肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

中老年男性非小细胞肺癌患者TCR Vβ基因表达谱分析

目的分析非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）T细胞受体（TCR）Vβ基因在中老年男性患者外周血的表达情况。方法分离健康人及患者外周血的T细胞,用流式细胞术分析TCR Vβ各亚家族表达谱,统计分析其特点。结果患NSCLC的中老年男性外周血中TCR Vβ部分亚家族高表达,其中CD8＋TCR Vβ3、4、9表达有统计学意义（P均〈0.05）,同时CD8＋TCR Vβ3与Vβ4两基因表达有相关性;r=0.541,P=0.008。结论患NSCLC的中老年男性CD8＋TCR Vβ在外周血呈倾斜性分布,推测与肿瘤表位特异性表达有关。     

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法 利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.10例健康人外周血作为对照.结果 8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义.此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8).基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达V87亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到.结论 3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式.     

淋巴细胞白血病和淋巴瘤T细胞受体基因重排研究

目的：探讨淋巴细胞白血病及淋巴瘤的T淋巴细胞受体（TCR）Vβ亚家族分布特点。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测急性淋巴细胞白血病5例,慢性淋巴细胞白血病2例,弥漫大B淋巴瘤3例及外周T淋巴瘤3例患者的外周血或淋巴结T淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达。对照组为健康人8例。结果：对照组健康8例外周血淋巴细胞表达全部24个Vβ亚家族。急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞TCR Vβ亚家族均呈限制性表达,外周T淋巴瘤2例和弥漫大B淋巴瘤1例Vβ亚家族呈限制性表达,另外3例表达未受抑制。而淋巴瘤患者淋巴结标本Vβ亚家族全部呈限制性表达。结论：TCR基因重排对淋巴瘤和淋巴细胞白血病的诊断有辅助作用。     

AML—M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点，并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT—PCR-基因扫描技术分析初治AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖，免疫磁珠分选患者T淋巴细胞，体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化，并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖，TCR即分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族，体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同，有部分出现新的邯亚家族表达及克隆性增殖，有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖，体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML—M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖，部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态，可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL，体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加，并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞，提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。     

肺癌恶性胸水中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞检测及其临床意义

目的 检测晚期肺癌患者外周血及恶性胸水中CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+ Foxp3 +Treg,Foxp3 +Treg)及相关细胞因子的表达情况并探讨其临床意义.方法 通过密度梯度离心法获得26例晚期肺癌患者外周血、胸水中淋巴细胞及上清和10例健康志愿者(对照组)外周血淋巴细胞及上清...     

应用RT-PCR和基因扫描分析TCRVβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞(英文)

目的　了解急性单核细胞白血病 (AML M5 )病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法　利用RT PCR分别扩增 9例M5病人外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ谱系的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,确定T细胞克隆性。结果　 9例AML M5病人仅存在 1 10个Vβ亚家族T细胞 ,而正常血标本则可检测到 2 4个Vβ亚家族。基因扫描分析显示 :8例病人的某些Vβ亚家族出现一主峰图象 (寡克隆性T细胞 )。Vβ2寡克隆T细胞发现于 6例病人中。结论　结果提示AML M5病人存在克隆性增殖的T细胞 ,主要为Vβ2亚家族 ,推测这可能是对白血病细胞 (M5 )相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体CXCR3在结核性胸膜炎患者中的表达和意义

目的:探讨γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体CXCR3在结核性胸膜炎患者外周血和胸水中的表达和临床意义.方法:采集30例健康正常者的外周血及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,采用流式细胞术检测结核性胸膜炎患者外周血单个核细胞及胸水细胞中的CXCR3的表达;用ELISA法检测结核性胸膜炎患者血清及胸水中IP-10的浓度.结果:结核性胸膜炎患者外周血血清中IP-10的浓度显著高于正常对照组(P＜0.05),患者胸水中IP-10浓度较高,且患者胸水与患者外周血中IP-10水平具有正相关(r=0.572,P＜0.05);结核性胸膜炎患者外周血中CXCR3的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),患者胸水细胞中CXCR3的表达较高,且患者胸水细胞与外周血中CXCR3表达具有正相关(r=0.627,P＜0.05)结论:结核性胸膜炎患者血清中IP-10浓度及外周血单个核细胞CXCR3的表达显著升高,提示IP-10及其受体CXCR3是参与结核性胸膜炎发生发展的重要免疫分子,可能与结核性胸膜炎发病机制有关.     

恶性胸腔积液患者T淋巴细胞亚群的变化意义

目的:探讨检测恶性胸腔积液(MPE)患者外周血(PB)和胸水(PE)中T淋巴细胞亚群(TLS)的意义及化疗前后TLS的变化. 方法:对比良性胸腔积液(BPE)、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平;对比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平;对比MPE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的水平. 结果:TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相似;MPE患者外周血中CD8 T细胞水平高于正常人(30.6±2.4 vs 20.9±1.8,P＜0.05),CD4 T细胞相仿,CD4 /CD8 低于正常(1.78±0.21 vs 2.71±0.35,P＜0.05);与BPE患者相比,MPE患者外周血和胸水中CD4 T细胞、CD4 /CD8 较低(P＜0.05),而CD8 T细胞较高(P＜0.05);化疗后MPE患者外周血和胸水中CD8 T细胞水平明显降低(30.6±2.4 vs 24.7±2.3,31.6±2.4 vs 21.9±4.1, P＜0.05),CD4 /CD8 明显升高(1.78±0.21 vs 2.19±0.19,1.69±0.30 vs 2.62±0.40,P＜0.05). 结论:检测外周血可以了解胸水中TLS水平;检测外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鉴别;化疗可部分改善MPE患者的细胞免疫抑制状态.     

T细胞亚群、中性淋巴比值与肺癌病理分型及非小细胞肺癌临床分期的相关性分析

目的 分析外周血T细胞亚群、中性淋巴比值(NLR)与肺癌病理分型及非小细胞肺癌临床分期之间的关系.方法 采用流式细胞术测定60例肺癌患者T细胞亚群比例,血样分析测定NLR.结果 肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌患者的CD4+T淋巴细胞比例、CD8+T淋巴细胞比例、CD4+/CD8+、NLR差异无统计学意义.晚期组(Ⅲ~Ⅳ期)非小细胞肺癌患者的CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+较早期组(Ⅰ~Ⅱ期)低,差异有统计学意义(P<0.05).晚期组(Ⅲ~Ⅳ期)非小细胞肺癌患者的CD8+T淋巴细胞比例、NLR较早期组(Ⅰ~Ⅱ期)高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 非小细胞肺癌患者的外周血T细胞亚群、NLR与非小细胞肺癌的临床分期具有一定相关性,可作为临床分期的参考指标.     

实时定量PCR检测GVHD患者TCR Vγ亚家族基因表达水平

目的 了解异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)疾病状态下T细胞受体(TCR)Vγ亚家族T细胞水平的变化情况.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应对18例GVHD患者外周血单个核细胞TCR VγⅠ～Ⅲ亚家族基因表达水平进行相对定量检测;12例健康成人外周血样本作为对照.结果 GVHD患者外周血中TCRVγⅡ的表达量显著低于正常对照;GvHD患者TCR VγⅠ～Ⅲ亚家族的表达模式也发生了改变.TCRVγⅡ的表达量比TCRVγⅠ或TCRVγⅢ的表达量低.结论 TCRVγ Ⅱ亚家族的表达低下可能与GVHD的发病相关.     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肺癌中的表达及其临床意义

目的：：探讨CD4+ CD25+调节性T细胞在晚期肺癌中的表达及其临床意义。方法：应用流式细胞术分析42例肺癌患者(肺癌组)外周血CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平,与15名健康志愿者作对照。结果：肺癌组患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量为(7.17±3.63)%,明显高于对照组的(4.25±2.11)%(P<0.01)。肺癌组患者外周血中调节性T细胞数量在病理类型间差异无统计学意义(P>0.05),晚期肺癌患者外周调节性T细胞数量高于早期患者(P<0.05)。结论：调节性T细胞在肺癌患者中比率明显升高,并与临床进展有关。     

超抗原肠毒素B对T淋巴细胞趋化因子受体表达的影响及意义

目的 观察超抗原肠毒素B(SEB)活化的人外周血T淋巴细胞趋化因子受体变化规律及意义.方法 应用SEB处理人外周血T淋巴细胞,RT-PCR和流式细胞仪检测T淋巴细胞趋化因子受体CCR2、CCR3、CCR5的转录、表达水平;TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖反应.结果 与空白对照组相比,SEB 刺激PBMC 2 d 后,倒置显微镜就可以观察到T细胞开始增殖;而TCR Vβ亚族混合抗体标记T细胞,流式细胞仪检测T细胞增殖时却需要在细胞培养第5天后才检测到明显的细胞增殖,T细胞增殖发生在特异的TCR Vβ3、TCR Vβ17、TCR Vβ14亚族.SEB刺激的T细胞早期(8 h)出现CCR2的下调表达,CCR3没有显著改变;但CCR5的表达在各SEB浓度组都出现显著上调表达(P<0.01或P<0.05).结论 CCR5的上调表达可以作为超抗原活化T细胞的早期标志.     

脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究

目的:初步探讨成人脂肪源间充质干细胞(adult adipose tissue-derived mesenchymal stemcells ,AMSC)治疗急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease ,aGVHD)的分子机制。方法:3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者,以每公斤体重2×106个细胞剂量静脉输注AMSC;应用RT-PCR扩增患者AMSC使用前后外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族的CDR3 ,了解患者TCR VβT细胞的分布情况。结果:患者发生aGVHD时,有TCR Vβ3及其他亚家族基因表达,输注AMSC后,GVHD得以有效控制,Vβ3不表达;当患者GVHD复发时,Vβ3基因又表达,治疗后不表达。结论:AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCR Vβ亚家族基因表达有关,TCR Vβ3可能是AMSC作用的靶基因。     

应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

流式细胞仪检测晚期肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的临床意义

目的 检测晚期肺癌患者外周血中CD4+ T细胞、CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞亚群,分析其在不同类型肺癌中表达的特点,以探讨在晚期肺癌患者中检测CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞的临床意义.方法 收集我院初次收治的晚期肺癌患者71例(其中鳞癌35例、腺癌33例、腺鳞癌3例)和同期健康查体正常者28例的外周血,采用流式细胞术检测外周血中相应的T细胞亚群.比较其在晚期肺癌患者与正常人之间以及不同类型肺癌中表达的差异及特征.结果 ①晚期肺癌患者CD4+CD25+ T细胞、CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+T细胞的比例分别为24.3%±7.8%和7.9%±2.1%,与对照组(19.1%±3.4%和5.9%±3.5%)相比均明显升高,差异有显著性(P＜0.01).CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例以及CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例与对照组相比,差异无显著性(P>0.05).②鳞癌中CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞的比例为6.8%±1.9%,低于腺癌(7.7%±1.1%),差异有显著性(P＜0.05).结论 ①在肺癌患者外周血中,CD4+ T细胞占总淋巴细胞的比例同正常人相比无变化,CD4+CD25+ T细胞和CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+ T细胞均明显增多.②在不同类型肺癌中,CD4+FOXP3+ T细胞比例数是腺癌高于鳞癌.     

慢性乙型肝炎患者CD_8~+ T细胞TCR-Vβ基因CDR3区克隆化特征的研究

目的:检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血T细胞TCR-Vβ基因CDR3的克隆化特征。方法:选择20例慢性乙型肝炎患者设为观察组;选择20例健康体检者设为对照组,采用多引物巢式PCR法两步扩增22个TCR-Vβ基因亚家族,高分辨率琼脂糖凝胶电泳法定性检测两组研究对象的PCR产物的克隆化特征。结果:CHB患者CD_8~+T细胞TCR-Vβ1、Vβ3、Vβ9、Vβ14出现优势增生。结论:CHB患者外周血CD_8~+T细胞Vβ1、Vβ3、Vβ9、Vβ14存在克隆性增生。     

老年肺癌患者外周血T淋巴细胞及亚群CD28的表达

目的:检测老年肺癌患者外周血中T淋巴细胞及亚群CD28的表达.方法:采用三色免疫荧光标记流式细胞术检测32例老年肺癌患者与35例老年正常人外周血T淋巴细胞及亚群CD28的表达.结果:老年肺癌组CD3 、CD4 、CD8 T细胞及CD4 CD28 、CD8 CD28 T细胞亚群明显低于老年正常对照组(P＜0.01);CD8 CD28T细胞亚群(P＜0.01)明显高于老年正常对照组;均有明显的统计学差异;两组间CD4 CD28T细胞亚群无明显统计学差异(P＞0.05).结论:老年肺癌患者较正常老年人存在明显的免疫功能紊乱,抗肿瘤能力明显下降,并导致病情恶化.     

康莱特注射液对晚期肺癌患者免疫功能影响的研究

目的:观察康莱特注射液对晚期肺癌患者免疫功能的影响.方法:治疗组用康莱特治疗晚期肺癌患者40例,对照组用常规对症处理治疗晚期肺癌患者40例.检测两组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群及血清可溶性白细胞介素-2受体水平.结果:治疗前治疗组与对照组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞、CD4+/CD8+细胞比值及血清可溶性白细胞介素-2(IL-2)受体水平无明显差异(P＞0.05).治疗后与对照组相比,治疗组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值明显增加,差异有显著性(P＜0.05);CD8+细胞无明显改变,无显著性差异(P＞0.05);血清可溶性白细胞介素-2受体水平明显降低,差异有显著性(P＜0.05).结论:晚期肺癌患者应用康莱特可以增强免疫力.     

TGF-β1上调CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3的表达

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺癌患者CD4 CD25 调节性T细胞比例增高中发挥的作用.方法 采用酶消化法培养原代肺癌细胞,将培养的肺癌细胞及肺癌细胞培养上清液分别与自身来源的外周血单个核细胞共培养,不同浓度(2、5、10 ng/ml)的TGF-β1进行干预后,检测各组CD4 CD25 调节性T细胞标志物FOXP3 mRNA的表达.结果 肺癌细胞与外周血单个核细胞共培养组FOXP3 mRNA的表达呈阳性,且随着TGF-β1干预浓度的增加,FOXP3 mRNA的表达强度逐渐增高,两者呈正相关(r=0.663,P＜0.05);外周血单个核细胞经肺癌细胞培养上清液孵育后亦有FOXP3 mRNA的表达,TGF-β1干预后,FOXP3 mRNA的表达虽有上调但与干预前相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论 TGF-β1能上调外周血单个核细胞中FOXP3的表达,即增加CD4 CD25 调节性T细胞的比例,从而参与肺癌免疫逃逸机制.