紫花牡荆素对人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究紫花牡荆素(Casticin)对人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人卵巢癌HO一8910细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成5组,每组3只:生理盐水组、多西紫杉醇组(0.5rng/kg)、低剂量Casticin组(5 mg/kg)、中剂量Casticin组(10 rng/kg)和高剂量Casficin组(20 mg/kg).观察各组裸鼠移植瘤生长情况和裸鼠体重的变化;观察裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Western Blot分析瘤组织细胞凋亡的分子生物学机制.结果 Casticin对移植瘤生长有明显抑制作用.呈剂量和时问依赖性;而对裸鼠体重、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酐值和外周血白细胞计数均无影响.经Casticin作用16d,裸鼠移植瘤细胞表现出剂量依赖性增加的亚二倍峰,Bd-2蛋白表达降低.caspase-3蛋白表达增高.结论 Casticin具有抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的作用,并通过降低Bcl-2蛋白表达,活化Caspase-3蛋白表达诱导瘤组织细胞凋亡.     

紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:观察紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。方法:体外培养HeLa细胞。ELISA法测定细胞培养液组蛋白/DNA碎片。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析Sub-G1细胞百分率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:CAS以浓度依赖方式增加HeLa细胞组蛋白/DNA碎片的渗漏(P<0.05),同时显著升高HeLa细胞Sub-G1百分率(P<0.05)。CAS以Caspase依赖方式激活HeLa细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:CAS能有效诱导HeLa细胞凋亡。     

紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

紫花牡荆素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的 研究紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1.0及2.0 μmol/L的Casticin作用于HepG2细胞,于12、24及48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342核染色,观察细胞形态学变化;24 h后收集各组肝癌HepG2细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,Casticin对肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;Hoechst33342染色后,可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染.与对照组相比,Casticin处理后凋亡细胞比例增加.Casticin作用24h后,细胞被阻滞于G2/M期,随药物质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.RT-pCR结果 显示,Casticin下调肝癌HepG2细胞survivin mRNA表达.结论 Casticin在体外对肝癌HepG2细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断Casticin诱发肝癌细胞凋亡的作用与其对survivin基因表达的抑制有关.     

凋亡信号调节激酶1在紫花牡荆素诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的:研究紫花牡荆素诱导人结肠癌细胞凋亡作用及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌HT-29细胞。碘化丙啶(P)I染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。荧光探针二氯荧光素(DCFH-DA)标记FCM测定细胞内活性氧的含量。Western blot和小干扰RNA转染用于探索其分子机制。结果:紫花牡荆素以浓度依赖性的方式诱导结肠癌HT-29细胞系细胞凋亡。紫花牡荆素引起活性氧(ROS)的产生,并激活HT-29细胞的凋亡信号调节激酶1(ASK1)。N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HT-29细胞有效地抑制ASK1活性,减弱紫花牡荆素处理引起的细胞凋亡。ASK1特异小干扰RNA能显著减弱紫花牡荆素诱导HT-29细胞凋亡作用。结论:紫花牡荆素通过刺激活性氧形成活化ASK1诱导结肠癌HT-29细胞凋亡。     

紫花牡荆素诱导肝癌Hep G2细胞分化

目的:研究紫花牡荆素诱导人肝癌Hep G2细胞分化作用.方法:体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用瑞氏-姬姆萨染色显微镜下测量细胞核质比,放射免疫法检测细胞上清液甲胎蛋白(AFP)水平,酶促反应试剂盒检测细胞碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷胺酰转肽酶(γ-GT)的活性;Diamond stone分光光度法测定细胞酪氨酸α-...     

紫花牡荆素体内抗炎作用的研究

目的:探讨中药蔓荆子中主要成分紫花牡荆素的抗炎作用。方法:通过急性抗炎模型——二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、鸡蛋清致大鼠足跖肿胀实验以及腹腔注射0.7%醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的实验,观察紫花牡荆素的抗炎作用。结果:紫花牡荆素对二甲苯所致小鼠耳廊肿胀、鸡蛋清所致大鼠足肿胀以及醋酸所致小鼠毛细血管通透性增加均有明显的抑制作用。结论:紫花牡荆素具有明显的体内抗炎作用,为蔓荆子抗炎作用的有效成分。     

紫花牡荆素抗肿瘤作用机制的研究进展

多甲氧基黄酮类化合物紫花牡荆素是中国传统中草药蔓荆子的主要活性成分之一,具有抗炎、抗肿瘤等功效。本文归纳总结紫花牡荆素抗肿瘤作用机制的研究进展,以期为紫花牡荆素抗肿瘤的进一步开发利用提供一定参考。     

紫花牡荆素对卵巢癌OVCAR-3细胞系肿瘤球形成的影响

目的:研究紫花牡荆素(casticin,CAS)是否抑制卵巢癌OVCAR-3细胞系肿瘤球形成能力。方法:肿瘤球形成法检测不同浓度CAS(1.0、3.0、10.0μmol/L)对OVCAR-3细胞系肿瘤球形成能力的影响。Western Blot分析探讨CAS影响OVCAR-3细胞系肿瘤球形成机制是否涉及其下调干细胞标志物CD44蛋白表达。结果:CAS以浓度依赖方式抑制OVCAR-3细胞系肿瘤球形成能力。与亲本细胞相比,OVCAR-3细胞系球形成细胞高表达CD44蛋白。CAS显著下调OVCAR-3细胞系球形成细胞CD44蛋白表达。结论:CAS抑制卵巢癌OVCAR-3细胞系肿瘤球形成与其下调干细胞标志物CD44蛋白表达相关。     

紫花牡荆素对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响

目的观察紫花牡荆素（CAS）对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞,平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率,Western Blotting分析CAS对上调死亡受体-5（DR5）、抑制核因子κB（NF-κB）（p65）蛋白表达的影响。结果平皿克隆形成法检测显示CAS呈浓度依赖性抑制SW480细胞生长。PI染色FCM结果表明CAS呈时间和浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡。Western Blotting检测显示CAS呈时间和浓度依赖性上调死亡受体-5（DR5）表达和抑制核因子κB（NF-κB）活性。结论 CAS具有抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导凋亡的作用,其诱发结肠癌细胞凋亡作用与DR5表达和NF-κB活性有关。     

活性氧激活线粒体凋亡通路是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的重要机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,活性氧引起的线粒体膜电位丧失及凋亡作用的相关机制。方法 用活性氧荧光探针DCFH-DA探测经亚硒酸钠诱导的NB4细胞内活性氧的含量。流式细胞术检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化。Westem blot检测胞浆中细胞色素C含量的变化及细胞总蛋白中Bcl-xl、Bax和Bid的含量变化及切割行为。同时应用活性氧清除剂MnTmPy及活性氧激活剂BSO预处理细胞,观察Bid及凋亡的变化。结果 活性氧清除剂MnTmPy可有效抑制亚硒酸钠诱导的NIM细胞凋亡、线粒体膜电位丧失及Bid的切割;而BSO可促进线粒体膜电位丧失。结论 亚硒酸钠诱导NIM细胞凋亡的可能机制是通过刺激细胞产生活性氧,一方面下调抗凋亡蛋白Bcl-xl,另一方面激活线粒体打孔蛋白Bax和Bid,损伤线粒体使膜电位降低,促使线粒体释放细胞色素C。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

活性氧清除剂保护心肌细胞对抗化学性缺氧损伤

目的 探讨活性氧(ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护H9c2心肌细胞对抗化学性缺氧引起的损伤.方法 应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl_2)处理H9c2心肌细胞,建立化学性缺氧损伤心肌细胞的实验模型.在CoCl_2处理H9c2心肌细胞前60min把NAC加入培养基中,作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内ROS水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP);谷胱甘肽试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH)的比值.结果 600 μmol/L CoCl_2明显地降低细胞存活率.在CoCl_2处理H9c2心肌细胞前60 min,应用500～2000μmol/L NAC能剂量依赖性地抑制CoCl_2对心肌细胞的损伤作用,使细胞存活率显著升高.2000/μmol/LNAC能明显地对抗CoCl_2引起的氧化应激反应,使H9c2心肌细胞内GSSG/(GSSG+GSH)的比值及ROS水平明显降低,并明显地对抗CoCl_2对MMP的抑制作用.结论 NAC能显著地对抗化学性缺氧诱导的心肌细胞损伤,此心肌细胞保护作用与其降低GSSG/(GSSG+GSH)的比值及ROS水平,改善MMP等机制有关.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of reactive oxygen species (ROS) scavenger, N-acetyl-L-cysteine (NAC), against H9c2 cardiomyocytes from injuries induced by chemical hypoxia. Methods H9c2 cells were treated with cobalt chloride (CoCl_2), a chemical hypoxia-mimetic agent, to establish the chemical hypoxia-induced cardiomyocyte injury model. NAC was added into the cell medium 60 min prior to CoCl_2 exposure. The cell viability was evaluated using cell counter kit (CCK-8), and the intercellular ROS level was measured by 2', 7'- dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA) staining and photofluorography. Mitochondrial membrane potential (MMP) of the cells was observed by Rhodamine 123 (Rh123) staining and photofluorography, and the ratio of GSSG/ (GSSG+GSH) was calculated according to detection results of the GSSG kit.Results Exposure of H9c2 cardiomyocytes to 600 μmol/L CoCl_2 for 36 h resulted in significantly reduced cell viability. Pretreatment with NAC at the concentrations ranging from 500 to 2000 μmol/L 60 min before CoCl_2 exposure dose-dependently inhibited CoCl_2-induced H9c2 cell injuries, and obviously increased the cell viability. NAC at 2000 μmol/L obviously inhibited the oxidative stress induced by CoCl_2, decreased the ratio of GSSG/(GSSG+GSH), increased ROS level, and antagonized CoCl_2-induced inhibition on MMP. Conclusions NAC offers obvious protective effect on H9c2 cardiomyocytes against injuries induced by chemical hypoxia by decreasing in the ratio of GSSG/ (GSSG+GSH) and ROS level and ameliorating MMP.     

氢气饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧生成和凋亡的影响

目的 探讨氢气(H2)饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧(ROS)生成和凋亡的影响.方法 细胞分为对照组、高糖组、高糖+H2饱和生理盐水组(H2组)3组,流式细胞仪检测细胞内ROS,Realtime PCP检测氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA,细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡.结果 H2组内皮细胞内ROS较高糖组明显减少(2.75±0.37 vs 6.35±1.29,P<0.01),而SOD和GSH-Px mRNA水平明显增高(SOD:0.74±0.06 vs 0.26±0.03,P<0.01;GSH-Px:0.68±0.05 vs 0.31±0.04     

Casticin对宫颈癌细胞凋亡和线粒体凋亡途径的影响

目的探讨紫花牡荆素（Casticin,CAS）是否通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞。EusA法检测细胞组蛋白／DNA碎片;碘化丙啶（propidium iodide,PI）染色流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析细胞凋亡率;比色法测定细胞半胱天冬酶caspase-9,-3活性;罗丹明123探针FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果CAS以浓度依赖方式增高HeLa细胞组蛋白／DNA碎片水平和凋亡率（P〈0．05）。CAS增强HeLa细胞caspase-9,-3活性（P〈0．05）和诱导Hela细胞线粒体膜电位下降（P〈0．05）,呈浓度依赖性。结论CAS诱导HeLa细胞凋亡涉及线粒体凋亡途径的激活。     

线粒体DNA缺失肝癌细胞内活性氧、线粒体膜电位变化实验研究

目的 比较活性氧、线粒体膜电位在线粒体DNA缺失肝癌细胞株SK-Hep1(ρ0SK-Hep1)与亲本细胞中的差别.方法 采用溴化乙锭诱导制备ρ0SK-Hep1细胞株;荧光探针标记、流式细胞计数及激光共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧和线粒体膜电位.结果 ρ0SK-Hep1细胞内活性氧荧光强度显著高于其亲本SK-Hep1细胞株(P＜0.01),ρ0SK-Hep1肝癌细胞平均计数35.5,而SK-Hep1肝癌细胞平均计数15.9.ρ0SK-Hep1细胞线粒体膜电位显著低于亲本细胞(P＜0.01),ρ0SK-Hep1细胞平均计数55.0,而SK-Hep1细胞平均计数65.9.结论 线粒体DNA缺失后细胞内活性氧水平增加,而线粒体膜电位有所减低.     

沙眼衣原体感染诱生的活性氧(ROS)对宿主细胞坏死的影响

 目的 初步观察沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)感染诱生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)对宿主细胞坏死的影响,为沙眼衣原体与宿主细胞死亡机制的相互作用提供初步线索。 方法 沙眼衣原体小鼠生物型(Chlamydia muridarum)感染L929细胞,分别在12 h、24 h收集细胞,检测其ROS、坏死率及16srRNA表达,并检测应用ROS抑制剂(diphenyliodonium chloride,DPI)后上述指标及caspase 1的活性情况。结果 沙眼衣原体感染了L929细胞。与对照组相比,实验组在12 h、24 h 2个检测时间点的ROS、细胞坏死率及16srRNA表达均有显著增加,且随时间延长增加趋势加大(P＜0.05)。用药物DPI处理感染的L929细胞后,实验组与对照组相比不但ROS水平降低,而且伴随着细胞坏死率、caspase 1活性和16srRNA表达的降低(P＜0.05)。结论 沙眼衣原体感染L929细胞后诱生的ROS一定程度上促进了宿主细胞的坏死。     

Role of reactive oxygen species in triptolide-induced apoptosis of renal tubular cells and renal injury in rats

This study investigated the role of reactive oxygen species(ROS) in the pathogenesis of triptolide-induced renal injury in vivo.Rats were randomly divided into 4 groups(n=5 in each):triptolide group in which the rats were intraperitoneally injected with triptolide solution at a dose of 1 mg/kg of body weight on day 8;control group in which the rats received a single intraperitoneal injection of 0.9% physiological saline on day 8;vitamin C group in which the rats were pretreated with vitamin C by gavage at a dose of 250 mg/kg of body weight per day for 7 days before the same treatment as the control group on day 8;triptolide+vitamin C group in which the rats were first subjected to an oral administration of vitamin C at a dose of 250 mg/kg of body weight per day for 7 days,and then to the same treatment as the triptolide group on day 8.All the rats were sacrificed on day 10.Blood samples were collected for detection of plasma creatinine(Pcr) and plasma urea nitrogen(PUN) concentrations.Both kidneys were removed.The histological changes were measured by haematoxylin-eosin(HE) staining.The production of ROS was determined by detecting the fluorescent intensity of the oxida-tion-sensitive probe rhodamine 123 in renal tissue.Renal malondialdehyde(MDA) content was meas-ured to evaluate lipid peroxidation level in renal tissue.TUNEL staining was performed to assess apop-tosis of renal tubular cells.Renal expression of apoptosis-related proteins Bcl-2,Bax,Bid,Bad,Fas and FasL,as well as corresponding encoding genes were assessed by Western Blotting and real-time PCR.The results showed that triptolide treatment promoted the generation of a great amount of ROS,up-regulated the expression of Bax,Bid,Bad,Fas and FasL at both protein and mRNA levels,as well as the ratio of Bax to Bcl-2,and caused the apoptosis of renal tubular cells and renal injury.However,pretreatment with an antioxidant,vitamin C,significantly reduced the generation of ROS and effectively inhibited the triptolide-induced apoptosis of renal tubular cells and renal injury.It was concluded that ROS plays a critical role in triptolide-induced apoptosis of renal tubular cells and renal injury.The protective administration of vitamin C may help alleviate triptolide-induced renal injury and nephrotoxicity.