｏ,获得重组载体ｐＤＯＲＧＭ。经脂质体介针其转染于病毒包装细胞系ＰＡ３１７细胞,经ＮＩＨ３Ｔ３细胞检测病毒滴度,ＮＩＨ３Ｔ３放大实验检测辅助病毒,并用同熵度病毒感染人乳腺癌细胞系ＭＣＦ－７。     

野生型p53基因抑制膀胱癌细胞株HTB9生长及其机理的研究

目的：探讨野生型ｐ５３基因抑制膀胱癌生长的作用及其机理,方法：将野生型ｐ５３基是组腺病毒载体转染入膀胱癌细胞ＨＴＢ９,观察细胞生长曲线,细胞周期变化及ＤＮＡ合成情况,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ２１ｍＲＮＡ水平,应用免疫组化法检测ｐ２１蛋白表达水平。结果：野生型ｐ５３基因导入可抑制ＨＴＢ９细胞生长和ＤＮＡ合成（ＡｄＣＭＶｐ５３）,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止静的细胞比例增高,而合成期细胞比例下降,另外,ＡｄＣＭＶｐ５３还提高了ｐ２１的ｍＲＮＡ和蛋白水平,结论：腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因转梁对于膀胱可能是很有前途的基因治疗方法。     

外源性野生型p53基因在K562－n细胞表达的意义

目的研究外源性野生型ｐ５３基因在红白血病细胞表达的意义。方法采用重组逆转录病毒载体介导的方法将人野生型ｐ５３基因ｃＤＮＡ转移入Ｋ５６２－ｎ细胞，用形态学、流式细胞仪和联苯胺染色试验检测转基因后的Ｋ５６２－ｎ细胞。结果野生型ｐ５３基因可以诱导Ｋ５６２－ｎ细胞编程性细胞死亡和分化的形态特征，且伴有细胞周期Ｇ１期的生长阻滞。结论野生型ｐ５３基因能抑制人红白血病细胞生长的某些机制。     

p16基因的不同转染方法对脑胶质瘤细胞的不同作用

目的：探讨Ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用。方法：分别采用脂质体、磷酸钙＋ＤＭＳＯ休克转染的方法,观察外源野生型Ｐ１６基因短暂转染与长期稳定转染对人胶质瘤细胞系Ｕ２５１、ＳＷＯ的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对象。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测Ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长、细胞周期及细胞凋亡的变化进行分析。结果：Ｐ１６基因短暂转染有明显的凋亡诱导作用;而Ｐ１６     

辐射诱导鼻咽癌细胞系凋亡及其相关基因的研究

目的Ｘ线诱导人鼻咽癌细胞系ＣＮＥ和ＣＮＥ－２凋亡及其相关基因的研究。方法应用ＤＮＡ荧光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２、免疫组化、ＲＴ－ＰＣＲ、ＤＮＡ杂交等方法进行观察和检验。结果一定剂量照射后,ＣＮＥ凋亡指数与时间、剂量有相关性,ＣＮＥ和ＣＮＥ－２两种细胞系存在明显不同的凋亡反应。免疫组化方法检测,ＣＮＥ的ｂｃｌ－２蛋白呈强阳性,而ＣＮＥ－２为阴性;进一步采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测,发现ＣＮＥ－２存在ｐ５３ｍＲＮＡ扩增产物,而ＣＮＥ却不存在。ＣＮＥ和ＣＮＥ－２的ｐ５３及ｂｃｌ－２基因的ＤＮＡ杂交结果均为阳性,但ＣＮＥ细胞ｐ５３基因的２．８ｋｂ片段较５．６ｋｂ片段明显减弱,说明在ＣＮＥ中存在ｐ５３基因的部分缺失。结论人鼻咽癌细胞系的凋亡指数有时间、剂量相关性;ＣＮＥ、ＣＮＥ－２两种细胞系的凋亡指数有明显差异,可能与ＣＮＥ中抗凋亡基因ｂｃｌ－２的过度表达及ｐ５３基因部分缺失密切相关。     

肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

应用一种敏感的ＡＲＦ免疫组经和ＰＣＲ、银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测了本地区３８例肝细胞癌组织中肿瘤抑制基因ｐ５３的过度表达及点突变，结果发现１６例有ｐ５３蛋白过度表达（４１．２％），７例有ｐ５３基因２４９位密码子点突变，２例２４９位密码子外第７外显子点突变。９例ｐ５３基因有突变的肝癌中８例ｐ５３蛋白阳性，两者符合率为８８．９％，ｐ５３基因蛋白过度表达和点突点与ＨＣＣ分化和转移有关。本组ＨＣＣ ｐ５     

野生型p53基因的导入对膀胱癌细胞抑制作用的观察

转染外源野生型ｐ５３基因对膀胱癌ＥＪ细胞的抑制作用。方法将含外源野生型ｐ５３基因的（ａｄ┐Ｗｔｐ５３）转染膀胱癌ＥＪ细胞,观察生长曲线,细胞周期变化及裸鼠体内抑瘤试验。结果转染了ａｄ┐Ｗｔｐ５３的ＥＪ细胞在体外生长速率下降,在裸鼠体内致瘤性丧失,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止期的细胞比例增高。另外,ａｄ┐Ｗｔｐ５３直接注射到肿瘤组织内,可使外源野生型ｐ５３基因在肿瘤细胞内有效、稳定的表达,肿瘤表现为生长减缓,最后停止生长并有缩小。结论腺病毒载体介导基因转染效率高,速度快,安全,是很有前途的体内基因治疗载体。     

银染PCR－SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５～８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加。ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突变的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预后的一项指标。我们的结果还显示银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法是检测基因突变的有效、快速、简便的方法。     

甲醛致癌与P53基因突变研究

作者采用ＰＣＲ和ＤＮＡ序列分析方法检测了１１个甲醛诱发的大鼠鼻腔鳞状细胞癌（ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｓ，ＳＣＣ）和８株ＳＣＣ细胞系的Ｐ５３肿瘤抑制基因．对ＰＣＲ扩增的含进化保区Ⅱ－Ⅴ的Ｐ５３ｃＤＮＡＤ片断直接进行序列分析，发现大鼠鼻腔ＳＣＣ及其细胞系的Ｐ５３基因突变率分别为４５％（５／１１）和６２．５％（５／８）．表明Ｐ５３基因点突变在甲醛所致的ＳＣＣ中十分常见，并且可能是大鼠和人类ＳＣＣ的共同机制．     

横纹肌肉瘤P53,MDM2基因及p53,p21,p185蛋白表达检测比较

目的：探讨ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达及ｐ５３、ＭＤＭ２基因与横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）分化和预后的关系，并对几种检测方法进行了比较。方法：应用免疫组化方法检测ＲＭＳｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达，银染ＰＣＲＳＳＣＰ检测ＲＭＳｐ５３的突变，原位杂交检测ＲＭＳｐ５３和ＭＤＭ２基因。结果：ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白在ＲＭＳ的阳性率分别为６７２％（４１／６１）、６８（３４／５０）、６０％（３０／５０）；检测３０例ＲＭＳ，ｐ５３基因７例发生点突变原位杂交检测ＲＭＳ的ｐ５３、ＭＤＭ２基因突变的检出率分别为６６７％和７７４％；上述结果均与年龄、性别、肿瘤组织类型无关，而与肿瘤分化转移和预后有关。结论：ｐ５３、ｐ２１、ＭＤＭ２蛋白表达及癌基因检测均有助于判断肿瘤恶性程度和肿瘤预后，上述３种方法比较，免疫组化与原位杂交检测的阳性结果基本相符，提示免疫组化方法同样能反映肿瘤恶性程度和预后，是一种简便可行的检测方法。