谷氨酸对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用

目的 探讨谷氨酸对体外培养的大鼠皮层神经细胞的损伤作用。方法 在对体外新生大鼠（0－1d)大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，分组加入不同浓度的谷氨酸作用10min,24h后测定细胞死亡率、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果 大鼠皮层神经细胞在50μmol/L谷氨酸作用10min后，细胞死亡率和LDH活性增加，SOD活性降低，神经细胞MDA含量增高。随着谷氨酸浓度的增加，上述变化更明显。结论 谷氨酸可损伤培养大鼠皮层神经细胞，这种作用在某种程度上由氧自由基介导。     

凝血酶对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用研究

目的通过研究凝血酶对培养神经细胞的毒性作用,探讨脑出血凝血酶致神经细胞损伤的机制.方法采用新生1～2 d大鼠皮层神经元进行原代分散培养,分别在含150 U/ml凝血酶、150 U/ml凝血酶 150 U/ml重组水蛭素以及正常的培养液中孵育3 d后测定下列指标:①甲苯胺蓝染色法测定残存细胞数并计算神经细胞丧失率;②TdT介导的dUTP缺口末端标记法检测TUNEL阳性细胞的表达;③免疫组化二步法测caspase-3免疫反应性(Immune Reactivity,IR)细胞的表达;④培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果凝血酶组较水蛭素干预组及对照组神经细胞明显减少(P＜0.05);凝血酶组有较多的TUNEL阳性细胞及caspase-3 IR细胞表达,并明显多于对照组及水蛭素干预组(P＜0.05),凝血酶组TUNEL阳性细胞比率及caspase-3 IR细胞比率明显高于对照组及水蛭素干预组(P＜0.01或P＜0.05);与实验前相比,实验三组各组LDH活性均升高(P＜0.05),三组间两两比较LDH活性无统计学差异(P＞0.05).结论 150 U/ml的凝血酶可导致培养的神经细胞死亡,并可被凝血酶的特异抑制剂水蛭素阻断,细胞死亡的原因可能为细胞凋亡而非坏死,脑出血后凝血酶的释放是脑出血神经细胞凋亡性损伤的机制之一.     

人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞O_2~-和H_2_O_2损伤的保护作用

目的：研究人参皂甙对培养大鼠皮层神经细胞自由基损伤的保护作用。方法：应用O-2和H2O2对培养大鼠皮层神经细胞损伤模型。结果：与损伤组比较，人参皂甙保护组的乳酸脱氢酶（LDH）释放量显著减少（P<0．01）；而细胞存活率显著增高（P＜0．01）。结论：人参皂甙能保护培养大鼠皮层神经细胞少受自由基损伤。     

黄连解毒汤有效部位对一氧化氮诱导大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的:观察黄连解毒汤有效部位(HJDAF)对培养皮层神经细胞一氧化氮损伤的保护作用.方法:体外培养新生大鼠皮层神经细胞,加入硝普钠观察其对神经细胞的损伤及HJDAF的保护作用.结果:HJDAF(153 mg/kg)可减少受损细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;610,305,153 mg/kg可提高受损细胞的活性,减少丙二醛(MDA)生成(P<0.05;P<0.01);610 mg/kg可提高受损细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结论:HJDAF对培养神经细胞NO损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关.     

脑缺血损伤体外模型的建立及评价

目的建立一种符合脑缺血损伤的体外模型,并评价其可靠性。方法运用海马神经细胞原代培养技术,采用厌氧袋及糖剥夺法相结合建立体外脑缺血损伤模型。观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;化学比色法检测细胞质及细胞外液中乳酸脱氢酶（LDH）的活力,计算LDH的漏出率;流式细胞仪检测神经细胞的凋亡率。结果与正常组比较,当损伤在8h以内时,神经细胞活性、凋亡率及LDH的漏出率无显著性差别（P＞0.05）;当损伤在12h以上时,细胞形态损伤严重,细胞活性明显下降（P＜0.01）,细胞凋亡率及LDH漏出率显著上升（P＜0.01）。结论厌氧袋及糖剥夺相结合法能有效的建立脑缺血损伤体外模型,并具有良好的可靠性。     

神经钙调蛋白介导IL-1β引起的皮层神经元损伤

目的 探讨神经钙调蛋白介导IL-1β引起的皮层神经元损伤.方法 采用白细胞介素-1β（IL-β）诱导和NMDA诱导原代培养的胎鼠皮层神经元损伤;利用MTT法与LDH释放率测定及观察细胞生存力与损伤程度.结果 不同浓度的白细胞介素-1β与NMDA对原代培养的大鼠脑皮质神经损伤具有剂量依赖性;通过乳酸脱氢酶释放率表明,白细胞介素-1β与NMDA均能够诱导神经细胞损伤;白细胞介素-1β与NMDA处理的原代培养大鼠皮层神经元经所发生的细胞凋亡数量与坏死的细胞数量明显多于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 神经钙调蛋白参与介导IL-1β引起的神经细胞凋亡,是细胞凋亡信号通路中的重要分子.     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用

目的 :观察苯海索对血红素所致大鼠胚胎皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 :体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞 ,加入血红素建立神经细胞血红素损伤模型 ,以不加血红素者为正常对照 ,观察不同浓度苯海索对血红素损伤模型神经细胞死亡数 ,乳酸脱氢酶 (LDH)的漏出量 ,培养液中丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性的影响。结果 :苯海索 10 -9mol·L-1、10 -8mol·L-1、10 -7mol·L-1能浓度依赖性地显著减少细胞死亡 ,降低LDH漏出量及MDA生成 ,提高SOD活性。结论 :苯海索对血红素所致神经细胞损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与苯海索抗过氧化作用有关。     

玉米肽对微波辐射大鼠肝组织损伤的治疗作用

目的：探讨玉米肽对微波辐射引起动物肝细胞肝组织损伤的治疗作用。方法36只Wistar大鼠随机分为正常对照组、辐射模型组和辐射给药组,辐射模型组和辐射给药组大鼠给予100 mW/cm2的微波辐照6 min,辐射给药组辐射后给予600 mg/（ kg· d）玉米肽,连续7 d。7 d后处死大鼠,光学显微镜观察肝细胞形态学变化,检测大鼠血清中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷丙转氨酶（ALT）活性。结果与对照组比较,辐射模型组肝细胞体积增大,细胞核形态不规则,细胞水肿严重,细胞之间界限不明显,胞质淡染,肝血窦明显缩小或消失。血清LDH显著升高（ P＜0．05）, MDA和ALT含量升高极为显著（ P＜0．01）,SOD含量极显著下降（P＜0．01）。辐射给药组血清ALT含量显著升高（P＜0．05）。与辐射模型组比较,辐射给药组肝组织结构有明显恢复,肝细胞水肿明显减轻,细胞边界较清晰。血清ALT含量下降极为显著（P＜0．01）,SOD活性显著升高（P＜0．05）,LDH和MDA呈下降趋势。结论100 mW/cm2的微波辐照可引起大鼠肝组织损伤,玉米肽对微波辐射引起的肝组织损伤有一定的治疗效果。     

p38MAPK信号通路抑制剂对NMDA诱导的体外培养的皮层神经元损伤的保护作用及机制

目的 观察MK801及SB203580对N-甲基-D-天（门）冬氨酸（NMDA）诱导的皮层神经元损伤的影响, 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK)信号通路在神经元损伤中的作用和机制。方法 培养7d的新生SD大鼠皮层神经元随机分为对照组、NMDA损伤组、MK801干预组、SB203580干预组、联合干预组（SB203580+MK801）。MTT比色实验评价细胞生存力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度,吖啶橙/溴化乙锭 (AO/EB) 双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目,Western blotting检测大鼠皮层神经元各组p38MAPK、BCL-2和BAX表达情况。结果 与对照组比较,NMDA损伤组神经细胞存活力降低、培养上清液中LDH含量增加、凋亡细胞增多、p38MAPK和BAX表达增加(P均＜0.01),BCL-2表达降低(P＜0.05);与NMDA损伤组比较,各个干预组细胞生存力提高、LDH释放率降低、凋亡减少、p38MAPK及BAX的表达减少、BCL-2表达增多(P均＜0.01)。结论 MK801,SB203580对NMDA诱导的皮质神经元损伤具有保护作用,p38MAPK通路可能参与介导MK801的保护作用,其共同机制是通过抑制p38MAPK信号通路介导的凋亡相关蛋白实现的。     

普鲁卡因通过调控miR-138抑制OGD诱导的大鼠皮层神经元损伤

探讨普鲁卡因（PROC）对氧糖剥夺（OGD）诱导大鼠皮层神经元损伤的影响及可能机制。方法 体外培养大鼠皮层神经元,用不同剂量（0.00、3.50、7.00、14.00 mg/L）PROC干预大鼠皮层神经元24 h,建立OGD模型。CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测活化的半胱天冬酶（cleaved-caspase）3和cleaved-caspase9蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中miR-138表达。转染miR-138模拟物或抑制剂至大鼠皮层神经元细胞后,建立OGD模型,上述相同方法检测神经元损伤情况。结果 与对照组相比,OGD组存活率、miR-138表达降低,LDH释放率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达增加（均P＜0.05）。与OGD组比较,OGD+PROC-L组、OGD+PROC-M组和OGD+PROC-H组存活率、miR-138表达增加,LDH释放率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达降低（均P＜0.05）。过表达miR-138后,OGD诱导的大鼠皮层神经元存活率增加,LDH漏出率、凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达降低（均P＜0.05）。敲减miR-138可逆转PROC对OGD诱导大鼠皮层神经元损伤的影响。结论PROC可能通过上调miR-138,抑制OGD诱导的大鼠皮层神经元损伤     

心脑舒通胶囊对大鼠脑缺血再灌注后氧化损伤与细胞凋亡的影响

目的研究心脑舒通胶囊对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞的保护作用,并探讨其抗氧化作用。方法采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24h后断头取脑,HE染色,光镜下观察大鼠大脑皮层区细胞损伤程度,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡程度,分光光度计检测患侧脑组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果缺血再灌注模型组大鼠均出现明显的神经功能缺损症状,有明显缺血性形态学改变如细胞水肿等;皮层区凋亡细胞数增多,缺血侧脑组织的MDA增多、SOD活性降低,与假手术组比较均有显著性差异(P＜0.01)。心脑舒通胶囊能明显改善MCAO大鼠神经症状体征,减轻皮层区神经细胞水肿,降低细胞凋亡;并可显著提高SOD活性,降低MDA、LD、LDH的含量,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05～0.01)。结论心脑舒通胶囊有减轻缺血再灌注脑组织损伤程度、降低神经细胞凋亡的作用,其机制可能是通过调整氧化应激、提高自由基酶性清除能力,从而减轻脑损伤。     

通脑灵对原代培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

目的:研究缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤及通脑灵颗粒剂对其保护作用。方法:取体外原代培养8d的大鼠大脑皮层神经细胞,换以低糖无血清培养基,并置于95%N2和5%CO2的缺氧罐中5h造成神经细胞缺氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力;用乳酸脱氢酶(LDH)漏出量作为评价损伤的指标。结果:原代培养皮层神经细胞缺氧5h,再给氧24h后,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低,LDH释放量显著增加。通脑灵颗粒剂可显著对抗缺氧/缺糖对皮层神经细胞的损伤,剂量依赖地抑制LDH释放量的增加。结论:通脑灵颗粒剂对皮层神经细胞缺氧/缺糖损伤具有保护作用。     

救脑宁注射液对培养神经细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

为了探索“救脑宁”注射液对中风病的疗效机理 ,将原代培养 8～ 12d的新生大鼠皮层神经细胞进行缺氧缺糖处理 ,观察该药对缺氧缺糖损伤神经细胞的影响。结果表明 :缺氧缺糖组细胞上清液中丙二醛 (MDA)含量、乳酸脱氢酶 (LDH)活性较对照组显著升高 ,细胞超氧化物岐化酶 (SOD)活性和细胞生存率则显著降低 ,救脑宁组MDA、LDH显著低于缺氧缺糖组 ,而SOD活性及细胞生存率则高于缺氧缺糖组 (P <0 0 1)。因此 ,抗脂质过氧化损伤、提高神经细胞对缺氧缺糖的耐受性 ,可能是其疗效机理之一。     

米帕明对谷氨酸损伤中枢神经细胞的保护作用

目的研究米帕明(Imi)对谷氨酸损伤培养大鼠皮层神经细胞的保护作用.方法分离培养15～18 d胎龄的大鼠神经细胞,加入谷氨酸(Glu),观察谷氨酸对神经细胞的损伤作用及米帕明的保护作用.结果加入谷氨酸后,神经细胞出现明显损伤性变化,死亡率升高,培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量增加,细胞匀浆中丙二醛(MDA)生成增加,超氧化物歧化酶(SOD)含量明显减少.Imi能不同程度地减轻上述损伤性变化.结论 Imi对谷氨酸所致的神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关.     

低强度微波辐射对小鼠NK细胞活性的影响

目的观察低强度微波辐射对小鼠NK细胞活性的影响。方法小鼠脾细胞体外经不同强度微波直接辐射不同时间后,用LDH法测定小鼠NK细胞的活性,并用MTT法测定脾细胞的生长代谢。结果①4种不同强度的微波(0.05mW/cm     

丹参川芎嗪注射液对低糖低氧/复供损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的:通过建立新生大鼠的原代皮层神经元低糖低氧/复供损伤模型,探讨丹参川芎嗪注射液对缺血缺氧条件下神经细胞的保护作用.方法:选用新生大鼠的皮层神经元为研究对象,利用Na2S2O4与细胞共孵育造成神经细胞低糖低氧损伤,观察皮层神经元一般形态学及凋亡相关形态学的改变、检测神经元存活率、神经细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)活性、...     

黄连解毒汤对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤的保护作用

[目的]观察黄连解毒汤(huanglian-jian-du-tang,HJDT)对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤的保护作用.[方法]建立体外糖氧剥夺(oxygenglucose deprivation,OGD)和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型,分别给予不同浓度的HJDT,以四甲基偶氮唑盐(MTT)和乳酸脱氢酶(LDH)法观察HJDT对细胞损伤的保护作用.采用双侧颈总动脉阻断30min建立C57BL/6小鼠全脑缺血模型,术前7d开始灌服HJDT(1、2、4、8 g·kg-1)至术后3d,采用新奇事物探究实验检测小鼠学习记忆能力,采用Nissl染色检测海马神经元存活的情况.[结果]OGD 4 h复灌2h后,HJDT可显著增加PC12细胞活性,显著减少LDH释放(P＜0.01);谷氨酸处理24 h后,HJDT能显著增加PC12细胞活性,减少LDH释放(P＜0.05).HJDT(4 g·kg-1)能显著提高全脑缺血小鼠对新物体的分辨比,(2、4 g·kg-1)可显著提高小鼠海马CA1区的神经元密度.[结论]HJDT对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤具有保护作用.     

脑心通胶囊对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的 观察脑心通胶囊对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用.方法 建立体外培养大鼠脑微血管内皮细胞模拟脑缺血再灌注损伤模型,模拟脑缺血3 h,再灌注1,3,6,12,24,36,48,72 h后损伤内皮细胞的活性、死亡率变化以及脑心通胶囊的影响,测定体外培养大鼠脑微血管内皮细胞模拟脑缺血3 h,再灌注24 h时脑心通胶囊含药血清对细胞裂解液SOD活性、MDA及NO含量的影响.结果 体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞在模拟缺血再灌注损伤后,细胞内线粒体活力下降,死亡率升高,脑心通胶囊0.24,0.48 g&#183;kg-1能不同程度改善细胞损伤(P＜0.05,P＜0.01),明显提高裂解液中SOD活性(P＜0.05,P＜0.01),降低裂解液中MDA和NO含量(P＜0.05,P＜0.01),对大鼠脑微血管内皮细胞模拟脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用.结论 脑心通胶囊对体外培养大鼠脑微血管内皮细胞模拟脑缺血损伤有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关.     

硒对微波辐照致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨硒对微波致神经细胞损伤的保护作用.方法以离体培养的PC12细胞为研究对象,采用65 mW/cm2的微波照射20 min进行致伤,以细胞存活率、MDA含量、SOD和GSH-Px活性为实验指标反映Na2SeO3预处理对微波辐照致PC12细胞损伤的影响.结果微波辐照后PC12细胞存活率明显降低,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性降低,而经过Na2SeO3预处理后再接受微波辐照,以上指标的变化明显减轻,并且高剂量Na2SeO3预处理作用更明显.结论硒可以提高PC12细胞的抗氧化能力,保护神经细胞对抗微波辐射导致的细胞损伤.