丹参酮ⅡA诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨丹参酮ⅡA（TanshinoneⅡA，TanⅡA）对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的抑制作用及其Bcl-2和Bax表达的影响。方法 以不同浓度的TanⅡA处理体外培养的PC-3细胞，甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制情况；应用光镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡比例；免疫细胞化学检测细胞Bcl-2和Bax的表达。结果 经TanAⅡ处理后，PC-3细胞的增殖明显被抑制，并呈时间一剂量依赖性。TanⅡA处理72h后，细胞凋亡比例明显增加，Bcl-2表达下调，Bax表达上调。结论 TanⅡA对PC-3细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用，其分子机理可能与TanⅡA下调Bel-2表达和上调Bax表达有关。     

白藜芦醇抑制人卵巢癌细胞株A2780细胞增殖及凋亡诱导作用

目的 探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞株A2780的生长抑制及凋亡诱导作用.方法 50、100及200 μmol/L RES分别作用12～72h后,MTT比色法检测细胞生长活性,末端TdT酶标记技术检测细胞凋亡.结果 RES能显著抑制卵巢癌细胞株A2780的体外生长,呈时间与剂量依赖性;部分细胞出现凋亡形态学改变,RES能明显诱导卵巢癌细胞A2780凋亡,且呈时间与剂量依赖性.结论 RES通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,能显著地抑制卵巢癌细胞的体外生长.     

自藜芦醇抑制人卵巢癌细胞株A2780细胞增殖及凋亡诱导作用

目的探讨白藜芦醇对卵巢癌细胞株A2780的生长抑制及凋亡诱导作用。方法50、100及200μmol／LRES分别作用12～72h后，MTT比色法检测细胞生长活性，末端TdT酶标记技术检测细胞凋亡。结果RES能显著抑制卵巢癌细胞株A2780的体外生长，呈时间与剂量依赖性；部分细胞出现凋亡形态学改变，RES能明显诱导卵巢癌细胞A2780凋亡，且呈时间与剂量依赖性。结论RES通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制，能显著地抑制卵巢癌细胞的体外生长。     

丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡

目的:探讨丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人鼻咽癌CNE作用及其可能作用机制.方法:通过细胞形态学观察、生长曲线绘制、MTT检测以及克隆实验观察TanⅡA对CNE细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察TanⅡA对CNE细胞凋亡的影响;采用荧光分光光度计检测TanⅡA对CNE细胞细胞内钙及线粒体膜电位的影响;RT-PCR检测TanⅡA对CNE细胞Bad,MT-1A mRNA表达的影响.结果:TanⅡA能抑制CNE细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用CNE细胞24,48,72 h的IC5o分别为45.7,24.8,3.3 mg· L-1.TanⅡA作用CNE细胞24h后,CNE细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,CNE细胞凋亡百分率逐渐增大.TanⅡA作用后,CNE细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达上调.结论:TanⅡA具有抗CNE作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达上调有关.     

丹参酮ⅡA抗人胃癌MGC-803细胞作用

 目的 探讨丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）抗人胃癌MGC-803作用及其可能作用机制。方法 通过细胞形态学观察、生长曲线绘制和克隆实验观察Tan ⅡA对MGC-803细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察Tan ⅡA对MGC-803细胞凋亡的影响;采用荧光分光光度计检测Tan ⅡA对MGC-803细胞细胞内钙（[Ca2+]_i）及线粒体膜电位的影响;RT-PCR检测Tan ⅡA对MGC-803细胞Bad和金属硫蛋白-1A（MT）-1A mRNA表达的影响。结果 Tan ⅡA能抑制MGC-803细胞增殖,且随Tan ⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强。Tan ⅡA作用MGC-803细胞24 h后,MGC-803细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随Tan ⅡA剂量的增加,MGC-803细胞凋亡百分率逐渐增大。Tan ⅡA作用后,MGC-803细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 Tan ⅡA具有诱导MGC-803细胞凋亡作用,可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。     

姜黄素与博来霉素联用对A549细胞增殖抑制及细胞周期和凋亡的影响

目的:研究姜黄素和博来霉素联合应用对人肺泡Ⅱ型样细胞A549细胞增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素抗博来霉素诱导的肺纤维化机制。方法:采用MTT法观察姜黄素和博来霉素对A549细胞的增殖抑制作用,并用流式检测细胞周期分布,凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果:姜黄素及博来霉素能抑制A549细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性。姜黄素(Cur)浓度为60μmol/L与博来霉素(BLM)2、4、6、8μg/mL联合24h的抑制率显著高于单用博来霉素组;姜黄素可引起体外培养的A549细胞G0/G1期阻滞;而且对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。单用博来霉素刺激细胞,培养24h和48h,对细胞周期各个时期的影响没有统计学意义;姜黄素联合博来霉素诱导A549细胞凋亡,细胞核变的不规则皱缩,可见凋亡小体。结论:姜黄素联合博来霉素在体外对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,对细胞周期G0/G1期有显著阻滞作用,并可改变细胞凋亡;姜黄素和博来霉素联合应用可能通过改变肺泡上皮细胞细胞周期分布,并通过影响肺泡细胞凋亡从而起到抑制博来霉素治疗过程中肺纤维化的发生发展。     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对HL-60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮ⅡA对造血细胞的作用机理.方法:以HL-60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡA 对HL-60,K562细胞的作用,利用PCR-TRAP方法检测TanⅡA处理前后HL-60,K562细胞端粒酶活性的改变.结果:经0.5 μg·mL-1 TanⅡA 作用6 d后,HL-60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为75.6%和56.3%.经丹参酮诱导后,HL-60 ,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL-60及K562细胞的c-myc ,bcl-2基因表达,上调c-fos基因表达.HL-60,K562细胞在TanⅡA作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为30.8%,50.8%.结论:TanⅡA可明显抑制HL-60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡.     

白藜芦醇对人卵巢癌细胞株A2780凋亡及bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：研究白藜芦醇对卵巢癌细胞株A2780的凋亡诱导作用,并探讨其对凋亡相关基因Bax和bcl-2表达的影响。方法：50、100及200μmol／LRES分别作用12～72h后,末端TdT酶标记技术检测细胞凋亡：免疫组化法检测凋亡控制蛋白的表达。结果：RES能明显诱导卵巢癌细胞A2780凋亡。且呈时间与剂量依赖性;随着RES浓度的增加,Bax基因的表达增加而bcl-2的表达减少。结论：可诱导卵巢癌细胞A2780发生凋亡,bcl-2蛋白的减少与bax蛋白表达增多可能是RES诱导卵巢癌细胞A2780凋亡的机制之一。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

丹参酮ⅡA抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa侵袭与诱导凋亡的研究

目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对宫颈癌鳞癌细胞SiHa细胞侵袭的抑制作用及诱发细胞发生凋亡情况,探讨其可能作用机制。方法常规体外培养人宫颈鳞癌癌细胞系SiHa,加入0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L浓度的TanⅡA,继续培养24 h。通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT试验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测TanⅡA对细胞迁移能力的影响,用Transwell小室法检测TanⅡA对SiHa细胞侵袭的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察SiHa细胞凋亡变化。Western blotting法检测MMP-2、NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞形态学观察显示,不同浓度TanⅡA均可导致细胞形态学发生改变;MTT试验表明,TanⅡA对SiHa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P0.05,P0.01);划痕实验结果显示,随TanⅡA药物浓度的增加,SiHa细胞迁移能力下降(P0.01);Transwell小室实验显示,TanⅡA对SiHa细胞体外的侵袭力具有很强的抑制作用;Western blotting结果表明,TanⅡA给药能够抑制SiHa细胞MMP-2蛋白的表达与NF-κB p65的激活(P0.01)。结论 TanⅡA能够抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa细胞侵袭与诱导凋亡,其机制可能与抑制NF-κB蛋白的激活下调MMP-2的表达有关。     

加味当归补血汤含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的:探讨加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响.方法:应用加味当归补血汤灌胃荷瘤Wistar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、调亡.结果:加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2/M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡.结论:加味当归补血汤含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2/M期和诱导细胞凋亡而实现.     

丹参酮ⅡA和丹酚酸B不同配比对HL-60细胞生长抑制及诱导凋亡的研究

目的:观察不同配比的丹参酮ⅡA(TanⅡA)和丹酚酸B(SalB)对HL-60细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:通过MTT法及流式细胞技术,以生长抑制率和细胞调亡率为指标,研究不同配比的TanⅡA和SalB对HL-60细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。结果:TanⅡA与SalB合用组对HL-60细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均较单用组高,且以TanⅡA-SalB(10-5μg/ml)组为最高(P<0.05)。结论:TanⅡA和SalB对HL-60细胞均有明显的抑制及诱导凋亡作用,两者配比使用均比单用其一效果显著,且不同配比的效果不同。     

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。     

广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分对A2780细胞抑制作用的研究

目的探讨广西尖吻蝮蛇毒小分子多肽组分(K组分)对人卵巢癌细胞株A2780的增殖抑制作用以及作用机制。方法采用MTT法检测K组分对癌细胞株的生长抑制情况;黏附实验观察K组分抗细胞黏附作用;采用AO-EB双荧光染色和流式细胞术检测凋亡的发生。结果 K组分对人卵巢癌细胞株A2780的增殖有抑制作用并呈明显的时-效及量-效关系,能够对抗细胞和FN的黏附。AO-EB双荧光染色和流式细胞术都检测到细胞凋亡。结论 K组分对体外培养的人卵巢癌细胞株A2780的增殖有显著的抑制作用,作用机制可能与抗细胞黏附,诱导细胞凋亡有关。     

当归补血口服液含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的：探讨当归补血口服液荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响。方法：应用当归补血口服液灌胃荷瘤WiStar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、凋亡。结果：当归补血口服液荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量、时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2／M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡。结论：当归补血口服液含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2／M期和诱导细胞凋亡而实现。     

七叶皂苷对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用

目的 研究七叶皂苷(aescine)对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用,及对细胞周期分布和细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法观察药物对A549的增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin-FITC/PI双标记检测细胞凋亡.结果 七叶皂苷能明显抑制A549的生长,且呈时间剂量依赖性;流式细胞仪结果表明,七叶皂苷能明显的将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡.结论 七叶皂苷对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

白及多糖体外抗肿瘤实验研究

目的探讨白及多糖的抗肿瘤作用。方法体外细胞培养的人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)经不同剂量白及多糖处理后,应用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪测定白及多糖对3种肿瘤细胞周期的影响。结果白及多糖对sgc、A2780和HepG2的增殖抑制作用具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测显示经200μg/mL白及多糖作用72 h后,sgc G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少;A2780 S期细胞增多,G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞无明显变化;HepG2 G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少。结论白及多糖可通过抑制sgc、A2780和HepG2的生长增殖、细胞周期阻滞作用发挥抗肿瘤作用。     

金属微量元素铜联合中药黄芪对人肺腺癌A549细胞的影响

目的研究金属微量元素铜联合中药黄芪对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法将铜与黄芪单独及联合应用于A549细胞,采用MTT比色法检测其对肺腺癌细胞的增殖影响,流式细胞仪PI染色法分析两药联合处理的肺腺癌细胞凋亡和周期的改变。结果铜能抑制A549细胞的增殖;黄芪在低浓度(25,50 mg/m L)的短时间作用中对细胞增殖有促进作用,在较高浓度呈现抑制作用。二者均呈浓度及时间依赖性;铜和黄芪均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强;铜和黄芪都将细胞周期阻滞在G0/G1期。结论铜、黄芪均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,在一定浓度范围内,呈量-效关系,而且两者联合应用具有相加或协同作用。     

丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA(10~50μmol/L)作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞(凋亡细胞)逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

白藜芦醇对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇对人黑色素瘤细胞A375体外增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇作用于人黑色素瘤细胞A375,通过MTT法和HE染色法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;TUNEL末端标记法和Annexin V-FITC双标记流式法检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响。结果不同浓度白藜芦醇对人黑色素瘤A375细胞均有抑制增殖和促进凋亡的作用,并存在剂量和时间依赖性。结论达到一定浓度的白藜芦醇对人黑色素瘤A375细胞有明显的抑制增殖作用,主要通过诱导A375细胞凋亡(主要是早期凋亡)抑制其增殖。