分化早期小儿急性白血病细胞免疫球蛋白和T细胞受体基因结构的变化

从29例免疫分型的小儿急性白血病中选出髓过氧化物酶染色阴性和不与细胞系相关或成熟细胞系相关的单克隆抗体反应的6例白血病细胞,进一步作免疫球蛋白(包括重链和κ轻链)和T细胞受体(包括δ、γ、β)基因结构的分析。所有6例均有IgH基因的重排,提示这些白血病细胞是β细胞来源。两例CD_(10)阴性和白病细胞.κ链基因没有重排,其中一例的TCRδ、γ、β基因也都处于胚系,另一例的TCRβ处于胚系。在CD_(10)阳性白血病细胞中,其中两例κ链基因丢失,TCR基因结构都有不同程度的变化(重排或丢失)。这些结果可能提示在CD_(10)阳性白血病细胞中能产生功能性IgH的重排,并可导致IgL和TCR基因结构的变化。     

TCRγδ—是多余的T细胞亚群,还是免疫系统的特殊成分?

免疫学家在研究TCRαβ介导免疫识别的发育及结构的同时发现了一类新的T细胞亚群,它既不同于CD_8~+溶细胞性TCRαβ细胞,又不同于CD_4~+辅助性TCRαβ细胞,它由二硫键联结γ-和δ-基因产物(γ、δ键)组成。笔者近几年来着重研究TCRαβ细胞的胚系发生、多样性及其分子结构。众所周知,TCRγ基因是Tonegawa 等在寻求TCRαβ二聚体中α基因重排时发现的,γ基因虽可从TCRαβ细胞中分离到,但其编码的蛋白质并不参与TCRαβ细胞的功     

T—ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1

目的 分析T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞中TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法 利用半巢式PCR扩增2例T-ALL、10例正常人外周血和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδ基因组片段,了解其重排情况,克隆性PCR产物进一步进行苷酸序列分析确定重排位置,并进一步经PT-PCR检测其重排基因的表达情况。结果 在2例T-ALL病人白血病细胞发现两种新的TCR δRec-Jδ1基因重排方式,称为δRec151051-Jδ1和δRec151298^-Jδ1,该新的TCR δRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。RT-PCR显示该两种TCR δRec-Jδ1基因重排的产物可见于2例T-ALL中,而正常人为阴性。结论 本研究发现两种新的TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1 基因重排。该重排基因表达于T-ALL中,而正常人不表达该重排基因,提示该重排形式可能与T细胞白血病的形成有一定的关系。     

T-ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec_(151051)-Jδ1和δRec_(151298)-Jδ1

目的分析 T细胞急性淋巴细胞白血病 ( T- AL L )细胞中 TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法利用半巢式 PCR扩增 2例 T- AL L、10例正常人外周血和 7例正常人胸腺细胞 DNA的 TCRδ基因组片段 ,了解其重排情况 ,克隆性 PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定重排位置 ,并进一步经 RT- PCR检测其重排基因的表达情况。结果在 2例 T- AL L 病人白血病细胞发现两种新的 TCRδRec- Jδ1基因重排方式 ,称为 δRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1,该新的 TCRδRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。 RT- PCR显示该两种 TCRδRec- Jδ1基因重排的产物可见于 2例 T- AL L中 ,而正常人为阴性。结论本研究发现两种新的 TCRδRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1基因重排。该重排基因表达于 T- AL L中 ,而正常人不表达该重排基因 ,提示该重排形式可能与 T细胞白血病的形成有一定的关系     

皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点

目的：对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究。方法：临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点，免疫表型通过LCA、CD3、UCIL、L26单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色，用识别Vδ^1、Vδ^2的抗体进行γδTCR亚型分析，PCR检测SPTCL患者TCR基因重排。结果：7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降，5例出现嗜血细胞综合征，7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常。7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润，均表达LCA、CD3、UCHL，不表达L26。4例SPTCL患者中有3例表达γTCR，1例表达αβTCR，3例γδTCR患者均表达Vδ^2 ，4例有3例出现TCRγ基因重排。结论：SPTCL大多病情严重，肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的Vδ^2 细胞，可以出现TCRγ基因重排。     

不同发育阶段胸腺细胞表达不同类型

MHC 约束性T 细胞识别特异抗原的结构(TCR)由二条糖酰化多肽链(α、β)组成,并通过共价键与CD_3联结。近年发现,由γ、δ异二聚体组成的TCR 分布于不成熟胸腺细胞、外周血T 细胞、树状突上皮细胞(DEC)、囊上皮内的淋巴细胞等,其功能尚未完全明了,分析发育过程中γ、δ基因重排与表达有助于阐明它在TCR 功能中的协调配合作用。据此,本文分析胎胚、新生、成年小鼠胸腺细胞γδTCR 的多样性。将C_(57)BL/6、BALB/C 小鼠胸腺细胞用抗-L_3T_4单抗、抗-Lyt_2单抗及兔补体处理后获得CD_4~-、CD_8~-(双阴性、DN)胸腺     

正常人T细胞和胸腺细胞中多种新的TCRδRec基因重排

利用巢式或半巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMC)、4例分选CD3~+细胞和7例正常胸腺细胞DNA中TCR δRec区与Jδ1、Dδ3和Ja重排的基因片段,分析正常人外周血T细胞和胸腺细胞中TCR δRec基因重排情况。克隆性PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定其重排位置。结果发现了4种新的TCR δRec重排,包括TCR δRec_(149321)-Jδ1、TCRδRec_(149820)-Jδ1、TCR δRec_(151657)(Nx)-Ja和TCR δRec_(153199)-Jδ1等,其中以TCR δNx的重排最多见,通过利用不同模板DNA的PCR分析发现δRec重排在外周血和胸腺细胞中有所不同。结果显示TCR δNx-Jδ1重排在成熟和不成熟T细胞发生频率均较高,而TCR δNx-Dδ3重排在不成熟T细胞中发生率较高。但所有重排均不表达于mRNA中。本研究结果为TCR δ基因重排的研究补充了一些新的数据。     

利用Fine-tiling aCGH分析TCR基因重排鉴定T细胞白血病克隆

目的:建立基于分析T细胞受体(TCR)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及TCR基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列。并进一步通过RT-PCR检测TCR基因表达。结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体TCRα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应TCR Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点。通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中TCR基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3 Jδ1、Vδ2Dδ3 Jδ2重排。RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该TCR基因重排。结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出TCR基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及TCR位点的融合基因的一条途径。     

血液系统肿瘤患者外周血细胞IgH基因和TCRγ基因的检测及意义

检测各种血液系统肿瘤患者外周血细胞免疫球蛋白重链基因 (IgH )和T细胞受体γ基因 (TCRγ )克隆性重排并探讨其意义。通过多聚酶链式反应 (PCR )方法检测 32例非霍奇金淋巴瘤 (NHL )、 18例急性髓性白血病 (AML )、 2 4例多发性骨髓瘤 (MM )、 8例急性淋巴细胞白血病 (ALL )及 6例慢性淋巴细胞白血病 (CLL )患者外周血细胞IgH及TCRγ克隆性基因重排。结果表明 ,NHL、AML、MM、ALL及CLL患者中IgH克隆性重排率分别为 37 5 0 %、 2 2 2 2 %、 83 33%、 12 5 0 %和 16 6 7% ;TCRγ基因克隆性重排率分别为 6 2 5 0 %、 5 0 0 0 %、 5 4 17%、 5 0 0 0 %及 5 0 0 0 %。在B型、T型NHL中 ,IgH克隆性重排率分别为 31 5 8%及 6 6 6 7% ;TCRγ克隆性重排率分别为 47 37%及 6 6 6 7%。AML中IgH克隆性重排阳性者的初治完全缓解率(CR ) (5 0 0 0 % )与IgH重排阴性的初治CR率 (5 0 0 0 % )无显著差异 (P >0 0 5 )。TCRγ克隆性重排阳性者与阴性者的初治CR率 (均为 44 44 % )亦无显著差异 (P >0 0 5 )。IgH及TCRγ基因克隆性重排不具有细胞谱系的特异性 ,但通过检测外周血IgH、TCRγ克隆性基因重排对NHL有辅助诊断意义 ,并且可作为监测微小残留病壮 (MRD )的手段。     

B-ALL患者外周血γδT细胞TCR亚家族谱系分布和增殖特点

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基因谱系的分布情况;进一步经荧光素标记和基因扫描分析TCR Vγ和TCR Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),以检测T细胞克隆性。10例健康成人外周血作为对照。结果 B-ALL患者外周血中TCR Vγ亚家族表达率降低,其中VγII亚家族表达率降低与健康对照组的差异具有统计学意义(P=0.006)。B-ALL患者外周血中Vδ1(57.1%)、Vδ2(42.9%)和Vδ3(14.3%)亚家族表达率均低于健康对照组,且差异有统计学意义(P=0.024,0.006,0.001)。此外,在B-ALL患者外周血中可以检测到在健康人中未检测到的Vδ4(14.3%)和Vδ5(14.3%)亚家族;且Vδ6(28.6%)、Vδ7(21.4%,)和Vδ8(35.7%)亚家族表达率也高于健康对照组。B-ALL患者外周血中存在克隆性增殖的Vγ和Vδ亚家族T细胞,其中,Vδ8亚家族T细胞寡克隆增殖的发生频率最高(35.7%),其次为Vδ6(28.6%)和Vδ7(21.4%)亚家族T细胞。结论 B-ALL患者外周血TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞出现限制性表达和克隆性增殖,其中高频率出现的寡克隆性增殖的Vδ亚家族T细胞可能与体内存在的白血病抗原相关。     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。     

γ/δT细胞抗原受体与一种新的具丝裂原作用的anti-δ抗体结合后产生的信号传导

近来在人外周血中发现有少数T 细胞带有一种不同于Tiαβ-CD_3的T 细胞抗原识别受体(TCR)。这种TCR 是由γ、δ多肽链和CD_3分子形成的复合物。同时在先天性无胸腺的小鼠和免疫缺陷的病人中发现有高水平的γ/δ-TCR~+细胞存在。这种TCR 也存在于胸腺细胞和一些肿瘤细胞膜上。γ/δ-TCR~+细胞功能尚不明确,它与具MHC 限制性的细胞毒作用和γIFN 的产生无关。基因研究发现在T 细胞分化早期,γ基因重排较α、β基因重排为早,提示γ/δ-TCR 在T 细胞发育中     

Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析

目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点

目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCRδRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCRδRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论TCRδRec151051、TCRδRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCRδRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCRδRec151298-Jδ1和TCRδRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.     

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。     

IgH、TCR-γ基因重排与免疫组化诊断非霍奇金淋巴瘤的价值

目的　探讨基因重排与免疫组化在诊断非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin’slymphoma,NHL)中的价值。方法　对131 例NHL的石蜡包埋组织进行免疫组化和基因重排检测。结果　60例B细胞NHL中51例IgH基因重排检测为阳性,阳性率 85%;50例T细胞NHL中38例TCR -γ基因重排检测为阳性,阳性率76%;HE形态学和免疫组化分型诊断率为84%(110 例),加用IgH和TCR -γ基因重排,分型诊断率达94.6%(124例),两分型诊断率差异有显著性(P<0.05)。6例巨大淋巴结 增生和3例血管免疫母细胞性淋巴结病IgH和TCR -γ基因重排检测均为阴性。基因重排与形态学和免疫组化结果不相符的 病例有7例。结论　联合运用免疫组化和基因重排技术,可提高NHL的分型诊断率。     

多重PCR检测急性非淋巴细胞白血病IgH及TCRVγΙ-Jγ基因重排

目的:为进一步了解急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人基因重排情况。方法:应用多重PCR技术检测41例ANLL病人IgH及TCRVγIJγ基因重排。结果:26.8%(11/41)ANLL病人存在IgH或/和TCRVγIJγ基因重排,3例病人同时存在IgH和TCRVγIJγ基因重排;基因重排阳性ANLL治疗缓解率低于重排阴性ANLL病人(P<0.05)。结论:①IgH或TCR基因重排并非局限于淋巴细胞白血病,也可发生于部分ANLL病人;②多重PCR技术可以一次PCR扩增同时检测两种重排基因,更适于临床推广应用。     

小儿急性白血病免疫球蛋白基因的变化

本研究分析324例小儿兔性白血病细胞的免疫球蛋白重链基因和 kappa 轻链基因的变化.结果显示:(1)免疫球蛋白基因的变化具有 B 淋巴细胞系特导性.(2)kappa 基因的重排或缺失常见于前一前B 细胞和前 B 细胞性血病.(3)急性未分化性白血病都因具有重链基因重排,提示已定向进入 B 淋巴细胞.(4)部分白血病细胞呈寡克隆性恶性增殖.(5)一例表型当前一前 B 细胞性白血病 kappa 基因重排,重链基因为胚系     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1基因重排的分布特点

目的 分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点。方法 利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞（PBMCs）、4例分选的外周血CD3^ T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR δRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJa重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率。结果 TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排和TCR δRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCR δRec151298与Jδ1和ψJa的重排则多见于胸腺细胞中,对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论 TCR δRec151051、TCR δRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCR δRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR δRec151298-Jδ1和TCR δRec151298-ψJa则主要见于未成熟T细胞中。     

CML急变的Ig和TCR基因双重排

免疫球蛋自(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排可分别作为B细胞系和T细胞系的遗传学标记。约25%ALL,甚至AML,尤其是末端转脱氧核苷酸酶(TdT)阳性AML可有Ig和TCR基因双重排。CML急淋变多数源于有Ig基因重排的B细胞克隆,部分起源于有TCR基因重排的T细胞克隆。本文首次报告一例有IgH和TCR(β、δ)基因双重排,慢性期长达7年多的急淋变Ph~+CML。