关于痘苗病毒的毒力

关于痘苗病毒的毒力陈南海，白宏东（中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室，北京１０００５２）随着分子生物学的发展，利用痘苗病毒作为表达外源基因的载体以及研制重组痘苗病毒活疫苗又重新引起了人们的兴趣［１］。与此同时，过去用痘苗病毒作为...     

痘苗病毒天坛株基因组病毒生长因子基因结构的研究

克隆了位于我国痘苗病毒天坛株基因组左端的病毒生长因子（ＶＧＦ）基因并对其编码多肽的结构特点进行了分析。结果表明，由天坛株ＶＧＦ基因所推导的氨基酸序列具有典型的上皮生长因子（ＥＧＦ）超家族成员的特征序列和结构特点，在核苷酸及氨基酸水平上天坛株ＶＧＦ与其他正痘病毒ＶＧＦ的同源性在８５％～９５％之间，氨基酸残基的缺失和插入等变异主要集中出现在多肽的信号肽和穿膜区，推测对功能的影响不大。此外，我们发现由天坛株基因组右末端的开放读码框架（ＯＲＦ）ＴＢ２２Ｌ推导的氨基酸序列与天坛株ＶＧＦ多肽第６７位至１４０位完全相同，提示ＯＲＦＴＢ２２Ｌ可能是天坛株基因组第二个ＶＧＦ基因的变异产物。     

痘苗病毒表达载体

自重组DNA技术问世以来,利用细菌质粒或噬菌体的自我复制单位而组建的大量原核细胞克隆和表达载体,被广泛用于外源基因的克隆、核苷酶序列分析和多肽表达。这些原核细胞克隆和表达载体不仅在理论上揭示了基因表达、调控的一系列基本规律,在实际上也使得大量的原核和真核细胞基因得到分子克隆和表达,其中许多重组DNA产物已经在实际工作中大量应用,对分子生物学和社会经济的迅速发展起了重大作用。原核细胞表达载体的主要优点是:基因操作相对简单;制备容易;重组体便于挑选和鉴定;外源基因表达量也比较大。但     

痘苗病毒载体与肿瘤基因治疗（上）——重组痘苗病毒载体构建及特性

应用重组痘苗病毒载体进行肿瘤基因治疗取得了很大的进展。与其它病毒载体比较，痘苗病毒载体有较大的外源基因容量，可达２５￣４０ｋｂ，宿主范围广泛，可感染非分裂细胞，并且仅在细胞质中复制，无致癌性的报道。目前，随着重组载体构建、减毒、选择标记及外源基因表达调控方面的进展，可望作为一种较理想的载体介导肿瘤的基因治疗。     

痘苗病毒增强子样序列的筛选及应用研究

目的从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列，构建携带原核增强子样序列的表达载体，探讨其对干扰素基因表达的影响。方法采用氯霉素乙酰转移酶基因（cat）作为报告基因，从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列，构建携带增强子样序列VV1的表达载体，表达干扰素基因和检测干扰素活性。结果从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选出18个在大肠埃希菌中具有增强活性的序列，从中筛选到两个原核增强子样序列VV1和VV16，VV1正反向分别可使lacZ基因活性提高10．9倍和3．8倍，VV16正反向分别可使lacZ基因活性提高9．0倍和4．1倍；证实它们的增强活性体现在转录水平；用痘苗病毒增强子样序列VV1构建的表达载体，其表达的IFN—a2b型干扰素比原表达载体活性高2．6倍。结论从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到2个原核增强子样序列一携带有痘苗病毒增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平。     

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型，分泌量与细胞裂解物内量大致相同     

表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究

目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平；利用C3肿瘤细胞在C57BIJ6小鼠中的成瘤模型，观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果。结果重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠，可以检测到针对L1和12特异的抗体、L1165-175肽特异性的、分泌IFN-的T细胞；同时可以观察到免疫后的C57BI/6小鼠，可以有效预防HPV．16相关肿瘤细胞（1．5×10^5C3细胞）的攻击；对已产生的肿瘤，可以延缓肿瘤细胞的生长速度。结论重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料。     

痘苗病毒载体在冠状病毒反向遗传学中的应用

反向遗传学方法是研究RNA病毒的主要方法,痘苗病毒载体则是感染性克隆技术的主要媒介,目前这一技术已趋向成熟并扩大其应用领域及对象.本文对痘苗病毒载体的构建、在冠状病毒反向遗传学中的应用情况以及目前该领域的进展作一综述.     

痘苗病毒载体在冠状病毒反向遗传学中的应用

反向遗传学方法是研究RNA病毒的主要方法，痘苗病毒载体则是感染性克隆技术的主要媒介，目前这一技术已趋向成熟并扩大其应用领域及对象。本文对痘苗病毒载体的构建、在冠状病毒反向遗传学中的应用情况以及目前该领域的进展作一综述。     

应用痘苗病毒体表达猴轮状病毒VP4抗原基因

把编码猴轮状病毒Ｖｐ４抗原的第４基因片段插入到痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５的Ｐ７．５启动子下游，构建成在痘苗病毒Ｐ７．５启动子调控下表达猴轮状病毒Ｖｐ４抗原基因的重组质粒ｐＪＳＡ１１７５－Ｖｐ４。应用磷酸钙沉淀技术将ｐＪＳＡ１１７５－Ｖｐ４ＤＮＡ转入ＴＫ－１４３细胞，在ＢＵＤＲ和Ｘ－ｇａｌ 存在下筛选蓝色蚀斑。     

痘苗病毒载体与肿瘤基因治疗（下）——重组痘苗病毒载体介导的肿瘤基…

目前采用同源重组构建了多种表达外源基因的重组痘苗病毒载体，包括ＩＬ－２，ＩＬ－３，ＩＬ－４，ＩＬ－５，ＩＬ－６，ＩＦＮα，ＩＦＮγ，ＧＭ－ＣＳＦ，ＴＮＦ，ＩＬ－１０等细胞因子基因及ｐ９７，ＣＥＡ，ＭＵＣ１等肿瘤抗原基因，并应用于肿瘤基因治疗的体内外实验取得了明显的疗效。应用痘苗病毒载体进行ｉｎ ｖｉｖｏ基因治疗可望成为肿瘤基因治疗的一种新模式。     

痘苗病毒载体与肿瘤基因治疗（上）──重组痘苗病毒载体构建及特性

应用重组痘苗病毒载体进行肿瘤基因治疗取得了很大的进展。与其它病毒载体比较，痘苗病毒载体具有较大的外源基因容量，可达２５～４０ｋｂ，宿主范围广泛，可感染非分裂细胞，并且仅在细胞质中复制，无致癌性的报道。目前，随着重组载体构建、减毒、选择标记及外源基因表达调控方面的进展，可望作为一种较理想的载体介导肿瘤的基因治疗     

痘苗病毒实验室获得性感染病例的状况及特征分析

目的 通过分析文献报道的痘苗病毒实验室感染病例状况与特征,为预防和控制我国痘苗病毒实验室获得性感染提供相关建议与措施.方法 选择PubMed、Embase、Biosis以及涵盖SCIE、SSCI、CPCI-S和CPCI-SSH的Web of Science作为数据源,检索痘苗病毒实验室获得性感染文献,对获取病例资料从是否接种疫苗、症状出现时间、发病部位、症状特征、发生原因等方面信息进行分析.结果 52％病例从未接种过疫苗,82.4％病例在从事痘苗病毒相关研究10年内未接种过疫苗,52.9％病例是在进行动物实验过程中意外针刺手部而导致感染,70.6％病例感染部位发生在手部,暴露后平均5.1天出现感染症状.结论 虽然在开展痘苗病毒相关研究工作之前是否接种疫苗还存在争议,但严格遵守生物安全操作要求,加强个人防护,出现意外情况后立即采取现场应急措施,及时就诊并向医生提供研究背景信息应是预防和控制痘苗病毒实验室获得性感染的重要方面.     

痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究

痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究①杨洁江悦华②罗超权杨太成②伍新尧王晓怀③杨英浩（中山医科大学生化教研室，广州５１００８９）①本课题为广东省卫生厅“九五”五个一工程资助项目②广州军区总医院医学实验科，广州５１００６０③广州军区总医院放射肿瘤科...     

sgp13OcDNA在痘苗病毒载体系统中的表达

ｇｐ１３０是一种分子量为１３０ｋＤ的细胞膜糖蛋白,是ＩＬ－６等多种细胞因子共用的信号传递分子。本研究将含ｇｐ１３０胞外区全长的可溶性片段的基因（ｓｇｐ１３０ｃＤＮＡ）构建到痘苗病毒载体中,并与野生型痘苗病毒在ＴＫ－１４３细胞中发生同源重组,用ＢｕｄＲ和Ｘ－ｇａｌ双重选择,得到带有人ｓｇｐ１３０的重组痘苗病毒（Ｖｓｇｐ１３０）。采用ＩＤＡ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法证实：感染Ｖｓｇｐ１３０的ＴＫ－１４３细胞上清中有较强的ｓｇｐ１３０表达,表达产物分子量为１００ｋＤ左右。     

痘苗病毒编码的生长因子对细胞凋亡的抑制作用

痘苗病毒编码的生长因子对细胞凋亡的抑制作用李虹金奇邓旭明侯云德本文由国家８６３高科技生物技术领域基金资助作者单位：１０００５２北京中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室１９９７年１２月４日收稿１９９８年１月４日修回痘苗病毒编码的生长...     

免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用

 修饰的安卡拉痘苗（modified vaccinia Ankara，MVA）是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞（CEF）中经过一系列的传代得到^[1]，在人体内可以表达 MVA 病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白，但却不形成完整的病毒颗粒，为人体内复制缺陷性病毒^[2]，安全性好，即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用^[3]。近年来，重组 MVA 病毒广泛地用于预防性疫苗和感染性疾病、癌症治疗的基础与临床研究^[4]，其中以 MVA 病毒作为载体的疫苗是最有希望用于预防人类艾滋病的活载体疫苗之一^[5]。由于 MVA 病毒本身的繁殖特点，其滴度的检测不适合采用常规的蚀斑法进行^[6]；而常规微量细胞病变（cytopathic effect，CPE）法相对耗时，对细胞培养要求高，往往受到主观因素的影响，因而不稳定且精确度降低^[7]，给检测工作带来不便。上世纪 90 年代初 Usuba 等^[8]建立了免疫酶技术测定流感病毒感染性滴度的方法，较常规方法省时、结果准确﹑重复性好。我们就免疫酶技术在 MVA 病毒感染性滴度检测中的适用性进行了探讨，旨在建立一种准确、快速的 MVA 病毒感染性滴度检测方法。......     

表达HPV 16型结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的 构建表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体,通过与痘苗病毒在宿主细胞中同源重组后,筛选共表达L1／L2蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果 DNA序列分析证实PCR扩增所获L1和L2克隆基因是正确的;斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1和L2基因插入;该重组病毒在人源细胞中不复制或低水平复制,但可稳定表达相对分子质量为57000的L1蛋白和相对分子质量为90000的L2蛋白。结论 获得1株稳定表达HPV16 L1／L2蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。     

痘苗病毒载体与肿瘤基因治疗（下）──重组痘苗病毒载体介导的肿瘤基因治疗

目前采用同源重组构建了多种表达外源基因的重组痘苗病毒载体，包括ＩＬ－２，ＩＬ－刀，ＩＬ－４，ＩＬ－５，ＩＬ－６，ＩＦＮα，ＩＦＮγ，ＧＭ－ＣＳＦ，ＴＮＦ，ＩＬ－１０等细胞因子基因及ｐ９７，ＣＥＡ，ＭＵＣ１等肿瘤抗原基因，并应用于肿瘤基因治疗的体内外实验取得了明显的疗效。应用痘苗病毒载体进行ｉｎｖｉｖｏ基因治疗可望成为肿瘤基因治疗的一种新模式。