16S rRNA基因PCR对细菌感染的分子生物学研究

细菌核糖体小亚基ＲＮＡ（１６Ｓ ｒｉｂｏｓｏｍａ ＲＮＡ，１６Ｓ ｒＲＮＡ）为所有的细菌共有，其编码的基因具有高度的保守性，通过１６Ｓ ｒＲＮＡ基因保守区引物进行ＰＣＲ扩增，可早期、快速判断细菌的存在与否，并通过序列分析，进一步鉴定菌种和进行种系发生学分析。本文就细菌１６Ｓ ｒＲＮＡ基因的特点、ＰＣＲ扩增后对细菌感染的判断、菌株耐药性和流行病学研究等方面作一概述。     

PCR—Dotblot杂交法直接检测临床病原菌的报告

目的为了寻找临床病原菌系统，检测和鉴别的有力手段。方法用真细菌保守的１６ＳｒＲＮＡ基因为模板，以ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的方法检测临床病原菌。结果它将１６ＳｒＲＮＡ基因的广谱性和变异性并存之特点和ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的敏感性结合起来，对该法的建立进行了探讨，并初步用于临床感染的检测。结论为细菌通用检测法的建立提供了基础。     

RCR Ribotying在细菌分子流行病学研究中的应用

细菌流行病学鉴定的分子标记技术迅速发展 ,常以染色体或染色体外ＤＮＡ为材料 ,产生特异的或随机的多态性。如ＤＮＡ限制性片段长度多态性分析 (ＲＦＬＰ)、脉冲凝胶电泳技术是非常有效的 ,但二者都受到耗时及需要昂贵设备等因素的限制 ,不适于临床实验 ;ｒＲＮＡ基因的ＤＮＡ探针技术也适于流行病学研究 ,但操作较烦琐 ;Ｓｔｕｌｌ[4 ] 等率先把ｒＲＮＡ基因的限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)分析应用于实践 ,并称为ｒｉｂｏｔｙｐｉｎｇ。利用ｒＲＮＡ为基础的广谱探针 ,分析Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交后呈现的染色体探针指纹谱 ,已被众多研…     

基因芯片快速检测常见水中致病菌的初步应用研究

目的：利用基因芯片技术，尝试对从实际样品中分离的几种常见致病菌进行快速检测鉴定。方法：通过PCR扩增检测靶基因，采用基因芯片与扩增产物在一定条件下进行杂交，杂交结果通过ScanArray 3000芯片扫描仪读取并与标准杂交图谱比较，从而判定样品中细菌的种属。结果：对分离的20株细菌进行了基因芯片的杂交检测，并用传统方法对这些菌株进行了鉴定，基因芯片检测结果与传统方法鉴定结果的一致性为95％(19／20)。结论：基因芯片技术检测水中常见致病菌具有快速、准确、易于操作等优越性，值得推广应用。     

一种新的细菌学检验与鉴定方法——PCR扩增16S～23SrRNA区间多态性分析

一种新的细菌学检验与鉴定方法——ＰＣＲ扩增１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ区间多态性分析李君文综述晁福寰审校军事医学科学院卫生学环境医学研究所（天津３０００５０）ＰＣＲ技术在细菌等微生物检测与鉴定领域得到了长足的发展，有些技术已应用于临床检验和流行病学调查，并...     

七日热型,澳洲型钩端螺旋体野生株rRMA基因MRS …

目的：用两对物地异引物扩增１２株七日热型、澳洲型钩端螺旋体野生株及相应的２株参考株的１６Ｓ、２３ＳｒＲＮＡ基因,用Ｈｉｎｆ内切酶对扩增产物作ＭＲＳＰ分析。方法：应用ｒＲＮＡ基因ＭＲＳＰ分析技术。结果;不同宿主来源（钩端螺旋体病人、耕牛）的同一血清型钩端螺旋体野生株之间具有相同的ＭＲＳＰ型,同一血甭型钩端螺旋体野生株与相应的参与株的ＭＲＳＰ型也相同,故七日热型、奥洲型钩端螺旋体属同一ＭＲＳＰ型。结论     

16SrRNA基因探针与ctx A基因探针用于霍乱弧菌分型

以地高辛为标记物,利用ＰＣＲ方法制备１６ＳｒＲＮＡａ基因探针与ｃｔｘＡ基因探针,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,对霍乱弧菌进行分型,对广东地区分离自病人的６０株埃尔托型（ＥＶＣ）、１０株Ｏ１３９群和２株标准株进行研究,经１６ＳｒＲＮＡ基因在探针共分为４个类型（Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ）,ＥＶＣ和Ｏ１３９群均以Ｄ型为优势分为４个类型（Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ）,ＥＶＣ和Ｏ１３９群均以Ｄ型我隆,经ｃｔｘＡ基因探针Ｓｏｕｔｈｅｒｍ     

食源性致病菌高通量检测方法研究进展

食品常面临多种致病菌同时污染的风险,常规食源性致病菌检测方法一次只能检测一种致病菌,无法满足快速高效检测的需求。因此,建立食源性致病菌快速高效的检测新方法对有效应对食品安全问题具有重要意义。高通量检测方法如聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、生物传感器法、微流体技术、DNA微阵列技术等能在单次分析运行中同时检测多种致病菌,从而减少检测时间和成本,已被应用于多种食源性致病菌的快速高效检测。本文重点综述了这4种方法的基本原理、特点,以及近几年来其在食源性致病菌检测方面的应用研究进展。     

鼠疫耶尔森氏菌16S-23S rRNA基因间区的酶切位点分析

目的：了解鼠耶尔森氏菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区的酶切位点分布情况。方法：ＰＣＲ扩增及限制性内切酶分析。结果：对ＥＶ菌及不同来源的１０３株鼠疫耶尔森氏菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区进行了扩增,选用限制性内切酶Ｔａｑ、１ｅｙ Ｍｓｐ１对扩增产物进行酶切分析,结果发现所用鼠疫耶尔森氏菌该间区扩增产物及酶切图谱一致,选用Ｔａｑ１＋Ｍｓｐ,Ｈｉｎｆ１＋Ｍｓｐ１对ＥＶ菌１６Ｓ－２３ＳｒＲＮＡ基因间区扩     

16S rRNA基因测序分析技术在食品污染菌监测中的应用

目的 将16S rRNA基因测序分析技术应用于食品安全风险监测中非目标(相似、少见或非典型)致病菌的鉴定,为食源性疾病防控提供更多病原学证据。方法 采集18份畜类、18份禽类和9份鱼类共45份生鲜样品,目标致病菌按照GB4789标准检测,非目标菌进行16S rRNA基因测序,将全长序列在GenBank中比对确定细菌种属,通过MEGA6构建细菌16S rRNA基因进化树,判定细菌种属间的亲缘关系。结果 45份生鲜样品中检出19株目标致病菌,包括沙门氏菌、空肠弯曲菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌,而34株非目标菌16S rRNA基因全长序列能分别比对出13种细菌,其中8种19株菌属于致病或条件致病菌,包括霍乱弧菌、溶藻弧菌、结肠弯曲菌、奇异变形杆菌、粪肠球菌和铜绿假单胞菌,以及在深圳乃至省内首次报道的布氏弓形菌和海藻希瓦氏菌。结论 深圳市售生鲜食品受到多种食源性致病菌污染,特别是非目标检出的致病菌,对此认为16S rRNA基因测序分析技术是一套有效的细菌监测适宜技术,能提高食源性疾病和食物中毒的防控水平。     

16S—23SrDNA区间序列—一种分类及鉴别细菌的新方法

１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ区间序列是继１６ＳｒＲＮＡ后又一分类及鉴别细菌的新方法，它集保守性和可变性于一身，不但可用以菌种间鉴别。     

寡核苷酸芯片技术检测肠杆菌科食源性感染常见致病菌的研究

目的：建立肠杆菌科食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法：选带正电荷的尼龙膜作为寡核苷酸芯片载体，采用寡核苷酸芯片技术对肠杆菌科食源性感染常见致病菌进行检测和鉴定。结果：在同一条件下运用多重PCR扩增出14种（属）细菌的16SrRNA、23SrRNA基因片段，随后应用寡核苷酸芯片技术对致病菌进行检测得到了相应的特异性杂交图谱。结论：建立的寡核苷酸芯片技术可快速检测肠杆菌科食源性感染常见致病菌，为食源性感染的快速诊断与预防奠定了良好的基础。     

ATP生物发光技术快速检测水中细菌的研究

目的：探索利用ATP生物发光技术测定水中细菌量的可行性。方法：利用生物发光技术测定细菌中ATP量,根据细菌中ATP量与细菌数成正比这一原理,推算出水中菌落总数,与国标平皿计数法进行对比,分析两者之间的相关性。结果：检测结果与传统国标法有很好的相关性。结论：ATP生物发光技术具有准确、便利等优点,可望用于水中细菌的快速检测。     

大中专院校公用电话污染状况调查

20 0 1年 3月 ,笔者对我市 8所大中专院校 2 4台公用电话进行了卫生学调查 ,以涂抹法对电话机送话器、手柄及键盘按键分别进行采样 ,检测其乙型肝炎表面抗原及细菌污染状况 ,按常规检验方法检测细菌总数及各类致病菌 ,用反向血凝法及酶标法检测ＨＢｓＡｇ ,参照医学病毒学实验基础及实验技术进行评价。2 4台公用电话使用频次在 2 0～ 10 0次 /ｄ ,检测结果 ,ＨＢｓＡｇ阳性 :手柄 4台 ,送话器 11台 ,按键 3台 ,以送话器污染较重 ,度最高达 1∶2 0 48,平均滴度在 1∶12 8以上 ;细菌总数均值 :手柄6 5 .2 5个 /ｃｍ2 ,送话器 2 9.80个 /ｃｍ2 …     

应用半巢式PCR检测我国北方一些蜱种中的查菲？…

目的：了解我国北方一些蜱种中是否携带查菲埃痒我体（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｉｓｉｓ,简写为ＥＣ）。方法：应用半巢式ＰＣＲ检测蜱的带菌率,利用１６ＳｒＲＮＡ基因测序方法鉴定所测序列。结果：从蒙古莫尔嘎林业局采集的全沟硬蜱和森林革蜱中扩增出查菲埃立克体的１６ＳｒＲＮＡ基因,阳性率分别是３９．０６％和１０．００％,并从新疆精河采 的全沟硬蜱和草原甘蜱中也测到相同的序列,最小阳必 ５．７８９％     

ABC-ELISA法与快速ELISA试剂盒法检测华支睾吸虫抗体的结果比较

ＢＣ(Ａｖｉｄｉｎ Ｂｉｏｔｉｎ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｃｏｍｐｌｅｘ)技术 ,即生物素 -亲和素 -酶结合物技术 ,80年代开始已广泛应用于各种免疫学检测。这种技术利用生物素 (ｂｉｏｔｉｎ)与亲和素 (ａｖｉｄｉｎ)之间具有的高度亲和力以及 1分子亲和素可与 4分子生物素结合的特性 ,大大增强检测的敏感性。为了进一步地改进目前应用于华支睾吸虫病防治现场的ＥＬＩＳＡ试剂盒诊断方法 ,本实验用ＡＢＣ -ＥＬＩＳＡ法检测华支睾吸虫感染循环抗体 ,并与快速ＥＬＩＳＡ试剂盒法 (简称快速ＥＬＩＳＡ法 )进行比较。1　材料与方法1 .1　可溶性…     

LAMP微流控芯片快速检测三种食源性致病菌

建立一种结合环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和微流控芯片技术检测沙门氏菌、大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌三种食源性致病菌的方法,实现对3种致病菌的快速检测。通过比对选取3种致病菌特异性基因、沙门氏菌侵袭蛋白A(hlyA)基因、大肠杆菌O157脂多糖编码(rfbE)基因、金黄色葡萄球菌耐药基因FemA基因作为目的基因,设计LAMP引物,通过实时LAMP筛选合格引物。设计微流控芯片,将引物冻干后固化到芯片上,制成LAMP微流控芯片。选择合适的LAMP反应体系,添加显色剂,加入芯片中,反应结果通过肉眼或仪器判读。使用标准菌株检验芯片的特异性与敏感性,并使用人工污染样品进一步检验其在实际样品检测时的敏感性。结果表明:制成的LAMP微流控芯片具有较好的特异性,3种致病菌的检测敏感性均可达到100 cfu/ml,可用于食源性致病菌的现场快速检测。     

应用碱性磷酸酶标记探针检测苯丙酮尿症突变基因

为建立一种简便易行，快速可靠的检测苯丙氨酸羟化酶基因点突变的方法，应用ＰＣＲ技术扩增ＰＡＨ基因外显子３，５，６，７，１０，１１，１２序列，以碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，从而直接检测ＰＡＨ基因突变，结果在１５例患者中，检测出７种点突变，该结果与测序分析结果（另文发表）一致。证明碱性磷酸酶标记的ＰＣＲ－ＡＳＯ探针杂交法可快速、简便、准确、安全、可靠地检测ＰＡＨ基因点突变，在     

细菌基因分型技术及其在医院感染中的应用

近年来 ,分子生物学的理论和技术在实验诊断中的渗透和广泛应用 ,使得细菌鉴定、耐药基因的检测、分子流行病学的调查变得更加准确、简洁和快速。各种细菌基因分型技术逐渐成为临床上监测和鉴定细菌的主要手段[1,2 ] ,它在判定医院感染的暴发、确定感染的病原菌、寻找感染源以及识别一些特殊的致病菌等有着重要的作用 ,本研究对这些基因分型技术的方法及其在医院感染监测中的应用作简要综述。1　基因分型方法1 1　质粒分析 (plasmidanalysis) 　这是最早的细菌基因分型技术 ,主要应用于流行病学调查[3 ] 。其方法是提取细菌中的质粒 ,并经琼…     

环境样品中“致病指示微生物”沙门氏菌快速检测方法研究进展

环境样品中“致病指示微生物”沙门氏菌快速检测方法研究进展上海医科大学环境卫生教研室（２０００３２）施玮宋伟民污染的水体中经常存在沙门氏菌，绝大部分为致病菌，就评价受污染水质在流行病学上的安全度而言，沙门氏菌指标具有重要价值。传统经典方法检测水中的沙门...