云南苯丙氨酸羟化酶基因内(TCTA)n多态性及其在苯丙酮尿症诊断中的应用

目的应用苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因内（ＴＣＴＡ）ｎ多态性连锁分析进行经典型苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的基因诊断和产前诊断。方法应用聚合酶链反应扩增片段长度多态性（ＰＣＲＡｍｐＦＬＰ）方法,分析云南省１３个家系苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因内（ＴＣＴＡ）ｎ多态性。结果在１３个家系中检测到２２４～２５２ｂｐ的８种等位片段,其ＰＩＣ为０．６９８,杂合频率是５１％。可诊断率为１００％和５０％的家系各６个,１个家系因双亲带型为纯合型而未能诊断,可诊断率为６９％。完成１例产前基因诊断和２例回顾性的基因诊断。结论（ＴＣＴＡ）ｎ的ＰＣＲＡｍｐＦＬＰ分析可作为经典型ＰＫＵ基因诊断和产前诊断的一种简便有效的方法。     

儿童期脊肌萎缩症的基因诊断及产前基因诊断

为建立脊肌萎缩症（ＳＭＡ）产前诊断方法，应用３个与ＳＭＡ基因紧密连锁的ＣＡ重复序列位点ＪＫ５３ＣＡ１／２、５ＤＳ６３７、ＣＡＴＴ１，对１８个ＳＭＡ家系进行了连锁分析；应用聚合酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析，对３７例ＳＭＡ患儿作了ＳＭＡ基因缺失的检测；并作２例ＳＭＡ产前诊断。结果：１８个家系通过ＪＫ５３ＣＡ１／２位点诊断１２个（可诊断率６６．７％），通过５ＤＳ６３７位点诊断１４个（７．８％），１０个ＳＭＡ家系通过ＣＡＴＴ１位点诊断９．５个（９５．０％）；３７例患儿中３２例（８６．５％）有端粒侧ｅｘｏｎ７的纯合性缺失；２例接受产前诊断者，１例胎儿患病，１例胎儿为正常。结论：应用ＳＭＡ基因旁侧ＣＡ重复序列联合ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测进行ＳＭＡ基因诊断和产前诊断简便、准确、可应用于临床。     

先天性巨结肠RET基因突变的研究

目的 从分子水平探讨先天性巨结肠（ＨＤ）的发病机理,了解中国人群ＨＤ发病与酪拟定酸激酶受体基因（ＲＥＴ基因）突变的关系。方法 ３０例ＨＤ患者（４例家族性和２６例散发性）和３０例对照者的外周静脉血经盐析法提取ＤＮＡ后,应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法,对ＲＥＴ基因第１５外显子（Ｅ１５）进行基因突变的检测,对阳性片段进行直接测序。结果 ２例家族性患者的Ｅ１５扩增片段在ＳＳＣ     

急性白血病MTS1基因缺失及点突变的研究

目的 探讨多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）突变与恶性血液病间的关系,方法 应用聚合酶链反应－单链查象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分别和ＤＮＡ印迹（ｓｏｕｔｈｅｒｍｂｌｏｔ）方法检测３５例急性白血病患儿ＭＴＳ１基因的改变。结果 急性淋巴细胞白血病（ＡＬ）患儿的ＭＴＳ１基因缺失（包括点突变）为２６％（８／３１）,其中纯合子缺失,Ｂ－ＡＬＬ为１６％（４／２５）,Ｔ－ＡＬＬ为６例中有２例,点突变则两型各占１例。结     

小儿急性淋巴细胞白血病的克隆多样性研究

目的探讨小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的克隆多样性。方法：聚合酶链反应扩增小儿ＡＬＬ的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）重排基因,用单链构象多态性（ＳＳＧＰ）、以及异源双链形成（ＨＤＦ）方法,分析基因重排方式。结果：３７例中,单克隆的ＩｇＨ／ＴＣＲ,基因重排中除了单等位基因重排１１例（３３％）外,有１６例（４９％）是双等位基因重排,另６例是寡克隆重排。结论：用抗原受体重排基因分析可以发现,小儿ＡＬＬ存在克隆多样性现象,且初步提示预后较差。     

危重患儿与三重酸碱平衡紊乱（附19例临床分析）

目的 回顾性分析危重患儿的水电解质和酸碱紊乱，探讨治疗方法。方法 对近三年本院ＰＩＣＵ病房１９例合并极重度酸碱紊乱（ＴＡＢＤ）患儿的临床资料和资料进行统计分析。结果 １９例重度酸碱紊乱中１１例为呼碱型，８例为呼酸型；所有病人均表现ＡＧ增高。呼酸型ＴＡＢＤ表现；ｐＨ↓、ＰａＣＯ２↓、ＨＣＯ３＾－↑、ＡＧ↑、Ｃｌ＾－↓；呼碱型ＴＡＢＤ；ｐＨ↑、ＰａＣＯ２↓、ＨＣＯ３＾－↓、ＡＧ↑、Ｃｌ＾－↓，但两型Ｔ     

脐血肽链分析筛查重型地中海贫血研究

评价重型地中海贫血（地贫）的早期诊断方法。方法：新生儿脐血聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＴＡｕ－ＰＡＧＥ）、基因分析及随访调查。结果：连续筛查新生儿脐血２４２３例,α链消失１０例（０．４１％）,β链消失７例（０．２９％）。１０例ＨｂＢａｒｔ‘ｓ水肿胎儿的基因体质匀无ＢａｍｈＩ和ＢｇＩⅡ酶解的特异性片段;７例β地贫患儿出现典型临床表现,其基因突变类型为ＣＤ１７．ＣＤ１７３例,ＣＤ１７．ＣＤ４１－４２２例,ＣＤ     

肥胖儿童载脂蛋白E基因多态性的研究

目的 探讨单纯性肥胖儿童载脂蛋白Ｅ（ＡｏｐＥ）基因多态性的分布及其对血脂、脂蛋白、载脂蛋白的影响。方法 采用改良的聚合酶链式反应－限制性片段长度多态性方法分析肥胖及健康儿童ＡｐｏＥ基因型。结果 肥胖儿童Ａｐｏε４等位基因频率（０．１２２９）较健康儿童（０．０６１８）增高（Ｐ〈０．０５）。ＡｐｏＥ基因多态性影响健康儿童的血脂水平。在单纯性肥胖儿童,ε２,ε３,ε４等位基因携带者的血甘油三酯（ＴＧ）、     

儿童急性白血病继发丙型病毒性肝炎

目的 探讨儿童急性白血病继发输血后丙型病毒性肝炎的发生、发展及转归。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ法检测血清ＨＣＶ－ＲＮＡ,并用ＥＬＩＳＡ方法测ＨＣＶ核心区多肽抗体（ＨＣＶ－ＣＰ）。结果 １０７例儿童白血病中ＨＣＶ感染率达７０％（７５／１０７）;ＨＣＶ－ＣＰ检测阳性率明显低于ＨＣＶ－ＲＮＡ（４０％ｖｓ７４％）;ＨＣＶ感染者化疗期间曾有转氨酶（ＡＬＴ）明显升高,但停止化疗后５０例中仅１例ＡＬＴ持续偏高,余均恢     

紫癜性肾炎患儿外周血单个核细胞白细胞介素-13的变化

目的　探讨白细胞介素１３（ＩＬ－ １３） 在紫癜性肾炎（ＨＳＰＮ） 的变化。方法　应用逆转录－ 多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ） 及双抗体夹心ＥＬＩＳＡ 法,分别检测了３０ 例健康儿童和２０ 例ＨＳＰＮ 患儿活动期和恢复期外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 在植物血凝素（ＰＨＡ） 刺激下ＩＬ－ １３ ｍＲＮＡ和蛋白水平的变化。结果　①ＨＳＰＮ 活动期ＰＢＭＣ中ＩＬ－１３ ｍＲＮＡ 和蛋白水平均显著高于正常对照组（０ ．４８ ±０ ．１１ ｖｓ０．３６±０．１６ 和４７ ．８９ ±１１ ．６７ ｐｇ／ｍｌｖｓ３５．２２±４．４２ ｐｇ／ｍｌ, Ｐ均＜ ０．０１） ,恢复期与正常对照组相比无显著差异（０．３８±０．１２ ｖｓ０．３６±０ ．１６ 和３５ ．９４ ±５．６０ ｐｇ／ｍｌｖｓ ３５ ．２２±４ ．４２ ｐｇ／ｍｌ,Ｐ均＞ ０．０５）;②临床上表现为蛋白尿型、肾病综合征型及急性肾炎综合征型者,活动期ＰＢＭＣ中ＩＬ－ １３ ｍＲＮＡ和蛋白水平均显著高于正常对照组,而表现为单纯血尿型者与正常对照组相比无显著差异。结论　ＨＳＰＮ 患儿活动期ＩＬ－ １３ 表达异常,且与临床类型有一定的相关关系。     

尿HBsAg特异性免疫复合物检测在乙肝病毒相关肾炎中的临床意义

目的 探讨尿ＨＢｓＡｇ免疫复合物（ＩＣ）的检测在乙肝病毒相关肾炎中的诊断意义。方法 用ＰＥＧ沉淀结合胰蛋白酶解离法测定三组（Ａ组ｎ＝２１，Ｂ组ｎ＝９，Ｃ组ｎ＝１８）尿ＨＢｓＡｇ－ＩＣ，并与肾组织免疫荧光检测结果进行对比。结果 经肾活检确诊有ＨＢｓＡｇ肾沉积的１０例乙肝病毒相关肾炎中，尿ＨＢｓＡｇ－ＩＣ阳性检出率达９０％；非乙肝病毒相关肾炎（血ＨＢｓＡｇ阳性，无ＨＢｓＡｇ肾组织沉积）１０例中尿ＨＢｓ     

单纯性肥胖儿童血小板聚集反应的变化及其机理研究

目的探讨肥胖儿童血小板聚集反应的变化及其机理。方法采用二磷酸腺苷（ＡＤＰ）诱发体外血小板聚集及胆固醇亚组份沉淀法观测２２例７～１２岁高脂血症肥胖儿童血小板聚集率及１５１例肥胖儿童血清胆固醇各组份含量和比值。结果单纯性肥胖儿童血清总胆固醇（ＴＣ）和低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）含量明显高于正常儿童（Ｐ＜００１）,而高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ２－Ｃ）含量和ＨＤＬ－Ｃ／ＴＣ、ＨＤＬ２－Ｃ／ＴＣ及ＨＤＬ２－Ｃ／ＨＤＬ－Ｃ比值显著低于正常儿童（Ｐ＜００５,Ｐ＜００１）。高脂血症肥胖儿童１秒与５秒时血小板聚集率较正常儿童和血脂不高的肥胖儿童显著升高（Ｐ＜００１）。结论高脂血症的肥胖儿童血小板聚集反应增强,似与其ＴＣ、ＬＤＬ－Ｃ增高及ＨＤＬ２－Ｃ含量下降有关     

大剂量氨甲蝶呤治疗急性淋巴细胞白血病的毒副作用观察

为提高小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的治疗缓解率并延长其生存期,近年来,我们采用大剂量氯甲喋吟（ＨＤ－ＭＴＸ）进行化疗,现将我们观察到的毒副作用报告如下。对象和方法１．观察对象：１９９６年８月至１９９８年８月住院的ＡＬＬ患儿共１５例,其中男性９例,女性６例,均处于完全缓解（ＣＲ）期。２．ＨＤ－ＭＴＸ化疗方法：１５例患儿累计进行３０例次ＨＤ－ＭＴＸ化疗［１］,剂量为３ｇ／ｍ２,充分水化、碱化及同时应用ＶＰ（长春新碱、泼尼松）,三联鞘注（ＭＴＸ＋Ａｖａ－Ｃ＋Ｄｍｘ）,甲酞四氢叶酸钙解救在ＨＤ－ＭＴ…     

肥胖儿童血脂,脂蛋白与载脂蛋白的研究

对１２７例单纯性肥胖儿采禁食１２小时以上的静脉血，检测其血清甘油三酯，总胆固醇［ＴＣ（ＨＤＬ－ｃｈ，ＬＤＬ－ｃｈ）］，载脂蛋白（ＡＰＯＡＩ，ＡＰＯＢ）；与１２０例健康儿比较，结果ＴＣ，ＴＧ，ＬＤＬ－ｃｈ，ＡＰＯＢ浓度明显升高，ＨＤＬ－ｃｈ，ＡＰＯＡＩ两组之间差异不明显。提示肥胖儿血脂紊乱是导致动脉粥样硬化的高危因素。     

干血纸片法用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型的检测

目的 了解广东人葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤ）缺陷的基因突变型。探讨干血纸片法用于基因突变型诊断的效果。方法 采用专用滤纸干血斑，运用５对特异性引物进行ＤＮＡ直接扩增、结合限制性内切酶分析技术对８７例Ｇ－６－ＰＤ缺陷的住院患儿进行检测。结果 ８７例患儿中３０例（３５％）为Ｇ１３７６Ｔ，２８例（３２％）为Ｇ１３８８Ａ，６例（７％）为Ａ９５Ｇ，１例（１％）为Ｇ３９２Ｔ，未检出Ｃ１０２４Ｔ，尚有     

射频消融治疗儿童阵发性室上性心动过速

目的 探讨射频消融（ＲＦＣＡ）对儿童阵发性室上性心动过速（ＰＳＶＴ）的治疗价值。方法 连续收集１３例ＰＳＶＴ患者,通过标准１２导联体表ＥＣＧ和心内电生理检查确定ＰＳＶＴ类型和标测消融靶点,然后施行ＲＦＣＡ。结果 房室折返型心动过速（ＡＶＲＴ）１０例,房室结折返型心动过速（ＡＶＮＲＴ）３例,其中左侧游离壁旁道８例,右侧游离壁旁道２例,房室结双径路３例。ＲＦＣＡ成功率１００％。１例ＡＶＮＲＴ患者发生一     

儿童实体恶性肿瘤多药耐药基因的表达

目的：测定儿童实体恶性肿瘤多药耐药基因９ｍｄｒ １）的表达，及其产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）。方法：１７例儿童实体恶性肿瘤组织，采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测其ｍｄｒｌｍＲＮＡ表达水平。其中１５例同时应用ＡＰＡＡＰ免疫酶标组化法测定基Ｐ－ｇｐ。结果：实验显示ｍｄｒｌ ｍＲＮＡ阳性率为８２．４％（１４／１７），Ｐ－ｇｐ阳性率为８０．０％（１２／１５）。两者阳性符合率主８６．７％（１３     

戊型肝炎病毒宫内感染及产儿死因研究

目的为了从分子水平探讨孕妇感染戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）后胎儿宫内感染和死亡原因。方法对１７例患重症戊型肝炎的孕妇和娩出的１８例新生儿，以酶联免疫吸附法测母血和脐带血抗－ＨＥＶＩｇＭ／ＩｇＧ，同时查新生儿肝组织病理改变，免疫组化法查肝内戊型肝炎病毒抗原（ＨＥＶＡｇ），用地戈辛（ＤＩＧ）探针标记ＨＥＶｃＤＮＡ２３ｑｂｐ片段进行原位杂交查肝内ＨＥＶＲＮＡ。结果母血抗－ＨＥＶ、ＩｇＭ／ＩｇＧ均阳性，脐带血仅抗－ＨＥＶＩｇＧ阳性，肝组织以变性、炎变为主，新生儿肝内ＨＥＶＡｇ阳性率７７％（１０／１３），ＨＥＶ－ＲＮＡ阳性率６２％（８／１３）。结论ＨＥＶ存在宫内感染     

中国人哮喘易感性与染色体5q31～33区连锁关系的初步研究

目的获得中国人相关位点的资料，确定中国人哮喘易感性与染色体５ｑ３１～３３区域的连锁关系。方法采集３２个哮喘家系共１９２份样品，并取３９个正常无关个体为对照；用同位素掺入的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增多态性遗传标记Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３，通过受累同胞配对法进行Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与哮喘和高血清总ＩｇＥ的连锁分析。结果正常对照分析：Ｄ５Ｓ４３６共获得９个等位片段，多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．８０３，杂合度（ＨＥＴ）为０．８２３，Ｄ５Ｓ３９３共有１１个等位片段，ＰＩＣ为０．８９２，ＨＥＴ为０．８９８，表明两个位点均属于高度多态性的遗传标记。连锁分析：Ｄ５Ｓ４３６与哮喘呈连锁状态（Ｐ＜０．０５），Ｄ５Ｓ３９３与哮喘没有连锁关系；Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与高血清总ＩｇＥ都没有显示连锁关系。结论染色体５ｑ３１～３３区可能存在与中国人哮喘易感基因相关的１个或多个位点，是进行中国人哮喘易感基因研究的重要候选区域之一。     

苯丙氨酸羟化酶基因新突变位点与临床的关系

目的 观察新发现的两种苯丙氨酸羟化酶基因突变与临床表现型的关系,对其中一个位点进行基因表达的研究。方法 通过变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）突变检测和固相ＤＮＡ直接序列分析等方法。对５８例苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患儿进行突变检测,对新突变进行体外寡革酸定点诱变和在ＣＯＳ细胞中ＰＡＨ活性表达研究,研究 共发现有ＩＶＳ６ｎｔ－１的Ｇ→Ａ突变和Ａｒｇ２５２Ｇｌｎ突变的患儿７例,均有典型的ＰＫＵ临床表现,并有不同