"益坤宁"对自然老化大鼠性激素的调节及卵巢修复的研究

目的:研究中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢功能和结构的影响.方法:选用11～13月龄雌性围绝经期wistar大鼠32只.随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组.另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,采用血清性激素分泌水平、血管内皮生长因子(VEGF)、颗粒细胞调亡及细胞形态等指标来观察益坤宁对卵巢结构和功能的影响.结果:益坤宁组与模型组比较,各项指标差异均有显著性或极显著性(P<0.05或P<0.01).结论:研究证实益坤宁可升高围绝经期大鼠血清E2、P水平,降低血清FSH、LH水平;对围绝经期大鼠卵巢VEGF有促进作用;对卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用,提示益坤宁可以阻止卵泡闭锁,从而达到预防和延缓卵巢衰老的作用机制.     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的调节作用和血清雌二醇水平的影响

目的：观察中药益坤宁方对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶（AromatasecytochromeP450,P#50arom）的调节作用。方法：建立自然衰老的大鼠模型,将模型分为青年对照组、模型组、益坤宁组和西药对照组4组,益坤宁组和西药对照组分别给予中药益坤宁汤剂和西药利维爱混悬液治疗。4周后,采用免疫组织化学及WesternBlot方法检测大鼠卵巢P450arom蛋白表达情况;采用放射免疫法测定大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平。结果：P450arom蛋白在益坤宁组大鼠卵巢上均多呈阳性表达,与模型组比较均具有显著性差异（P〈0．01）;与西药对照组比较差异不具有统计学意义（P〉0．05）。益坤宁组大鼠空腹血清雌二醇（E2）水平升高,与模型组比较差异显著（P〈0．01）,与西药对照组比较差异不具统计学意义（P〉0．05）,但其E2水平仍然低于青年对照组,差异具有显著性（P〈0．05）。结论：中药益坤宁可促进围绝经期大鼠卵巢P450arom蛋白的表达。中药益坤宁可提高大鼠血清雌二醇（E2）的水平。中药益坤宁可通过促进卵巢P450arom的表达而利于雌激素的生成。     

中药益坤宁方调节围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶mRNA的实验研究

目的：探讨细胞色素P450芳香化酶（aromatase cytochrome P450,P450arom）mRNA在围绝经期自然老化大鼠卵巢上的表达及意义。方法：选用11-13月龄雌性围绝经期Wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,用原位杂交方法检测大鼠卵巢上的P450arom mRNA的表达。结果：P450arom mRNA在模型组卵巢上呈阴性或弱阳性表达,在青年组呈强阳性表达,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。而在益坤宁组及西药对照组均呈阳性表达,与模型组比较差异均具有统计学意义（P〈0.01）。结论：中药益坤宁可促进大鼠卵巢P450arom mRNA的表达,有利于雌激素的合成。     

中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:采用自然老化法建立围绝经期大鼠模型。选择处于围绝经期的雌性Wistar大鼠(12~14月龄)30只,随机分为老年对照组、西药对照组和中药实验组,分别以生理盐水、利维爱和益坤宁灌胃4周;另取5月龄大鼠10只作为青年对照组,生理盐水灌胃4周。通过免疫组化观察大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达确切部位;Western Blot定量检测大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达;RT-PCR检测各组大鼠卵巢VEGF mRNA的表达。结果:VEGF蛋白主要表达于卵巢的黄体细胞中,老年对照组大鼠卵巢的VEGF表达明显高于青年组,中药实验组大鼠卵巢VEGF表达明显下降;青年对照组、中药实验组和西药对照组VEGF164和VEGF120的mRNA表达量均低于老年对照组(P&lt;0.05),此结果与VEGF蛋白表达的结果相一致。结论:益坤宁能够下调围绝经期大鼠卵巢VEGF mRNA及蛋白的表达,这可能是其治疗围绝经期综合征的机制之一。     

"坤宁安"对围绝经期大鼠卵巢功能的影响

目的:研究中药坤宁安对卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:选用13～16月龄雌性wistar大鼠,经阴道脱落细胞涂片检查,呈现出无动情周期确定为围绝经期鼠.随机将其分为模型组、坤宁安高、低剂量组、西药对照组、中药对照组.另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,观察坤宁安对caspase-3在卵巢颗粒细胞表达的影响.结果:Casepase-3蛋白在坤宁安高、低剂量组均呈弱表达,与围绝经期组相比,差异分别呈极显著性和显著性(P＜0.01;P＜0.05).结论:本研究在以往实验基础上进一步证实坤宁安对卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用,证实在人卵巢颗粒细胞中也有Caspase-3的蛋白表达,从而为卵巢颗粒细胞凋亡的细胞内机制与Caspase凋亡途径有关提供了证明.     

大豆异黄酮对围绝经期大鼠卵巢FSHR表达的影响

目的：观察大豆异黄酮（SI）对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体（FSHR）表达的影响,初步探讨大豆异黄酮作用于卵巢的分子机制。方法：采用自然老化法建立围绝经期大鼠动物模型,分别给予低剂量（50mg/kg）、中剂量（158mg/kg）、高剂量（500mg/kg）的SI灌胃处理8周。采用放射免疫分析法（RIA）检测血清FSH水平,RT-PCR检测卵巢组织中FSHRmRNA的表达。结果：与青年对照组相比,围绝经期模型组大鼠血清FSH水平有所升高（P〈0.05）,卵巢FSHRmRNA表达显著降低（P〈0.01）。与模型组相比,各SI组血清FSH水平的降低无统计学意义（P〉0.05）,卵巢FSHRmRNA的表达量则显著升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论：一定剂量的大豆异黄酮虽不能降低围绝经期大鼠血清FSH水平,但可明显上调衰老卵巢FSHRmRNA的表达。     

淫羊藿总黄酮和薯蓣皂苷元联合用药对自然围绝经期大鼠影响的实验研究

目的:观察中药有效组分淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元对围绝经期大鼠内分泌激素水平、卵巢病变等影响。方法:自然衰老围绝经期雌性SD大鼠30只,随机分为3组,各10只,分别是中药低、高剂量组,老年模型组,另设6月龄左右雌性SD大鼠10只为青年对照组。中药组给予中药复方有效成分8周,观察阴道涂片变化,检测大鼠血清雌二醇(E_2)、促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)值,免疫蛋白印迹法检测卵巢凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量变化。结果:与老年模型组比较,青年对照组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2水平明显较高,LH、FSH、Caspase-3、VEGF的水平明显较低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);中药高剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2、VEGF水平明显升高,Caspase-3的水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);中药低剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论:淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元合用能升高血清E_2和卵巢VEGF水平,降低卵巢Caspase-3的表达,从而延缓大鼠围绝经期的进程。     

益肾助孕颗粒对围绝经期大鼠卵巢VEGF表达的影响

目的:观察中药益肾助孕颗粒对围绝经期大鼠卵巢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:通过自然老化法构建围绝经期大鼠模型,选择处于围绝经期的大鼠(12 ～ 14月龄)40只,随机分为老年大鼠对照组、益肾助孕颗粒高、中、低剂量组.每组10只,分别用生理盐水2 mL灌胃、益肾助孕颗粒按等效剂量高剂量10 g·kg-1 ·d-1,中剂量5 g·kg-1 ·d-1,低剂量为2.5 g·kg-1 ·d-1,灌胃0.2 mL·g-1·d-1灌胃4周;另取5月龄大鼠10只作为青年大鼠对照组,生理盐水2 mL灌胃4周.免疫印迹法定量检测各组大鼠卵巢VEGF蛋白质的表达;RT-PCR检测各组大鼠卵巢VEGF mRNA的表达.结果:治疗前,与青年大鼠组VEGF蛋白、VEGF mRNA比较,老年对照组和研究组大鼠卵巢的VEGF蛋白、VEGF mRNA都表达明显高于青年组,差异显著,有统计学意义(P＜0.05),用药4周后,与老年对照组大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA表达比,研究组大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA表达明显下降,差异显著,有统计学意义(P＜0.05),并存在剂量依赖性.结论:益肾助孕颗粒能够下调围绝经期大鼠卵巢VEGF蛋白、VEGF mRNA的表达,可能通过调节VEGF治疗围绝经期综合征.     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的从细胞凋亡角度研究针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法将围绝经期大鼠随机分为围绝经期组、针刺组和药物组,并设青年对照组。围绝经期组大鼠不治疗,作为空白对照;针刺组大鼠针刺肾俞、足三里、三阴交治疗;药物组大鼠采用更年安药物治疗;青年对照组大鼠不治疗。应用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达,并进行图像分析。结果与青年对照组比较,围绝经期组大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。结论针刺能够下调围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达。     

葛根对15月龄雌性大鼠子宫、卵巢及卵巢颗粒细胞中雌激素表达的影响

目的：研究葛根对15月龄雌性大鼠子宫、卵巢的影响及卵巢颗粒细胞中雌激素变化。方法：选用雌性wistar大鼠50只，月龄15个月，体重240～380g。随机分为围绝经期组、葛根高剂量组（4倍于低剂量）、葛根低剂量组、西药对照组（尼尔雌醇）、中药对照组（更年康组）。每组10只。另选10只月龄5个月，体重180～200g雌性wistar大鼠作为青年对照组。各组给药4周后，处死，剥离子宫称重。用免疫组化的方法测卵巢颗粒细胞中雌激素的表达及用HE染色的方法观察卵巢形态学的变化。结果：显示葛根能增加围绝经期雌性大鼠子宫重量及卵巢颗粒细泡中雌激素的分泌和改变卵巢形态的作用。结论：葛根具有类雌激素样作用，为开发治疗绝经期综合征的新药提供实验依据。     

补肾活血、泻下及开窍活血方药对老龄大鼠脑缺血再灌注肝脏损伤的保护作用

将老龄大鼠分为老龄对照组,老龄模型组,尼莫地平组,益元活血丹大小剂量组,大黄组和血栓心脉宁组,观察大鼠全脑缺血30min,再灌注60min后肝脏形态和组织中TXB2,6-Keto-PGF1a,TNF含量,ATP酶活性及组织和血清中ALT活性的变化。结果表明：老龄模型组肝脏出现明显的病理和功能损伤,用药各组肝脏组织和功能损害具有不同程度减轻。     

逆灸“关元”穴对大鼠更年期血浆、子宫一氧化氮合酶的影响

目的:通过生物化学途径观察逆灸对大鼠更年期机体的影响。方法:选用SD雌性大鼠80只,其中4月龄10只,为年轻正常组;10月龄70只,根据阴道细胞涂片按动情周期随机分为7组,每组10只。这7组分别为逆灸12月龄组、逆灸14月龄组、逆灸16月龄组、12月龄对照组、14月龄对照组、16月龄对照组及10月龄对照组。逆灸组在10月龄时预以艾炷灸“关元”穴,每次1壮,每周2次,共灸8周。分别于12、14、16月龄时与同月龄对照组及年轻正常组、10月龄对照组一起取血浆、子宫,以硝酸还原酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:①大鼠更年期血浆NOS活性的变化及逆灸“关元”穴对其影响:对照各组与年轻正常组比较,14月龄组NOS活性明显下降,P<0.01;逆灸各组与年轻正常组比较无显著性差异,P>0.05;逆灸14月龄组比同月龄对照组NOS活性增加,P<0.05。②大鼠更年期子宫NOS的变化及逆灸“关元”穴对其影响:对照各组与年轻正常组比较,14、16月龄组NOS活性明显降低,有非常显著性差异,P<0.01;逆灸各组与年轻正常组比较,14、16月龄组NOS活性降低,有显著性差异,P<0.05;逆灸16月龄组比16月龄对照组NOS明显升高,P<0.05。结论:逆灸能升高更年期大鼠血浆及子宫中NOS活性,其早期类似于预处理效应,中后期表现为明显的调节效应,类似预适应的延迟效应,体现了逆灸“关元”穴的保健作用。     

交通心肾法对老龄雌性大鼠性激素水平的影响

目的：探讨交通心肾法中药对老龄雌性大鼠性激素水平的影响。方法选用15月龄雌性SD大鼠,将其分为空白组、中药治疗组、西药对照组和中药对照组,分别给予生理盐水、宁更丹、戊酸雌二醇和更年安灌胃,另选3月龄大鼠作为青年对照组。采用放射免疫法检测大鼠促卵泡刺激素（ follicle stimulating hormone,FSH）、促黄体生成素（ luteinizing hormone,LH）、雌二醇（ estradiol, E2）。结果与空白组比较,中药治疗组雌激素明显升高,有显著性差异（P〈0．05）,且与西药对照组结果类似。中药对照组雌激素水平略有升高,但与空白组相比无显著性差异。中药治疗组、西药对照组、中药对照组FSH均有降低,与空白组均有显著性差异（P〈0．05）,但是西药对照组下降更为显著。结论交通心肾法可以升高老龄雌性大鼠雌激素,降低FSH水平,可能是其治疗更年期综合征的作用机制之一。     

调坤汤性激素样作用的实验研究

目的：探讨调坤汤对雌二醇（E2）、孕酮（P）等性激素调节的机理。方法：用同龄SD雌性大白鼠30只，随机分为空白对照组、高剂量给药组、低剂量给药组，每组10只，空白对照组不用任何药物，高剂量给药组每天给调坤汤煎液3ml含原生药9g，低剂量给药组每天给调坤汤煎液稀释液3ml含原生药6g，共给药10天（约2个生理周期），用药结束后采血样测性激素。结果：经检验，高剂量给药组、低剂量给药组的E2和P与空白对照组比较差异有显著性（P〈0．05、P〈0．01）。结论：调坤汤有升高血清E2和P的作用。     

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的：通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法：取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果：治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。     

祛异康对子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL-2、IL-6的影响

目的:观察中药祛异康对子宫内膜异位症大鼠腹腔液IL-2、IL-6的影响,探讨其治疗子宫内膜异位症的机理。方法:将40只健康雌性SD大鼠随机分为4组:A组只行开关腹,B、C、D组均行内膜移植,造模完成后,A、B组以生理盐水灌胃,C、D组分别给予中药祛异康、西药丹那唑灌胃,4周后开腹收集腹腔液测定IL-2I、L-6表达水平。结果:祛异康可以降低异位症大鼠腹腔液中IL-2及IL-6浓度(P<0.05;P<0.01)。结论:祛异康能明显改善腹腔微环境,其治疗子宫内膜异位症的作用机理可能是通过改变腹腔液微环境,降低细胞因子IL-2、IL-6的水平,从而抑制异位内膜生长来实现的。     

仙灵骨葆对去卵巢大鼠骨质疏松症模型预防效果的研究

目的:研究仙灵骨葆胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症模型的预防作用。方法:36只SD雌性大鼠随机分为3组:正常组10只、OVX(去卵巢)组10只、预防组16只。正常组行假手术,其余两组做卵巢切除术。术后开始对预防组进行为期12周的灌胃,喂药结束后,对各组大鼠的L4椎体和股骨干骺端的骨密度进行检测,并处死半数正常组、OVX组及预防组,采集血液标本,检测钙、磷、碱性磷酸酶、雌激素I、L-6、骨钙素等指标,另外剔取L4椎体和股骨标本做骨切片苏木精-伊红染色观察骨微结构。余半数各组大鼠再饲养4周,在2周时经眼球采血检测血液标本,在4周时重复骨密度测试、血液检测和骨切片苏木精-伊红染色。结果:OVX组于12周时各项检测指标均低于正常组(P<0.05),骨微结构也可见骨小梁较正常组纤细、稀疏,并可见骨小梁粗细不均和多量断点;预防组在12周时,骨密度、钙、雌激素I、L-6、骨钙素指标与OVX组相比差异有统计学意义(P<0.05),骨微结构可见骨小梁粗壮、致密,骨小梁较均匀一致,与正常组结构相似。预防组在停药4周后股骨骨密度仍高于OVX组(P<0.05),部分骨代谢分子指标同OVX组相比差异有统计学意义(P<0.05);预防组骨微结构在停药后变化较缓慢,在停药4周后仍与同期正常组类似。结论:仙灵骨葆胶囊预防性用药可收到确切的效果,在分子代谢水平、骨密度及骨结构等诸多方面产生效应,有效阻止绝经后高转换型骨质疏松症的发生;在停药后药物作用可延续一段时间,骨结构和强度得以维持。     

益妇宁软胶囊对去势大鼠血清性激素、自由基及NO水平的影响

目的：通过观察去势大鼠血清性激素、NO、NOS、SOD、MDA水平变化，探讨绝经后心血管疾病发生机制及中药复方益妇宁软胶囊对上述指标的影响。方法：5O只SD雌性大鼠随机分为5组：假手术组、去卵巢对照组、己烯雌酚片组、益妇宁大、小剂量组。给药4周后测定血清E2、P、NO、NOS、SOD、MDA水平。结果：大鼠去势后随着血清Ez浓度的下降，NO、NOS、SOD水平也下降，MDA水平升高，E2与其它指标有相关性；益妇宁软胶囊能调节血清性激素，明显改善上述指标。结论：绝经后心血管疾病发生可能由于血清雌激素的减少，NO减少和自由基损伤途径发病；益妇宁软胶囊可以通过改善上述指标，防治绝经后心血管疾病的发生。     

哮喘宁颗粒剂对哮喘大鼠糖皮质激素受体的影响

目的观察哮喘大鼠肺组织中糖皮质激素受体(GCR)、血清皮质醇的变化情况以及哮喘宁颗粒剂对其的影响,从而探讨调肝理肺法治疗哮喘的疗效机制.方法采用放射配基结合试验法测定各组大鼠肺组织中GCR的含量,用放射免疫法测定血清中内源性皮质醇的含量,将结果子以比较分析.结果哮喘模型组大鼠肺组织GCR最大结合容量和血清内源性皮质醇含量显著降低(P＜0.05),经哮喘宁颗粒剂治疗后,GCR最大结合容量和内源性皮质醇含量均明显上调(P＜0.05),与正常组无显著性差异.通过对照实验表明,哮喘宁颗粒剂对GCR和内源性皮质醇的良性调节作用与阳性对照药补肾防喘片相似.结论哮喘宁颗粒剂能够上调哮喘大鼠肺组织GCR和血清皮质醇水平,调肝理肺法治疗哮喘的疗效机理可能与此有关.