国人常见的两种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变及其临床表现

目的 探讨中国人中两种常见葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因突变与临床表现的关系。方法 应用突变扩增系统（ＡＲＭＳ）法。研究１５例云南籍汉族Ｇ６ＰＤ缺乏症患儿两种常见Ｇ６ＰＤ基因突变,并对其临床表现进行分析,结果 １５例中检出,ｃＤＮＡＧ１３８８Ａ突变９例,ｃＤＮＡＧ１３７６Ｔ突变５例,未定型１例,所有患者都具有急性溶血性贫血,黄疸等临床表现不同程度的血红蛋白尿,Ｇ６酶活性降低,结论 Ｇ６ＰＤ     

脊肌萎缩症临床及基因诊断研究

３０例脊肌萎缩症（ＳＭＡ），其中Ⅰ型１３例，Ⅱ型１７例。临床表现肢体及躯干进行性对称性肌无力及肌萎缩，合并肋间肌麻痹及肌束震颤。血清肌酸磷酸肌酶（ＣＰＫ）４３～２９０ＩＵ／Ｌ。肌电图（ＥＭＧ）特点：静止状态可见纤颤正向电位，轻收缩时运动单位电位时限增宽，重收缩时为单纯相。肌活检可见萎缩肌纤维及正常肌纤维相间分布，周边可见肥大肌纤维，Ⅰ型病例可见成群或成束状萎缩肌纤维。单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测患儿和父母及无亲缘关系的正常人运动神经元存活基因（ＳＭＮ）外显子７缺失。结果：３０例ＳＭＡ中纯合缺失Ⅰ型１１例，Ⅱ型１３例，总缺失率为８０％。患儿父母及正常人共６８例，其中１例患儿母亲为纯合缺失，其余均无纯合缺失。     

系膜增殖性肾小球肾炎患儿α-平滑肌肌动蛋白表达与血脂及血压的关系探讨

目的 观察系膜增殖性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）患儿肾活检标本α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）的表达与临床表现的关系。方法 应用免疫组化技术，结合计算机图像分析系统检测３３例不同血脂和血压水平的ＭｓＰＧＮ患儿肾小球内α－ＳＭＡ的含量改变。结果 ＭｓＰＧＮ伴高脂血症和高血压的患儿肾小球内α－ＳＭＡ含量高于正常血脂和正常血压组（Ｐ ＜０．０５）。结论 高脂血症和高血压可促进ＭｓＰＧＮ患儿肾小球系膜细胞发生表型改变。     

急性白血病MTS1基因缺失及点突变的研究

目的 探讨多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）突变与恶性血液病间的关系,方法 应用聚合酶链反应－单链查象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分别和ＤＮＡ印迹（ｓｏｕｔｈｅｒｍｂｌｏｔ）方法检测３５例急性白血病患儿ＭＴＳ１基因的改变。结果 急性淋巴细胞白血病（ＡＬ）患儿的ＭＴＳ１基因缺失（包括点突变）为２６％（８／３１）,其中纯合子缺失,Ｂ－ＡＬＬ为１６％（４／２５）,Ｔ－ＡＬＬ为６例中有２例,点突变则两型各占１例。结     

肾小球疾病血清内源性洋地黄样物质测定

目的探讨儿童肾小球疾病血清内源性洋地黄样物质的变化规律及临床意义。方法用荧光偏振免疫法测定５２例肾小球疾病患儿（肾病综合征急性发作期１６例，肾病综合征恢复期１６例，肾小球肾炎２０例）及正常对照组儿童２０例血清内源性洋地黄样物质（ＥＤＬＳ）水平，并与临床表现、血及尿中β２微球蛋白（Ｓβ２－ＭＧ）、（Ｕβ２－ＭＧ）、血肌酐（Ｓｅｒ）、尿素氮（ＢＵＮ）进行相关分析。结果肾病综合征和肾小球肾炎患儿血清ＥＤＬＳ水平均显著增高（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０５），肾病综合征恢复期血清ＥＤＬＳ水平恢复正常。血清ＥＤＬＳ水平与患儿的血压、ＳＣｒ、ＢＵＮ．Ｓβ２－ＭＧ、Ｕβ２－ＭＧ浓度呈显著正相关。结论肾小球疾病血清ＥＤＬＳ水平升高，并与水肿、高血压和肾功能损害相关。ＥＤＬＳ在肾小球疾病的发展中起一定作用。     

急性链球菌感染后肾炎患儿血、尿白介素-8的变化和意义

为探讨急性链球菌感染后肾炎（ＡＰＳＧＮ）患儿血、尿白介素－８（ＩＬ－８）的变化和意义。用ＥＬＳＩＡ方法检测３４例ＡＰＳＧＮ患儿急性期和恢复期及１６例对照组儿童血、尿ＩＬ－８浓度。急性期必肾功能衰竭降低１１例,肾功能正常２３例,结果：ＡＰＳＧＮ患儿急性期尿ＩＬ－８水平（５５．８４ｐｇ／ｍｇ肌酐）较恢复期（３２．５５ｐｇ／ｍｇ肌酐）和对照组（１１．２１ｐｇ／ｍｇ肌酐）显著升高。急性期肾功能降低患儿尿Ｉ     

13例重型β地中海贫血的临床观察和基因分析

１３例来自不同家庭的重型β地中海贫血患儿，应用ＰＣＲ技术扩增了其β珠蛋白基因，以中国人最常见的八种β地中海贫血突变探针进行杂交，得到ＣＤ４１－４２（－ＴＴＣＴ）、ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）、－２８（Ａ→Ｇ）、ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）、ＩＶＳ－Ｉ－１（Ｇ→Ｔ）五种突变，八种组合类型。ＣＤ４１－４２、ＣＤ１７纯合子或双重杂合子临床表现明显，贫血程度重，当与－２８复合形成双重杂合子时则减轻。     

单纯疱疹病毒性脑为临床诊断与治疗观察

为探讨单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＶＥ）的诊断，应用间接ＥＬＩＳＡＳ法测定７０例病毒性脑炎患儿脑脊液的ＩｇＭ、ＩｇＧ，同时对１５例患儿的血清进行ＨＳＶ特异性ＩｇＧ的检测；采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法对７０例患儿的脑脊液同时检测ＨＳＶ抗原。结果：脑脊液ＨＳＶ抗原最阳性２０例，ＩｇＭ阳性７８例，ＩｇＧ血清／脑脊液比值〈２０为１２例。对ＨＳＶＥ患儿予以连续静脉滴注无环鸟苷７天，结果治愈，好转２０例（８０％）。提     

增强化学发光酶免疫法测定血清促甲状腺激素方法的建立及初步应用

目的进一步提高血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）检测的敏感性。方法通过正交试验,并经方差分析,获得增强发光酶免疫检测法的最佳实验条件,将其与ＴＳＨ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）试剂盒相结合,建立ＴＳＨ的增强化学发光酶免疫检测法,并用此方法对５９例健康儿童和４９例甲状腺疾病患儿进行了血清ＴＳＨ的检测。结果该方法检测人血清ＴＳＨ的灵敏度为０．０１ｍＩＵ／Ｌ。５９例健康儿童ＴＳＨ的９０％正常值范围为０．７４～８．５３ｍＩＵ／Ｌ;１７例甲状腺功能亢进患儿ＴＳＨ值范围为０．０２～０．４０ｍＩＵ／Ｌ,无一例与正常值重叠;１６例甲状腺功能正常的弥漫性甲状腺肿患儿ＴＳＨ值均在正常范围上限;１６例甲状腺功能低下患儿的ＴＳＨ值均大于３０ｍＩＵ／Ｌ。结论该方法与ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ比较,有良好的相关性,可基本分清甲状腺功能亢进、低下、正常三种状态,适于临床甲状腺功能的评估。     

13例重型β地中海贫血的临床观察和基因分析

１３例来自不同家庭的重型β地中海贫血患儿，应用ＰＣＲ技术扩增了其β珠蛋白基因，以中国人最常见的八种β地中海贫血突变探针进行杂交，得到ＣＤ４１一４２（一ＴＴＣＴ）、ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）、－２８（Ａ→Ｇ）、ＩＶＳ－Ⅱ—６５４（Ｃ→Ｔ）、ＩＶＳ—Ｉ—１（Ｇ→Ｔ）五种突变，八种组合类型。ＣＤ４１—４２、ＣＤ１７纯合子或双重杂合子临床表现明显，贫血程度重，当与－２８复合形成双重杂合子时则减轻。     

苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变的研究

目的了解宁夏地区苯丙酮尿症(PKU)儿童苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变的特征。方法以经新生儿疾病筛查及气相色谱-质谱联用技术确诊的30例宁夏PKU儿童为病例组,30例正常儿童为对照组,应用PCR技术扩增PAH基因的3、5、6、7、11和12,六个外显子,再经单链构象多态性分析和DNA测序分析PCR扩增产物。结果在60个等位基因中检出51个突变基因,检出率85%;六个外显子共检出16种致病突变,包括8种错义突变(R241C、R243Q、R252Q、G 257 V、R359K*、R408Q、R 413 P、Q419R),3种剪接突变(IVS 4-1 GA、Y 204 C、IVS 7+2 TA),3种无义突变(R 111 X、Q160X、Y356X),1种同义突变(V399V)和1种缺失突变(N183del);R243Q突变频率最高,检出率为18.3%,其次是Y 204 C(11.7%)、IVS 4-1 GA(10.0%)、R 111 X(6.7%)和IVS 7+2 TA(6.7%)。病例组中发现Exon 6的N183del(C.547-549del GAA)缺失突变和Exon 11的R359K(C.1078GA)错义突变,为国内首次发现;病例组和对照组中均检出V245V(C.735GA)和Q232Q(C.696AG)两种静止突变,且差异无统计学意义(P0.05)。结论宁夏PKU儿童PAH基因六个外显子最常见的突变类型是错义突变,特别是R243Q;发现中国人群PAH基因的2种新的突变。     

X-连锁低磷性佝偻病的基因突变分析

目的：研究X-连锁低磷性佝偻病（XLH）患儿致病基因的突变频率和突变类型,探讨存在突变热点的可能性及基因型与临床表型的关系。方法：回顾性分析10例XLH患儿的临床资料,评估其基因突变类型及其与疾病严重程度之间的关系。结果：10例XLH患儿均检测到PHEX基因突变,其中6例为错义突变,2例为拼接位点突变,1例为框移突变,1例为无义突变。还发现了两个新突变,即c.2048T>C 和IVS14+1delAG。PHEX基因的突变类型与矮小程度、腿弯程度之间没有关联（分别P=0.571、0.467）;基因的突变位置与矮小程度、腿弯程度之间也没有关联（分别P=0.400、1.000）。结论：错义突变是XLH患儿最常见的突变类型;c.2048T>C 和IVS14+1delAG是PHEX基因的两个新突变。PHEX基因的突变类型和突变位置与疾病的严重程度无相关性。     

Two novel mutations of SRD5A2 gene in Indonesian siblings with clinical 5-alpha-reductase deficiency

Steroid 5-alpha-reductase 2 deficiency is an autosomal recessive disorder with clinical spectrum ranges from a male phenotype with hypospadia to a female phenotype with normal wolffian structures. Over 50 different mutations of SRD5A2 gene has been described in affected patients and several mutations were detected in specific populations. DNAs of two 46,XY DSD Indonesian siblings, aged 13 and 18 years old, with clinically suspected of 5-alpha-reductase deficiency and their mother were analysed for molecular defects of SRD5A2 gene. Different from other reports, in our series three mutations were found in each patient. Two novel mutations were detected in these patients and their mother, which are p.Gly34fs and c.699-1G>T. The other mutation detected was c.680G>A or p.Arg227Gln, which commonly described in Far East Asian population. Whether the p.Arg227Gln mutation is considered a polymorphism or a mutation in Indonesian population warrants further study.     

伴皮层下囊肿的巨脑性白质脑病一家系MLC1基因突变分析

收集伴皮层下囊肿的巨脑性白质脑病(MLC)先证者及其父母的临床资料,采用聚合酶链反应和DNA 直接测序法进行MLC1 基因突变检测。患儿临床表现为运动发育迟缓、巨颅,头颅MRI 扫描显示弥漫性脑白质肿胀,伴双侧额顶部皮层下囊肿。基因测序结果发现患儿携带MLC1 基因2 个杂合突变:第3 外显子的错义突变c.217G>A(p.Gly73Arg)和第9 内含子的剪接位点突变c.772-1G>C in IVS9-1。患儿的父母均为c.772-1G>C in IVS9-1 杂合突变携带者,无临床症状。可推测患儿c.772-1G>C in IVS9-1 突变来源于父母;c.217G>A(p.Gly73Arg)为新生突变,为国内外首次报道。     

2例X-连锁低血磷性佝偻病患者PHEX基因新发突变的研究

目的研究2例X-连锁低血磷性佝偻病(XLH)患儿及家系磷酸盐调节基因(PHEX)的突变类型,以明确其遗传学病因。方法回顾性分析2例XLH患者临床资料,应用高通量测序技术从基因组水平对先证者的XLH致病基因PHEX进行检测,并应用PCR-Sanger测序法对突变基因的家系分布进行验证。结果 2例患儿均检测到PHEX基因新发突变,1例为移码突变c.931dupC,导致翻译提前终止,产生截短蛋白p.Gln311Profs*13;另1例为剪接位点突变IVS14+1GA,导致外显子15跳跃,产生不完整的氨基酸链。2例患儿父母的基因表型均正常。结论 c.931dup C和IVS14+1GA是PHEX基因的两个新突变,可能是XLH新的致病性突变。     

糖原累积病Ⅲ型十例AGL基因突变研究

目的 研究糖原累积病Ⅲ型(glycogen storage diseases type Ⅲ,GSD Ⅲ)患者糖原脱支酶AGL基因突变情况.方法 采用PeR、DNA直接测序法,对临床表现为肝大、低血糖、生长落后、运动耐力下降的10例GSDⅢ患者的糖原脱支酶基因进行突变检测.检出突变的片段再经DNA双向测序证实.采用限制性内切酶片段长度多态性和荧光PCR结合基因扫描方法证实5个新突变.结果 10例患者中共检出13种突变类型,包括4种剪切突变:IVS6+1G>A、IVS6-1G>A、IVS14+1G>T、IVS26-2A>C;5种无义突变:R469X、R864X、S929X、R977X、Y1428X;3种缺失突变:c.408-411delTTTG、c.2717-2721delAGATC、c.2823delT;1种插入突变:c.4234insT.除IVS14+1G>T、R864X和R977X,其余10种均未见报道过.限制性内切酶片段长度多态性分析证实了3个新剪切突变,荧光PCR结合基因扫描方法证实2个缺失突变的缺失碱基数.2例患者仪检出1个致病突变,其余患者均明确有2个致病突变,突变检出率为90%.IVS14+1G>T突变频率最高,占25%.结论 10例GSDⅢ型患者的糖原脱支酶基因突变呈高度异质性,发现13种突变,其中10种是新突变,IVS14+1G>T是较常见的突变类型.     

哮喘儿童白细胞介素13基因型与表型的关联研究

目的探讨哮喘儿童白细胞介素13(IL-13)Arg130Gln基因型与血清总IgE、IL-13水平及过敏原表型之间的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对130例哮喘患儿和100例健康对照儿童进行IL-13Arg130Gln基因多态性的检测,并用酶免法检测血清总IgE、IL-13水平和空气过敏原。结果基因型分布及等位基因频率哮喘组与对照组比较差异均无显著性,哮喘组突变型个体的Log10IL-13水平高于未突变型个体的水平(P<0.05),哮喘组突变纯合型个体的Log10IgE水平高于突变杂合型及未突变型个体的水平(P<0.05),哮喘组及对照组突变型与未突变型的过敏原阳性率比较差异均无显著性。结论IL-13Arg130Gln突变不是中国长春地区儿童哮喘的易感基因,但此突变可能与血清IL-13蛋白质水平升高有关,突变纯合型可能与血清总IgE水平相关联。     

Gps mutations in Chilean patients harboring growth hormone-secreting pituitary tumors

Hypersecretion of GH is usually caused by a pituitary adenoma and about 40% of these tumors exhibit missense gsp mutations in Arg201 or Gln227 of the Gs, gene. We studied 20 pituitary tumors obtained from patients with GH hypersecretion. One tumor was resected from an 11 year-old boy with a 3 year history of accelerated growth, associated with increased concentrations of serum GH and IGF-I, which were not suppressed by glucose administration. The remaining 19 tumors were obtained from adult acromegalic patients, who had elevated baseline serum GH levels that did not show evidence of suppression after administration of glucose. The gsp mutations were studied by enzymatic digestion of the amplified PCR fragment of exon 8 (Arg201) and exon 9 (Gln227) with the enzymes NlaIII and NgoAIV, respectively. The tumors obtained from the boy and from nine of the 19 patients with acromegaly exhibited the gsp mutation R201H. None of the tumors had the Gln227 mutation. The gsp positive patients tended to be older, had smaller tumors, and had preoperative basal serum GH levels which were significantly lower (21 +/- 6 vs 56 +/- 16 microg/l, p<0.05) than the gsp negative patients. In this study, we documented the presence of a gsp mutation in Arg201 in a boy with gigantism and in approximately half of 19 Chilean adult patients with acromegaly, similar to other populations.     

散发性激素耐药型肾病综合征患儿30例足细胞基因突变分析

目的分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)儿童足细胞基因突变及其特点。方法研究对象为30例散发性SRNS患儿和50例尿检正常的健康志愿者。采用PCR扩增NPHS1、NPHS2和CD2AP基因全部外显子及其周围的部分内含子,WT1基因外显子8和9及其周围的部分内含子;应用DNA序列直接测定法对其PCR产物进行测序。结果在10例应用激素和免疫抑制剂治疗肾病无缓解的SRNS患儿中,发现1例携带WT1基因杂合突变——1180C>T(R394W),1例携带NPHS1基因复合杂合突变——2677A>G(T893A)和*142T>C,1例携带CD2AP基因杂合突变IVS13-137G>A。在20例应用激素或免疫抑制剂治疗肾病缓解的SRNS患儿中,发现4例患儿携带NPHS1基因单杂合突变——928G>A、IVS8+30C>T、IVS21+14G>A和IVS25-23C>T,1例患儿携带CD2AP基因单杂合突变(IVS7-135G>A)。结论对激素和免疫抑制剂均耐药的SRNS患儿需进行足细胞基因突变分析。