儿童急性白血病p16基因的缺失和突变及其意义

目的 探讨Ｐ１６基因缺失、突变在儿童急性白血病发病中的意义。方法 选择白血病初治儿５１例，取其骨髓或外周血标本抽提ＤＮＡ，进行差异聚合酶链反应（Ｄ－ＰＣＲ）和单链构象多态性聚合酶链反应（ＳＳＣＰ－ＰＣＲ）的检测。结果 （１）儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）Ｐ１６基因外显子１、外显了２和外显子３的缺失率分别为３２％（１２／３８）、４４％（１２／４２）。（２）无一例发生基因突变。（３）急性非细胞性白血     

儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨ｐ１６基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病（ＡＬ）发生，发展及预后的关系。用聚合酶链反应（ＰＣＲ），ＤＮＡ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析和ＤＮＡ测序技术研究５３例初治和复发儿童ＡＬ及３０例对照组ｐ１６基因纯合子缺失和点突变的情况。结果：儿童ＡＬｐ１６基因纯合子缺失及点突变为２８．３０％（１５／３３例），对照组未发现缺失及突变。ＡＬＬ组ｐ１６基因纯合子缺失为３５．００％（１４／４０例），其中     

小儿急性白血病P16基因突变的分析

分析小儿急性白血病Ｐ１６基因的突变及其在疾病发生的作用。利用ＰＣＲ扩增Ｐ１５６基因的外显子１、外显子２,并进行缺失突变分析,利用均一变性凝胶电泳（ＣＤＧＥ（对外显子２进行点突变分析。结果显示：小儿急性白血病缺失突变率异常高５７例患者中有１８例发生缺失突变,只有６例发生点突变,总突变率为３１．６％、ＡＬＬ患者Ｐ１６基因的总突变率明显高于ＡＭＬ患者,为６４．７％,而ＡＭＬ患者Ｐ１６基因的总突变率只有８     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨ｐ１６基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）发病中的作用,认识ｐ１６蛋白失活的分子机制。应用差异ＰＣＲ技术检测４２例初治、１７例缓解期小儿ＡＬＬｐ１６基因的纯合缺失及甲基化。结果４２例ＡＬＬ中ｐ１６基因纯合缺失率占３８．１％,Ｔ系ＡＬＬ占８０％,显著高于Ｂ系ＡＬＬ２２．５％,Ｐ〈００１。１７例缓解期ＡＬＬ均无基因缺失。９例ｐ１６基因纯 合缺失是小儿ＡＬＬ,尤其Ｔ系ＡＬＬ最常见的基     

47例儿童急性淋巴细胞白血病IgH和TCR基因重排

目的 检测４７例儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）ＩｇＨ和ＴＣＲ基因重排，以便选择恰当的组合用于微小残留病（ＭＲＤ）的检测。方法 以Ｃｈｅｌｅｘ１００为介质，从初诊的ＡＬ患儿骨髓涂片中提取ＤＮＡ，借助聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测ＩｇＨ、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ和ＴＣＲγ基因重排。结果 在Ｂ－ＡＬＬ（４２例）中，ＩｇＨ、ＴＣＲβ、ＴＣＲδ和ＴＣＲγ基因重排的检出结果分别为３２／４２例、１５／４２例、１９／     

“三联药”鞘注加静滴HD—MTX防治小儿中枢神经系统白身病363例疗？…

尽管化学治疗迅速发展,但许多化疗药物不易透过血脑屏障,使中枢神经系统（ＣＮＳ）成为白血病细胞的第一庇护所,中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）成为急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患儿复发的最重要原因。我们对１９８６～１９９６年收治的３６３例ＡＬＬ患儿随访观察２年,结果表明：鞘注ＭＴＸ、Ａｒａ－Ｃ、Ｄｘ加静滴ＨＤ－ＭＴＸ可明显降低ＣＮＳＬ的发生率,对提高ＡＬＬ患儿的持续完全缓经（ＣＣＲ）有着十分重要的意义,而     

急性白血病的免疫亚型及其临床特点

应用一组ＣＤ系列单克隆抗体随机检测了４６例急性白血病患儿白血病细胞的免疫表型，包括急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）２６例，急性粒细胞白血病（ＡＭＬ）２０例。Ｔ－ＡＬＬ（ＣＤ）１０例，临床以白细胞计数异常增高，淋巴结明显肿大，以及白血病细胞髓外浸润等肿瘤综合征为特点；非Ｔ－ＡＬＬ１６例，除Ｂ＿４－ＡＬＬ（ＳｍＩｇ＋）髓外白血病发生率高外，其余对治疗反应较好。２０例ＡＭＬ中５例ＣＤ，４例ＣＤ，存活期均短。提示具有ＣＤ＿７，ＣＤ＿（１４）和ＳｍＩｇ表型者预后不良。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病动态监测的研究

目的 探讨采用筑巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）等多项指标监测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微量残留病（ＭＲＤ）的临床意义。方法 ９８例ＡＬＬ进行了形态学，免疫不客细胞遗传学（ＭＩＣ）分型，结合Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ，姐妹染色单体交换（ＳＣＥ），染色体核型分析，对５８例ＡＬＬ进行ＭＲＤ监测。结果：（１）５８例ＡＬＬ进行了Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ２Ｄδ３基因重 ４１例Ｂ－ＡＬＬ中３４例（８３     

MDM2mRNA过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病免疫分型、FAB分型及高白细胞

为了研究癌基因ＭＤＭ２ｍＲＮＡ过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的免疫分型、ＦＡＢ分型及临床高白细胞性的关系,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了３２例急性洒在病患儿外周血单个核细胞内ＭＤＭ２ｍＲＮＡ过度表达与不同型别的关系。高白细胞性白血病（ＨＡＬ）ＭＤＭ２表达明显高于非高白细胞性白血病（ＮＨＡＬ）组（Ｐ＝０．００９９）;Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）与非Ｔ淋巴细胞白血病（Ｎｏｎ－Ｔ－ＡＬＬ）间（Ｐ＝０．７３４５）,Ｌ１型急性淋巴细胞白血病与Ｌ２型间（Ｐ＝０．８９２３）的ＭＤＭ２ｍＲＮＡ表达水平无差异。提示ＭＤＭ２ｍＲＮＡ过度表达与儿童急性淋巴细胞白血病的高白细胞性相关。     

急性淋巴细胞白血病85例免疫表型分析

目的 分析儿童急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的免疫表型特点。方法 用一组系列相关单克隆抗体和流式细胞术间接免疫荧光法对８５例儿童ＡＬＬ进行免疫分型。结果 Ｔ系ＡＬＬ占２８．２％,Ｂ系ＡＬＬ６１．２％,Ｔ／Ｂ急性混合细胞白血病（ＡＭＬＬ）８．２％,其中髓系抗原表达率２１．２％;各组间Ｌ１、Ｌ２比率、染色体异常及治疗完全缓解（ＣＲ）率均无显著性差异（Ｐ〉０．０５）;Ｔ－ＡＬＬ中ＣＤ３平均阳性率较ＣＤ２、     

儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨p1 6基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病 (AL)发生、发展及预后的关系。用聚合酶链反应 (PCR)、DNA单链构象多态性 (SSCP)分析和DNA测序技术研究 5 3例初治和复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因纯合子缺失和点突变的情况。结果 :儿童ALp1 6基因纯合子缺失及点突变为 2 8.30 % (1 5 /33例 ) ,对照组未发现缺失及突变。ALL组p1 6基因纯合子缺失为 35 .0 0 % (1 4/4 0例 ) ,其中HR—ALL为 47.0 6 % (8/1 7例 ) ,SR—ALL8.33% (1 /1 2例 ) ,复发ALL为 45 .45 % (5 /1 1例 ) ,未见点突变 ;ANLL组未见纯合子缺失 ,点突变 1例 ,为 7.6 9% (1 /1 3例 ) ,测序分析发现其位于第 2外显子 (exon2A) 49密码子 ,发生错义突变 ,由GCC突变为ACC ,由苏氨酸取代丙氨酸。结果表明 :①p1 6基因失活与儿童AL ,尤其与儿童ALL的发生、发展关系密切。②在儿童ALL中 ,p1 6基因纯合子缺失是基因失活的主要形式 ,点突变罕见。③在儿童ANLL中 ,p1 6基因纯合子缺失、点突变均罕见。④p1 6基因失活可能成为预测儿童AL病程进展、复发、预后的指标之一。     

急性混合谱系融合基因阳性急性白血病患儿的临床特点

目的分析混合谱系白血病(MLL)融合基因阳性的急性白血病(AL)患儿临床特点,探讨其治疗措施及其预后相关因素。方法选取细胞形态学、分子生物学、免疫分型及巢式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MLL融合基因阳性AL患儿51例,对其临床表现、治疗及预后进行回顾性分析。结果51例MLL融合基因阳性AL患儿中急性淋巴细胞白血病(ALL)37例,急性髓细胞白血病(AML)14例。42例涉及11号染色体改变;RT-PCR检测有36例MLL基因重排,15例为串联重复。32例接受正规治疗的AL患儿中24例完全缓解,其中ALL19例,AML5例;缓解时间持续2 a以上者ALL5例,AML仅1例;持续缓解存活者仅16例,ALL12例,AML4例;10例MLL融合基因已转阴,并持续存活。在随访6 a中,32例中复发6例,均为骨髓复发,死亡6例。结论MLL融合基因阳性AL患儿发生率低,化疗效果差,易复发,预后差。少数对化疗敏感的AL患儿MLL融合基因可转阴,并持续存活。     

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目的探讨细胞周期蛋白D3、E的表达与儿童急性白血病(AL)的关系。方法采用免疫组织化学法,对广西医科大学第一附属医院儿科2002年1月至2004年5月收治的50例初发或复发儿童AL,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)30例(高危ALL12例,标危ALL18例),急性非淋巴细胞白血病(ANLL)20例,和26例完全缓解AL(AL CR)患儿,以及23例同期住院的非恶性疾病患儿(对照组),检测其骨髓细胞中细胞周期蛋白D3、E的表达情况。结果AL组中细胞周期蛋白D3、E阳性率分别为54%和46%,高于AL CR组和对照组(P<0.01);在ALL和ANLL间差异无显著性(P>0.05)。高危ALL细胞周期蛋白D3阳性率明显高于标危ALL(P<0.01)。化疗前细胞周期蛋白D3、E表达阳性率明显高于化疗缓解后(P<0.01)。细胞周期蛋白D3、E在AL组中的表达呈正相关(r=0.5298,P<0.01)。结论细胞周期蛋白D3、E与儿童AL发病有关,它们的表达存在相关性,可作为疗效观察的指标;细胞周期蛋白D3可能与患儿不良预后有关。     

小儿急性淋巴细胞白血病免疫表型临床特点

急性白血病是儿科最常见的恶性肿瘤之一 ,单克隆抗体的应用为白血病的分型开辟了一条新途径 ,对指导治疗和判断预后均有重要意义 ,我们对 1 995年 2月～ 1 997年 1 2月在我院收治的 42例小儿急性淋巴细胞白血病 ( ALL)的原始细胞进行了免疫表型的分析 ,现报告如下 :材料与方法1 .病例　 42例 ALL ,男 2 7例 ,女 1 5例 ,年龄 1 12 岁～ 1 4岁 ,均为初诊病例 ,除 3例放弃治疗外 ,均接受了 1个疗程以上的化疗 ,治疗方法采用小儿急性白血病诊疗建议(修订草案 ) (1 ) 中的治疗方案。2 .方法　免疫表型的检测　取肝素抗凝的骨髓或外周血 ,桥联…     

急性白血病免疫分型与临床研究

目的了解儿童急性白血病(AL)免疫表型的分布情况和抗原表达规律,并与临床特征及预后相结合,为临床个体化用药提供指导。方法对85例新近诊断为AL患儿,采用CD45/SSC双参数散点设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析。其中胞膜抗原采用单克隆抗体三色直接免疫荧光标记法,胞浆内抗原采用双色直标法。结果1.AL 85例免疫分型:未分化型(AUL)1例,占1.2%;杂合型7例,占8.2%;急性髓性白血病(AML)18例,占21.2%;急性淋巴细胞白血病(ALL)59例,占69.4%。其中B-ALL 50例,占84.7%;T-ALL 6例,占10.2%;T/B-ALL 3例,占5.1%。2.ALL 59例中髓系抗原表达31例,占52.5%。髓系抗原表达阳性组和阴性组临床特征、治疗反应及预后方面无明显差异。3.AML患儿中有淋系抗原表达5例,占27.8%,低于ALL有髓系表达。其中以CD7阳性率最高,为60%;CD14在M4、M5表达率为75%;CD13、CD33在AM中表达率分别为83.3%、94.4%。4.混合型白血病7例。其中B/M 6例,TB/M 1例;2例在FAB分型中疑为混合型,余5例为ALL。结论应用多色流式细胞术可较好地分析每例白血病患儿,尤其是对于混合型白血病及抗原交叉表达者更有意义。     

急性白血病患儿骨髓细胞环氧合酶-2和survivin表达及其意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和survivin蛋白在儿童急性白血病(AL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(SABC)法检测2006年6～11月收治42例AL患儿骨髓细胞中COX-2和survivin的表达,对照组为10例非恶性血液病且骨髓正常儿童。结果AL患儿COX-2和survivin表达阳性率分别为52.4%和45.2%,与对照组比较差异有显著性(Pa<0.05)。其中32例急性淋巴细胞白血病(ALL)COX-2和survivin的表达阳性率分别为46.9%和40.6%,与对照组比较差异有显著性(Pa<0.05)。ALL高危组和中低危组COX-2阳性表达率分别为54.5%和42.8%,二组比较差异无统计学意义(Pa>0.05)。AL42例COX-2与survivin表达均为阳性16例,均为阴性17例,COX-2和survivin蛋白表达呈正相关(r=0.579P<0.001)。COX-2阴性组初次完全缓解率高于阳性组(93.3%和66.7%),差异有显著性(P<0.05)。结论1.COX-2蛋白在儿童AL中表达增高;2.COX-2与抗凋亡因子survivin共同参与AL发展,二者可能起协同作用;3.COX-2高表达可能与儿童AL预后有关。     

CYP3A5基因在急性白血病儿童中的表达及临床意义

目的：CYP3A5参与多种常用化疗药物的代谢反应。目前对于CYP3A5基因参与急性白血病的研究主要限于细胞系的体外研究。该文通过检测急性白血病患儿CYP3A5-6986位点的基因型分布特点和基因表达水平,探讨其基因表达水平对白血病患者治疗、预后评价的意义。方法：①应用聚合酶链-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）及PCR产物序列测定,检测66例初治急性白血病患儿和20例对照儿童的CYP3A5-6986位点基因型分布;②实时定量PCR法检测病例组及对照组儿童骨髓单核细胞内wt-CYP3A5和SV1-CYP3A5 mRNA的表达水平。结果：①对照组和急性白血病儿童CYP3A5-6986多态性位点存在野生型（CYP3A5*1/*1）、杂合突变型(CYP3A5*1/*3)、纯合突变型（CYP3A5*3/*3）3种基因型;②66例初治急性白血病患儿按基因型分组后对其mRNA表达水平进行检测,3组间的wt-CYP3A5 mRNA差异有显著性意义(P<0.05);③ALL组wt-CYP3A5 mRNA低表达者第1次化疗后的缓解率高于wt-CYP3A5 mRNA高表达者,两者比较差异有显著性意义（P<0.05）;④对两例急性淋巴细胞性白血病患儿的CYP3A5 mRNA表达水平动态监测显示,1例复发前wt-CYP3A5 mRNA表达水平较缓解时升高。另1例wt-CYP3A5 mRNA表达一直处于较低水平,患儿目前仍处于缓解状态。结论：wt-CYP3A5 mRNA表达与白血病患儿的化疗疗效及预后密切相关,动态监测wt-CYP3A5 mRNA表达水平变化有助于判断病情变化。［中国当代儿科杂志,2009,11（7）：549-554］     

��ͯ���԰�Ѫ��SODD��P65���׵ı�Ｐ�ٴ�����

目的探讨儿童急性白血病SODD和P65蛋白的表达及其临床意义。方法2004年3～11月采用免疫组化SABC法,检测华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科住院急性白血病(AL)患儿骨髓涂片中SODD、P65蛋白表达。结果33例AL中,SODD和P65表达阳性率分别为54.5%(18/33)和45.5%(15/33),与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05);25例急性淋巴细胞白血病(ALL)中,SODD和P65表达的阳性率分别为56.0%(14/25)和48.0%(12/25),与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)。ALL高危病例组中SODD阳性表达率为75.0%(12/16),较标危病例组阳性率高,差异有显著性(P<0.05)。33例AL患儿中SODD和P65均为阳性12例,均阴性16例,表达一致符合率为84.8%(28/33),两者的表达呈正相关(P<0.01,r=0.69)。结论SODD和P65均参与了AL的发生发展;SODD过表达与儿童ALL的发生、临床分型以及预后均有密切关系。     

160例儿童急性白血病免疫表型分析

目的　免疫表型可以确定细胞的来源和分化阶段 ,是急性白血病的重要生物学特征。该文了解儿童急性白血病 (AL)抗原表达规律、分布情况并探讨其临床意义。方法　采用流式细胞术直接或间接免疫荧光法检测 1 6 0例儿童AL的免疫表型。结果　 1 6 0例AL中 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 1 1 2例 ,急性髓细胞白血病(AML) 4 8例。 1 1 2例ALL中 ,T系ALL 1 2例 (1 0 .7% ) ;B系ALL(不包括成熟B ALL) 93例 (83.0 % )。ALL中 ,1 3.8%有髓系抗原表达 ,以CD33阳性最常见 ;AML中 ,4 0 %有淋系抗原表达 ,以CD7阳性率最高。儿童AML淋系抗原表达阳性率高于儿童ALL髓系抗原表达 (P <0 .0 1 )。CD1 4在儿童M 4和M 5的表达频率为 77.8%。B系ALL中CD34阳性率 5 8.5 %。AML中 ,CD34的表达频率为 5 5 .3% ,其中M1和M 2的CD34阳性率为 76 .5 % ,高于其它AML病人的CD34阳性率 (4 3.3% ) ,P <0 .0 5。HLA DR抗原在M 3的表达频率为 1 1 .1 % ,低于其它类型AML病人的HLA DR阳性率 (76 .3% ) ,P <0 .0 1。B系ALL中 ,CD34表达与FAB分型、起病时白细胞数、髓外侵润情况均无关 (P >0 .0 5 ) ;CD34-组婴幼白血病发生率 (1 7.6 % )高于CD34+ 组 (4 .2 % ) ,P <0 .0 5。结论　HLA DR阴性对于M3的诊断具有一定参考价值。     

多色流式细胞术在222例儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的　探讨多色流式细胞术在儿童急性白血病 (AL)免疫分型中的应用价值 ,了解儿童AL抗原表达规律和免疫亚型的分布情况。方法　采用CD45/侧散射 (SSC)双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原的分析。结果　 2 2 2例儿童白血病免疫分型可分为 4类 :未分化型占 0 9% ,急性髓细胞性白血病 (AML)占 35 1% ,急性淋巴细胞白血病 (ALL)占5 5 9% ,混合型急性白血病占 8 1%。 12 4例儿童ALL中 ,B淋巴细胞白血病 (B ALL)占 75 8% ,T淋巴细胞白血病 (T ALL)占 2 4 2 %。AML伴淋巴系抗原表达为 2 4 4 % ,主要表达CD7(12 8% ) ,其次为CD19(6 4 % )和CD2 (5 1% )。B ALL及T ALL伴髓系抗原表达分别为 36 2 %及 30 0 % ,主要表达CD13(18 5 % ) ,其次为CD15(11 3% )、CD11b(6 5 % )和CD3 3 (4 3% )。CD117和CD56主要在AML中表达 ,分别为 73 3%和 38 6 % ,而在ALL中表达率极低 ,仅为 2 0 % (P <0 0 1)。胞浆内抗原CD2 2 、CD3 及髓过氧化物酶 (MPO)分别特异地表达在B ALL、T ALL及AML ,并比胞膜抗原检测更为敏感。结论　应用多色流式细胞术几乎能对所有儿童急性白血病进行准确分型 ,对儿童白血病患者的治疗方案选择及预后判断等均有重要价值。