辛伐他汀对兔脑血管痉挛中炎性反应的影响

目的探讨辛伐他汀对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）中炎性反应的影响。方法36只新西兰大白兔随机分为3组,每组12只。①对照组：给予常规饲养并枕大池二次注入等渗盐水;②sAH组：通过枕大池二次注血法建立SAH模型;③SAH＋辛伐他汀组：对SAH兔经胃灌注辛伐他汀5mg·kg^-1·d^-1,连续7d。在各组兔造模前后,行两次脑血管造影。第2次脑血管造影后1d,取基底动脉组织制作病理切片,分别于光镜和透射电镜下观察其显微及超微结构。行免疫荧光染色后,采用共聚焦显微镜观察基底动脉内皮细胞核转录因子-κB（NF—kB）表达量的变化,同时采用实时荧光定量PCR技术检测其细胞间黏附分子1（ICAM-1）mRNA的表达。结果①脑血管造影显示二次注血后,SAH组兔基底动脉出现明显的痉挛,管径变细,SAH组的管径为（0．68±0．09）mm,对照组为（0．87±0．06）mm,P〈0．05;而给予辛伐他汀后,痉挛减轻,SAH＋辛伐他汀组的管径为（0．77±0．08）mm,与SAH组管径比较,P〈0．05。SAH组兔基底动脉壁略有增厚,电镜显示平滑肌细胞内合成旺盛;而给予辛伐他汀预处理后,这些变化明显减轻。@SAH组兔基底动脉管壁内皮细胞内NF—κB表达高于对照组（156±9和84±8,P〈0．05）,而给予辛伐他汀后,NF—κB表达量降低（118±9）,与SAH组比较,P〈0．05。SAH组兔基底动脉组织ICAM-1mRNA的表达量高于对照组（0．843±0．029和0．673±0．011,P〈0．05）;给予辛伐他汀后,基底动脉ICAM-1mRNA的表达量低于SAH组（0．763±0．037）,与SAH组比较,P〈0．05。结论辛伐他汀可能通过抑制炎性反应从而预防SAH后CVS的发生,其抑制炎性反应,可能是通过NF—κB信号途径实现的。     

红细胞生成素治疗兔脑血管痉挛及对核因子κB表达的影响

目的探讨红细胞生成素（EPO）对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后迟发性脑血管痉挛（CVS）的疗效及其对核因子κB（NF-κB）表达的影响。方法取雄性新西兰白兔36只,随机分为对照组、SAH组和EPO治疗组,每组12只。采用枕大池二次注血SAH模型诱发迟发性CVS。EPO注射剂量为1000IU/kg,1次/8h;对照组和SAH组均给予EPO的溶剂（含人血清蛋白2.5mg/ml、氯化钠352mmol/L及蒸馏水）,以1ml/kg经腹腔注射,连续腹腔注射15次。造模后第5天处死动物,取基底动脉,采用HE染色测定基底动脉管腔横截面积,并用凝胶电泳迁移分析法检测NF-κB活性。结果①对照组、SAH组和EPO治疗组兔的基底动脉管腔横截面积分别为（0.412±0.034）、（0.210±0.018）和（0.342±0.030）mm2。SAH组与对照组比较,P〈0.01;EPO治疗组与SAH组比较,P〈0.01,与对照组比较,P〈0.05。②对照组、SAH组和EPO治疗组的NF-κB活性灰度值分别为：1.20±0.11、9.30±1.12和6.60±0.13,SAH组与对照组比较、EPO治疗组与对照组和SAH组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论EPO能够缓解SAH后的迟发性CVS,并抑制SAH后血管中NF-κB的表达。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对兔脑血管痉挛的作用

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛的影响及NF—κBp65、ICAM-1在基底动脉的表达。方法新西兰大白兔48只（雌雄不限）。随机分为对照组（8只）、SAH组（20只）及PDTC组（20只）。SAH组和PDTC组又分为SAH后1、3、5、7、14d亚组,每组4只。采用枕大池二次注血法制作SAH模型。PDTC组在第2次注血后即脑池内注射PDTC,0．25ml／次,2次／d,连续2d。观察基底动脉管径和厚度、病理形态学改变;免疫组化检测NF—κBp65、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达。结果①SAH组在第3天开始出现基底动脉管径变细、管壁增厚,第7天最明显,与第1天比较,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组仅第7天与第1天比较有差异（P〈0．05）。在第3、5、7天时,SAH组与对照组及PDTC组比较上述指标,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组与对照组比较,差异均无统计学意义。（2）PDTC组与SAH组同时间点比较,病理形态损害、炎性细胞浸润程度减轻。③SAH组在第3天开始出现NF—κBp6、ICAM—1表达,第7天达高峰。第3、5、7d（ICAM-1包括第14d）,SAH组表达量均明显高于对照组和PDTC组（P〈0．01）。PDTC组与对照组比较亦增高,P〈0．05。结论PDTC对SAH后迟发性脑血管痉挛具有一定的预防作用。通过抑制NF—κBp65、ICAM-1的表达可能是其机制之一。     

c-jun氨基末端激酶在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的观察兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉中原癌基因c-jun氨基末端激酶(JNK)的表达规律,以探讨其与脑血管痉挛(CVS)的关系。方法将72只新西兰大白兔随机分为2组:①对照组:12只;②SAH组:60只。SAH组又随机分为注血后1、3、5、7、10 d,共5组,每组12只。采用枕大池二次注血法建立稳定的兔CVS模型,应用苏木素-伊红染色和Western印迹分别观察兔基底动脉的形态学改变和JNK的表达情况,并通过测量管径的变化来判断CVS的严重程度。结果 SAH组的基底动脉出现相应的病理学改变,管腔狭窄呈急性期收缩和迟发性痉挛双相改变;SAH组的JNK表达升高,在第7天时达到高峰(P<0.01),第10天后表达稍下降,但仍高于对照组(P<0.01)。结论在兔CVS模型的基底动脉中JNK的表达明显上调,呈现一定的时序性变化规律,与迟发性CVS的严重程度一致,在CVS的发生和发展过程中起了重要的作用。     

罗格列酮对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPAR-γ）激动剂-罗格列酮对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）模型脑血管痉挛的作用及对基底动脉Toll样受体4（TLR4）介导的炎性信号通路的影响。方法取SD雄性大鼠78只,应用抽签法随机分为对照组、SAH组及罗格列酮组,每组26只。采用枕大池二次注血法建立SAH模型。在2次注血前后30min,罗格列酮组大鼠经腹腔注射罗格列酮（3mg/kg,0．5mg/ml,二甲亚砜为溶剂）,给予SAH组大鼠等体积的二甲亚砜;对照组经枕大池注入等量等渗盐水,腹腔注射等体积二甲亚砜。于造模后第5天取基底动脉标本,HE染色观察管径和横截面积,免疫组化染色观察髓过氧化物酶（MPO）和细胞间黏附因子γ（ICAM-γ）的表达,Western blot检测TLR4蛋白的表达。结果对照组、SAH组、罗格列酮组大鼠的基底动脉的横截面积分别为（555084±4630）、（32139±3239）、（459694±4465）μ㎡,直径分别为（2604±14）、（1954±12）、（2374±12）μm。ICAM-1阳性细胞数分别为（0．5±0．2）、（4．7±0．7）、（2．5±0．6）个,MPO阳性细胞数分别为（0．9±0．3）、（17．9±2．6）、（6．5±1．3）个。TLR4蛋白的表达量分别为0．15±0．19、1．094±0．14、0．45±O．16。SAH组、罗格列酮组的上述指标与对照组比较差异有统计学意义,SAH组与罗格列酮组比较差异亦有统计学意义,P值均〈0．01。结论罗格列酮可能通过抑制TLR4信号通路途径,减轻SAH后基底动脉的炎性反应,缓解脑血管痉挛。     

蛛网膜下腔出血后兔脑血管肌钙蛋白mRNA表达的研究

目的观察蛛网膜下腔出血(SAH)后兔脑血管平滑肌细胞内肌钙蛋白(calponin)mRNA水平表达的变化规律。方法将25只雄性新西兰白兔随机分为对照组及SAH组,SAH组又分为第1、4、7、14天组,共5组,每组5只兔。采用二次注血法建立SAH后脑血管痉挛的动物模型,以血管造影检测兔基底动脉的血管直径变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测alponinmRNA表达变化。结果SAH组第1、4、7、14天组calponinmRNA表达分别为0.34±0.08,0.32±0.08,0.28±0.04和0.15±0.04;对照组calponinmRNA为0.37±0.02,与SAH各组比较,差异有显著意义(P<0.05)。结论calponinmRNA在SAH后逐渐降低,可能与脑血管痉挛的发生、发展有关。     

蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化

目的 探讨亲代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 在蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干表达的动态变化.方法 采用枕大池二次注血法建立Wistar大鼠SAH模型.应用颅多普勒超声检测和RT-PCR方法分别观察蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血流速度和谷氨酸受体在脑干的变化.结果 ①超声检测显示与对照组相比,枕大池注血大鼠第1天基底动脉血流加快,第7天达到高峰,第14天血流速度下降,第21天未见明显变化,表明大鼠出现了脑血管痉挛(CVS).②RT-PCR结果显示SAH模型组术后第1、7天脑干组织中 mGluR-4 和 mGluR6 mRNA的表达率均比对照组下降,第14、21天差别不显著.结论 大鼠SAH的急性期出现了CVS,mGluR-4 和 mGluR6 可能参与了大鼠SAH急性期CVS的形成.     

线粒体途径介导的细胞凋亡在兔颅内动脉瘤生成中的作用

目的：探讨线粒体途径介导的细胞凋亡参与颅内动脉瘤生成的分子机制。方法取新西兰大白兔15只,用计算机随机法分为3组,采用双侧颈动脉结扎术造模基底动脉瘤后,分为造模后2 d组3只、造模后7 d组6只[其中3只用于实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析],假手术组6只（其中3只用于实时荧光定量PCR分析）。获取动物基底动脉尖组织,观察血管壁的组织病理变化情况,用TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组化染色及定量分析炎性细胞分布,实时荧光定量PCR方法检测凋亡相关蛋白mRNA的表达情况。结果（1）造模后2、7 d组兔基底动脉尖部,即内弹力层损害部位均发现凋亡细胞,造模后2 d组凋亡细胞数量[（4．02±0．21）个]明显高于基底动脉主干[（0．40±0．13）个]、左侧大脑后动脉[（0．41±0．22）个]和右侧大脑后动脉[（0．29±0．11）个],差异有统计学意义（均P＜0．05）。造模后7 d组基底动脉尖部凋亡细胞数量[（5．01±0．29）个]明显高于基底动脉主干[（0．49±0.21）个]、左侧大脑后动脉[（0．31±0．12）个]和右侧大脑后动脉[（0．41±0．19）个]（均 P ＜0．05）。而在假手术组兔未观察到内弹力层损害及凋亡细胞。（2）造模后7 d组兔基底动脉尖部半胱天冬氨酸酶9（caspase-9）mRNA表达（1．97±0．23）及caspase-3 mRNA表达（2．31±0．40）较假手术组均明显增高（P＜0.01）。结论细胞凋亡参与了单纯血流动力学诱导的基底动脉尖部动脉瘤的早期生成,其分子发生机制是通过caspase-9激活由BCL-2介导的线粒体途径。     

米力农对兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的作用及其机制研究

目的探讨米力农对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的作用及其机制。方法取3个月龄日本大耳白兔32只,随机分为SAH组、对照组、米力农组及米力农+N-硝基-左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,共4组,每组8只。采用枕大池二次注入自体血建立SAH模型。向对照组兔枕大池内注入等渗盐水替代自体血,其他操作同SAH组。在SAH造模后30 min,对米力农组兔由耳源静脉注射米力农溶液5 ml(30μg/kg);米力农+L-NAME组,先经耳源静脉注射米力农溶液(30μg/kg),再注射L-NAME(30 mg/kg),共5 ml;对照组、SAH组注射等渗盐水5 ml。对4组兔均连续给药3 d,1次/d。术后第3天应用CT血管造影(CTA)和经颅多普勒超声(TCD)观察各组兔基底动脉的管径和血流速度。结果 TCD检查显示,对照组、SAH组、米力农组、米力农+L-NAME组基底动脉的平均血流速度分别为(19.4±1.8)、(32.7±4.2)、(17.8±1.8)及(33.2±7.2)cm/s;收缩期峰值流速分别为(27±5)、(45±4)、(29±3)及(44±4)cm/s。CTA检查显示,4组基底动脉管径分别为(1127±140)、(772±116)、(1113±101)及(802±91)μm。上述指标各组间比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论米力农对SAH后脑血管痉挛有缓解作用,其扩血管作用可能与L-NAME抑制一氧化氮合酶活性有关。     

蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉及血浆eNOS、ICAM-1、TN-C和PGF2α的表达变化

目的探讨eNOS、ICAM-1、TN-C和PGF2α在蛛网膜下腔出血(SAH)后不同时间点基底动脉、血浆表达情况及其与脑血管痉挛的关系。方法 SD大鼠42只,随机分成:对照组(n=6)、假注血组(n=18)、SAH组(n=18)。假注血组及SAH组进一步按时间随机分为术后1、7、11 d3个亚组,每组6只。采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型。二次注血后在各个时间点采集实验动物血液标本,处死动物,取脑组织及基底动脉,测定基底动脉横截面积判断有无脑血管痉挛;应用RT-PCR分别观察eNOS、ICAM-1、TN-C和PGF2α在基底动脉中的表达情况;应用ELISA检测eNOS、ICAM-1、TN-C和PGF2α在血浆中的表达情况;原位细胞凋亡检测法检测颞叶神经元凋亡情况。结果枕大池二次注血法成功制作SAH模型,基底动脉发生了不同程度的血管痉挛。SAH组与对照组和假注血组相比大鼠基底动脉横截面积明显减少。RT-PCR及ELISA观察到ICAM-1、TN-C和PGF2α在SAH组高表达。而eNOS在SAH组中低表达,第7天表达水平最低。eNOS浓度降低,皮质神经元凋亡指数升高,ICAM-1、TN-C和PGF2α浓度升高,皮质神经元凋亡指数升高。结论 SAH后eNOS,ICAM-1,TN-C,PGF2α表达水平的变化与脑血管痉挛发展的时相性具有一定的一致性,eNOS,ICAM-1,TN-C,PGF2α可能参与SAH后脑血管痉挛的发生。     

Experimental and clinical study on effect of endovascular dilation on symptomatic cerebral vasospasm

Objective To undertake animal experimentation and clinical study on the safety and efficacy of percutaneous transluminal angioplasty (PTA) and intraarterial papaverine (IAP) infusion for treatment of refractory symptomatic cerebral vasospasm (CVS). Methods In the experimental study, vasospasm was induced in rabbits by double injections of blood into the cisterna magMa, IAP infusion was given on either the 4th day or the 7th day after occurrence of subarachnoid hemorrhage (SAH), and then neurological observation, angiography, light and electron microscopy were done, In the clinical study, since September 1996, 22 patients with refractory symptomatic CVS involving 50 vascular territories received dilation therapy by PTA and IAP within 24 hours of clinical neurological deterioration. Results In the experimental study, all the rabbits except two in the ‘the 4th day‘ group showed angiographic dilation in all of the spastic basilar arteries, and neurological improvement; in the ‘the 7th day‘ group angiographic dilation appeared in 4 (57. 1% ) out of 7 rabbits. After 24 hours, 1 rabbit in each group had recurrence of neurological deficits and angiographic constriction. In the clinical study after aneurysm clipping or endovascular coil embolization was done, within 72 hours of SAH all patients underwent endovascular treatment: PTA alone in 3 cases, IAP alone in 14 cases, PTA and lAP in the remaining 5 cases. All vessel segments were dilated satisfactorily after endovascular treatment. Clinical improvement was significant in 13 eases,moderate in 7, minimal or none in 2; 2 cases died on the 7th day after endovascular dilation treatment. Conclusion Endovascular dilating techniques, namely, PTA, IAP and a combination of PTA and IAP, are safe and effective for treatment of symptomatic CVS refractory to medical therapy.     

阿托伐他汀对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的干预作用

目的 探讨应用阿托伐他汀对蛛网膜下腔出血(SAA)后脑血管痉挛(CVS)的干预作用.方法 取健康SD雄性大鼠30只,随机将大鼠分为假手术组、SAH组、阿托伐他汀组,每组10只大鼠.以上各组分别于第1次手术后7 d灌注处死,取基底动脉行HE染色,测量其内径周长和管壁厚度;TUNEL法检测BA平滑肌细胞的凋亡率.结果假手术组、SAH组和阿托伐他汀组基底动脉的内径周长和管壁厚比较,三组之间两两比较均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).各组基底动脉平滑肌细胞的凋亡率比较,三组之间两两比较均有统计学意义(P<0.05).结论 阿托伐他汀可以诱导基底动脉平滑肌细胞的凋亡,早期应用对SAH后引发的CVS有一定的缓解作用.     

Preliminary report: Effect of cobaltous ion on cerebral vasospasm in a rabbit subarachnoid hemorrhage model

Experimental studies have suggested what the primary role is of free radical products in the development of vasospasm. It has been suggested that the degradation products of hemolysis trigger free radical reactions leading to lipid peroxidation is subarachnoid hemorrhage (SAH). Therefore, Fe²⁺, a degradation product of hemoglobin, seems to be the most important substance in the pathogenesis of vasospasm. Cobaltous ion was shown to be a powerful inhibitor of lipid peroxidation in biological membrane. Eleven rabbits were anesthetized and received 5 ml of autologous arterial blood into the cisterna magna. Group 1 (n=6) received 0.1 mg/kg cobalt solution intratecally via the cisterna magna simultaneously with blood. Group 2 (n =5) underwent sham operation as a control group. Forty-eight hours later the rabbits were deeply anesthetized and the brainstem was quickly removed and put under the operating microscope to measure the basilar artery diameter. Afterwards, the upper part of the brainstem was used for lipid peroxidation measurement and the lower part for the histopathological examination. Significant vasospasm was observed in four and moderate vasospasm in one rabbit of group 2; mild vasospasm was seen in five rabbits and moderate vasospasm was seen in one rabbit of group 1. There was no vasospasm in the control group. A statistically significant increase in the levels of lipid peroxide was found in the brainstem of group 2. These data demonstrate that cobaltous ion represents a promising therapeutic tool in vasospasm after SAH.     

大鼠蛛网膜下腔出血后急性脑血管痉挛血及脑组织一氧化氮和内皮素含量的动态观察

目的 探讨一氧化氮（ＮＯ）、内皮素（ＥＴ）在蛛网膜下腔出血（ＳＡＨ）后急性脑出血痉挛（ＣＶＳ）中的作用。方法 对ＳＡＨ模型组和假手术组大脑检测术后２４ｈ内局部脑血流量（ｒＢＣＦ）、血浆及脑组织ＮＯ、ＥＴ含量的动态改变,并测量基底动脉（ＢＡ）管径,３ｄ后行海马组织病理检查。结果 ＳＡＨ后２４ｈ内ｒＣＢＦ迅速而持续降低,ＢＡ痉挛;３ｄ后海马ＣＡ１区神经元明显受损,血清ＮＯ明显减少,脑组织ＮＯ显著增多,     

Interactive role of protein kinase C-delta with rho-kinase in the development of cerebral vasospasm in a canine two-hemorrhage model

BACKGROUND: We previously reported that protein kinase C (PKC)-delta was initially translocated from the cytosol to the membrane fraction (on day 4), followed by PKC-alpha, with the progression of cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage (SAH) on day 7. Rho/Rho-kinase pathways have also been proposed to be involved in the vasospasm. Thus we investigated the interactive role of Rho-kinase and PKC in the development of cerebral vasospasm after SAH. METHODS: The cerebral vasospasm was produced using a 'two-hemorrhage' canine model. The animals were treated with Y-27632, a Rho-kinase inhibitor, and rottlerin, a PKC-delta inhibitor, both injected into the cisterna magna. RESULTS: Y-27632 inhibited the vasospasm, 20-kDa myosin light chain (MLC20) phosphorylation, and PKC-delta translocation after the second injection of autologous blood on day 4. In contrast, Y-27632 did not affect the vasospasm on day 7. Rottlerin also inhibited the vasospasm on day 4, but had no effect on MLC20 phosphorylation and RhoA translocation. The vasospasm was accompanied with the phosphorylation of caldesmon (CaD), an actin-linked regulatory protein, which was strongly attenuated by Y-27632 and rottlerin. The application of PKC-delta to skinned strips of isolated canine basilar arteries caused a contraction and an increase in CaD phosphorylation. CONCLUSION: The development of cerebral vasospasm after SAH (on day 4) is caused by at least two mechanisms: one involves MLC20 phosphorylation mediated by the inhibition of MLC20 phosphatase by Rho-kinase, and the other CaD phosphorylation mediated by the activation of PKC-delta by Rho-kinase, which results in the alleviation of the inhibition by CaD of myosin Mg2+-ATPase activity.