激光捕获显微切割结合定量PCR检测NES1 mRNA在胃癌中的表达及其甲基化状态

目的:探讨正常上皮细胞特异性-1基因(NES1)在正常胃组织及胃癌组织中的表达和受甲基化调控的影响。方法:利用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术分离胃癌患者活检组织中的癌细胞和正常上皮细胞,采用荧光定量PCR检测其中NES1 mRNA的表达,甲基化特异性PCR观察NES1基因外显子3 CpG岛甲基化状态。结果:荧光定量PCR结果显示,NES1 mRNA在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃上皮细胞(P＜0．05)。甲基化特异性PCR检测胃癌组织癌细胞中NES1外显子3 CpG岛甲基化状态发现,大部分肿瘤患者NES1外显子3 CpG岛均存在不同程度甲基化,其中完全甲基化7例(33．3%),不完全甲基化12例(57．14%);而正常细胞中存在不完全甲基化仅为1例(5%),其余19例均不存在甲基化(95%)。结论:激光显微切割结合荧光定量PCR技术可较精确地检测NES1在胃癌组织细胞和正常组织细胞中的表达。NES1在胃癌中表达降低,其表达降低与NES1基因外显子3甲基化有关。     

核糖体蛋白基因在胃肠道肿瘤中的表达

目的 探讨核糖体蛋白(RP)基因在胃肠道肿瘤中的表达.方法 对NCBI网站中的基因表达系列分析(SAGE)数据库公布的80个癌和癌旁正常组织RP基因进行对比分析(包括结肠癌和胃癌)后,取胃癌、结肠癌标本各30例,通过逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对RP L13(RPL13)、RPL37、RPS2和RPS19基因的表达进行检测.结果 SAGE数据库分析表明: RPL13、RPL37、RPS19、RPS2和RPLP2在胃癌中表达比正常胃组织中表达平均分别高6.25、2.40、3.86、2.22和3.15倍,在结肠癌中的表达比正常结肠组织中表达平均分别高(3.22)、7.10、2.55、5.87和2.84倍;RT-PCR结果 显示胃癌和结肠癌组织中RPL13、RPL37、RPS2和RPS19 mRNA的表达均高于正常组织(P<0.05).结论 胃肠道肿瘤中存在着共同高表达RP基因,这些共同高表达RP基因可能与消化道肿瘤的发生、发展密切相关.     

AKT1基因多态性与中国人群脑膜瘤易感性关系

目的 研究AKT1基因多态性与脑膜瘤发病风险的关系.方法 选取2017年10月至2018年1月在北京天坛医院神经外科手术治疗的脑膜瘤患者200例和同期健康体检者200例血液标本并提取DNA,应用SNaPshot基因分型技术对AKT1基因多态位点rs1130214、rs2494746和rs2494752检测,分析AKT1...     

TIAM1与KAI1基因在胃癌组织中的表达研究

胃癌是常见的恶性肿瘤,在我国死亡率为25/10万,占恶性肿瘤第一位.作者采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)技术研究TIAM1基因与KAI1基因在胃癌组织中的表达,以分析其在胃癌发生发展中的意义.     

切除修复交叉互补基因1在胃癌中的研究进展

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,发病率和病死率居各种恶性肿瘤的第二位。由于早期胃癌无明显临床症状或症状不典型,多数患者确诊时已经是进展期胃癌（AGC）,甚至已经转移,这些患者即使行根治性胃癌切除术,术后复发仍然是一个严峻的问题,术后辅助化疗成为AGC综合治疗的一个重要部分。     

肿瘤抑制基因、磷酸化AKT、细胞周期素D1在肺鳞癌和腺癌中不同的表达及与临床病理因素的相关性

目的 探讨AKT信号转导通路中有关蛋白肿瘤抑制基因(PTEN)、磷酸化AKT(p-AKT)及细胞周期素D1(Cyclin D1)在原发性肺鳞癌和腺癌中不同的表达意义及与临床病理因素的相关性.方法 应用免疫组化的方法,检测原发性肺鳞癌44例、腺癌36例及35例非肿瘤性肺组织标本中PTEN、p-AKT、Cyclin D1的表达,并与临床病理因素进行相关性分析.结果 p-AKT、Cyclin D1在肺鳞癌和腺癌中总的阳性率分别为78.8%、76.3%,均显著高于非肿瘤性肺组织中阳性表达0%(均P＜0.05).PTEN在肺鳞癌和腺癌中总阳性率为47.5%,显著低于非肿瘤性肺组织中阳性表达94.3%(P＜0.05).PTEN、p-AKT、Cyclin D1在肺鳞癌和腺癌中的表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).PTEN表达与有无淋巴结转移和组织的高分化有关.p-AKT在高中分化腺癌中阳性表达显著高于低分化腺癌的表达.Cyclin D1表达与淋巴结转移、鳞癌的低分化有关.在肺鳞癌和腺癌中,p-AKT蛋白的表达均与Cyclin D1呈正相关.肺鳞癌中,PTEN表达与p-AKT、Cyclin D1呈负相关;肺腺癌中,PTEN表达与p-AKT、Cyclin D1均无相关关系.结论 在肺鳞癌和腺癌中均存在AKT及其通路的激活.PTEN的失活参与了肺鳞癌和腺癌的发生和发展.在肺鳞癌中,AKT的激活与PTEN的失活有关;在肺腺癌中,PTEN的失活可能不是AKT活化的主要原因.在肺鳞癌和腺癌中可能存在不同的AKT活化机制.     

Reprimo和hMLH1基因甲基化在胃癌早期诊断价值的研究

目的 探讨Reprimo和hMLH1基因启动子区甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值。方法 通过陕西省人民医院2013年9月～2014年4月收治的慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者50例、异型增生患者50例、胃癌患者50例,取内镜下胃活检组织,并取正常胃黏膜活检组织30例作为对照组,分析Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化表达情况,比较各组患者间的差异。结果 患者组的胃黏膜组织中Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化阳性率显著高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05)。Reprimo基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组28%(χ²=10.18,P＜0.05); 异型增生组56%(χ²=25.84,P＜0.05); 胃癌组62%(χ²=30.36,P＜0.05); hMLH1基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组20%(χ²=4.39,P＜0.05); 异型增生组44%(χ²=15.13,P＜0.05); 胃癌组48%(χ²=17.41,P＜0.05),检测的特异度高。结论 Reprimo和hMLH1基因甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值很高,特异度高,是一种有效的诊断方式,在患者的临床诊断方面拥有广阔的治疗前景。     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

肿瘤耐药基因和细胞凋亡基因在大肠癌中的表达及意义

目的 探讨肿瘤耐药基因、细胞凋亡基因在大肠癌中的表达及相关性在临床应用中的意义.方法 应用免疫组化方法(SP)检测P-糖蛋白(PgP)、谷胱苷肽转移酶-π(GSTπ)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(ToPoⅡ)、胸苷酸合成酶/5-FU(TS)、细胞凋亡基因(bcl-2)在144例大肠癌根治标本中的表达.结果 144例大肠癌中PgP、GSTπ、ToPoⅡ、TS、bcl-2的阳性率分别为66.7%(96/144)、56.9%(110/144)、76.4%(82/144)、44.4%(64/144)、38.9%(56/144).PgP、ToPoⅡ、TS的表达在不同性别、年龄、组织分型、侵犯深度、淋巴结转移、UIDD分期差异均无统计学意义(P均>0.05),GSTπ的表达在临床分期差异有统计学意义[Ⅰ、Ⅱ期的阳性率为72.9%(86/118),Ⅲ、Ⅳ期的阳性率为92.3%(24/26),χ2=4.458,P=0.035],bcl-2在大肠癌不同分化程度[中～高分化程度阳性率52.4%(44/84),低分化程度阳性率20.0%(12/60),χ2=15.442,P=0.001]、不同侵犯深度[浅肌层～深肌层阳性率55.6%(30/54),浆膜以外阳性率28.9%(26/90),χ2=10.099,P=0.001]的表达差异有统计学意义,bcl-2与PgP、GSTπ、ToPoⅡ呈正相关(r=0.374,0.340,0.221,P均<0.05).结论 PgP、GSTπ、ToPoⅡ、TS、bcl-2联合作用是大肠癌多药耐药性的主要作用机制之一,PgP、GSTπ、ToPoⅡ、TS、bcl-2可作为耐药的标志物,进行肿瘤耐药及细胞凋亡监测,对大肠癌患者化疗药物选择及判断预后,具有重要应用价值.     

人卵巢浆液性及黏液性交界性肿瘤中k-ras基因第12、13密码子突变分析

目的探讨k-ras基因在卵巢浆液性及黏液性交界性肿瘤发病过程中的作用。方法选用k-ras基因高频突变区引物1对，对53例卵巢肿瘤（包括15例浆液性典型交界瘤、7例浆液性微乳头型交界瘤、14例浆液性经典型癌、14例黏液性交界瘤、3例黏液性癌）用显微切割方法提取肿瘤细胞DNA，进行聚合酶链反应（PCR），直接测序分析PCR产物。结果在14例黏液性交界瘤中有3例检测到了k-ras基因突变，在黏液性癌及所有浆液性肿瘤中均未发现k-ras基因突变。结论k-ras基因突变在卵巢黏液性交界瘤的发生过程中可能有一定作用，在黏液性癌、浆液性交界瘤及经典型癌中的作用尚不明确。     

560例中国结直肠癌患者K-ras基因突变研究

目的探讨结直肠癌患者K-ras基因突变状态并为个体化治疗提供指导。方法采用嵌套和COLD-PCR的方法分析560例结直肠癌患者K-ras基因突变状态。结果 560例患者K-ras基因总体突变率27.08%,128例血浆标本突变率为0,432例组织标本突变率为27.08%。突变类型包括G12S、G12C、G12D、G12A、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L,2种不同K-ras基因突变率比较,差异有统计学意义(P0.000 1)。362例男性患者的突变率为20.44%,包括G12S、G12C、G12D、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L;198例女性患者的突变率为21.72%,包括G12S、G12C、G12D、G12A、G12V、G13R、G13D,不同性别间K-ras基因突变率比较,差异无统计学意义(P=0.722 7)。80例年轻患者的突变率为20%,包括G12S、G12C、G12D、G12V、G13D;127例中年患者的突变率为33.07%,包括G12S、G12D、G12A、G12V、G13R、G13C、G13D、Q61K、Q61L;353例老年患者的突变率为16.71%,包括G12C、G12D、G12V、G13R、G13D,不同年龄间K-ras基因突变率比较,差异有统计学意义(P=0.000 5)。结论 560例结直肠癌患者K-ras基因突变类型主要为G12D、G12V、G13D,K-ras基因突变在不同标本类型、不同年龄间存在差异,不同性别间无差异。     

毛细管电泳联合激光诱导荧光技术检测结直肠癌hMLH1基因突变

目的　建立毛细管电泳 (CE)联合激光诱导荧光检测 (LIF)技术 ,分析单链构象多态性 (SSCP) ,检测人结直肠癌hMLH1基因点突变的方法。方法　PCR扩增 4 2例散发性结直肠癌患者与 2 0例健康志愿者外周血基因组DNAhMLH1基因 12外显子 ,采用CE LIF进行SSCP分析 ,对异常片段进行测序鉴定 ;研究不同筛分介质 (线性聚丙烯酰胺LPA)浓度、分离温度与分离电压对CE行为的影响。结果　 4 2例患者中有 4例 (9.5 2 % )突变 ,CE测序证实为T115 1A的杂合子点突变 ;2 0例健康志愿者未发现突变。较高浓度的LPA(4 %～ 6 % ) ,2 0℃分离温度与 9kV分离电压有助于单链DNA峰分离。结论　调整适宜的LPA浓度、分离温度与分离电压可提高CE分析SSCP的效率 ,应用CE LIF技术SSCP分析检测hMLH1基因点突变快速、高效、重复性好 ,适合临床大样本筛查     

正常上皮细胞特异性-1基因在胃癌细胞株中的表达及甲基化调控

目的:研究正常上皮细胞特异性-1(NES1)基因表达及其CpG岛甲基化状况与胃癌的关系。方法:分别培养胃癌细胞MKN-28(高分化)、SGC-7901、AGS(均中分化)、MKN-45(低分化)、HGC-27(未分化)和原代正常胃上皮细胞。提取细胞RNA,经RT-PCR检测NES1在各细胞株中的表达。以不同浓度DNA去甲基化抑制剂5-aza-dc处理胃癌细胞,RT-PCR检测其NES1mRNA表达。提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后MSP分析其CpG岛甲基化状态。结果:各肿瘤细胞株中NES1mRNA表达较胃正常上皮细胞有不同程度降低。甲基化检测显示NES1表达减少的胃癌细胞株均存在不同程度的NES1基因外显子3CpG岛甲基化。NES1表达降低的胃癌细胞株经5-aza-d处理后NES1表达上调。结论:NES1胃癌细胞株中低表达,表达下调与该基因外显子3周围CpG岛甲基化有关。5-aza-dc可使NES1表达降低的胃癌细胞株重新表达NES1mRNA。提示NES1基因CpG岛甲基化可能是NES1在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制。     

新发现的Livin基因在结直肠癌组织中mRNA表达及其临床意义

目的 研究Livin基因在结直肠癌组织表达及其意义。方法 采用逆转录聚合酶链式扩增反应对30例结直肠癌组织、30例癌旁正常组织及10例正常成人大肠组织中Livin mRNA的表达进行检测。结果 10例正常成人大肠组织中Livin基因均无表达。结直肠癌及癌旁正常组织Livin基因表达阳性率均为100％，但癌旁正常组织Livin基因表达量较癌组织表达量明显下降，（P〈0．05），Livin基因表达量与患者的年龄、性别、肿瘤的分期、分级差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 Lvin基因表达升高与结直肠癌密切相关。可能参与结直肠癌的发生。     

结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及其临床意义

目的:探讨结直肠腺癌BRAF基因突变的检测及临床意义。方法:采用PCR直接测序法检测结直肠腺癌患者石蜡包埋肿瘤组织中BRAF基因突变情况,分析BRAF基因突变与患者性别、年龄、组织学分级及临床分期的相关性。结果:17例BRAF基因突变结直肠腺癌病例中,16例为15外显子突变,1例为11外显子突变。16例中,突变位于15外显子第600位密码子14例,包括第1 799位碱基T突变为A(Val600Glu,V600E)13例(92.9%),第1 799、1 800位碱基T、G突变为A、A(Val600Glu,V600E)1例;突变位于15外显子第594位密码子2例,均为第1 780位碱基G突变为A(Asp594Asn,D594N)。1例11外显子突变位于第468位密码子,第1 403位碱基G突变为C(Gly468Va,G468V)。BRAF基因突变与患者性别、年龄无相关性;组织学分级为Ⅲ级的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ级(P=0.029);临床分期为Ⅳ期的BRAF基因突变患者数多于Ⅱ期、Ⅲ期(P=0.011)。结论:BRAF基因突变与结直肠腺癌组织学分级和临床分期相关,随着组织学分级和临床分期的增加,BRAF基因突变率升高。     

宁夏地区回族女性散发性乳腺癌易感基因BRCA1/BRCA2突变的研究

摘要：目的：研究宁夏地区回族女性散发性乳腺癌中BRCA1/BRCA2基因 (breast cancer susceptibility gene 1/2)的突变位点及携带情况。 方法：收集60例回族居民乳腺癌石蜡包埋组织标本及15例乳腺小叶增生或纤维腺瘤标本。PCR和DNA直接测序法检测BRCA1基因第2、11和20号外显子和BRCA2基因第11号部分外显子突变情况。 结果：60例乳腺癌BRCA1基因有10例突变,突变率为16.7%,突变位点均位于BRCA1基因。15例对照均未检出突变且淋巴结转移与未转移组间BRCA1基因突变率差异（30.8%与5.9%）有统计学意义（P＜0.05）。 结论：BRCA1基因突变可能与宁夏回族女性乳腺癌发生相关。     

AKTl基因沉默抑制Hep-2细胞体外侵袭能力的研究

目的研究AKTl基因沉默对人喉癌细胞系Hep-2体外侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体将AKTlsiRNA转染Hep-2细胞,RT-PCR和Westernblot分析各组细胞AKTl,MMP-2mRNA和蛋白表达,划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室细胞测定细胞侵袭能力。结果AKTlsiRNA可抑制AKTlmRNA转录和蛋白表达水平;AKTl基因沉默后细胞迁移运动能力明显减弱,穿模细胞数明显减少（P〈0．01）;MMP-2mRNA和蛋白表达下调。结论AKTlsiRNA可通过下调MMP-2表达抑制Hep-2细胞体外侵袭能力。     

长链非编码RNA DBH-AS1通过下调AKT1表达抑制胰腺癌进展

目的与背景 本研究旨在检测长链非编码RNA DBH-AS1在胰腺癌中的表达情况,探讨DBH-AS1在胰腺癌进展中的潜在分子作用。方法 采用实时定量PCR检测基因表达。细胞增殖、成克隆生长和迁移侵袭能力分别通过CCK-8、克隆形成和transwell检测。蛋白质水平用免疫印迹法测定。结果GEPIA数据库和定量PCR结果证实,DBH-AS1在胰腺癌组织中表达下调,与癌旁正常胰腺组织相比差异均有统计学意义(P 均＜0.05)。在胰腺癌肿瘤组织中DBH-AS1的低表达与肿瘤分化差、TNM分期晚期、淋巴结转移、以及预后不良(无瘤生存时间和总体生存时间)有关(P均＜0.05)。DBH-AS1基因敲除可促进胰腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,与对照组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05)。机制研究表明,在胰腺癌中DBH-AS1通过下调AKT1表达抑制mTOR信号通路。结论DBH-AS1通过降低AKT1的表达抑制胰腺癌的进展。