IGF-ⅠR、IGF-ⅡR反义基因对SMMC-7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的 研究胰岛素样生长因子I型及Ⅱ型受体（IGF－ⅠR、IGF-ⅡR）反义基因对SMMC－7721肝癌细胞生物学行为的影响。方法 应用反义技术，在已转染了IGF－Ⅰ R反义基因的肝癌SMMC－7721（7721－IGF－I R－AS）细胞基础上，继续利用IGF-ⅡR反义基因真核表达系统，通过DOTAP脂质体介导的转染技术，将IGF－ⅡR反义基因导入该细胞，经G418及潮霉素双重筛选获得稳定表达IGF－ⅠR、IGF-ⅡR反义基因的7721－IGF－R－AS细胞。采用电镜、电镜观察形态学变化，双层软琼脂克隆形成实验、MTT细胞生长曲线；在软琼脂培养基中的生长能力降低（P＜0．01）；在裸鼠体内的致瘤能力也降低（P＜0．05）；但细胞生长曲线与对照组比较则无明显差异。结论 IGF－ⅠR、IGF-ⅡR反义基因对SMMC－7721肝癌细胞的恶性行为有明显抑制作用。利用反义技术干预肝癌细胞生长因子受体基因表达可能给肝癌的基因治疗提供新的途径。     

IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ受体反义基因对SMMC-7721肝癌细胞株增殖能力的影响

目的；研究胰岛素样生长因子Ⅰ受体、Ⅱ受体（IGF－ⅠR，IGF－ⅡR）反义基因对SMMC－7721细胞体外增殖能力的影响。方法：应用反义技术，在已将IGF－ⅠR反义基因转染入SMMC－7721肝癌细胞株的基础上（获得ⅠR－AS细胞），继续利用IGF－ⅡR反义基因真核表达系统，通过DOTAP^TM脂质体介导的转技术，将IGF－ⅡR反义基因导入该细胞，经G418及潮霉素双重筛选获得稳定表达IGF－Ⅰ,IGF－ⅡR反义基因的SMMC－7721细胞（Ⅰ、ⅡR－AS细胞）。结果：光镜，电镜下反义转染细胞形态学上肿瘤性有一定减弱；在软琼脂培养基中生长能力低下（P＜0．01），反义G418抗性转染细胞克隆形成能力低下（P＜0．05）；在细胞生长曲线上与对照组相比有轻度下降趋势。结论：IGF－ⅠR，IGF－ⅡR反义基因对SMMC－7721肝癌细胞株的恶性增殖有明显抑制作用。     

反义IGF—1R基因对肝癌细胞生长的抑制作用

目的：研究反义ＩＧＦ－ＩＲ基因对肝癌细胞株７７２１细胞生长的抑制作用。方法：利用基因治疗的反义技术,通过脂质体介导将ＩＧＦ－ＩＲ正,反义基因直核表达载体导入人肝癌细胞株,ＳＭＭＣ－７７２１,经潮霉素筛选阳性克隆后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期,凋亡,ＭＴＴ法检测细胞生长及软琼脂克隆形成试验。结果：ＩＧＦ－ＩＲ反义细胞与７７２１细胞ＩＧＦ－ＩＲ正义细胞在前６ｄ生长真挚无明显变化,第７天后反义ＩＧＦ     

人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体反义基因对肝癌细胞恶性表型的影响

目的 研究人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体（IGF-ⅡR）反义基因对SMMC-7721人肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 构建IGF-ⅡR正、反义基因真核表达质粒,用磷酸钙-DNA共沉淀的方法,导入SMMC-7721人肝癌细胞株,经G418培养基筛选稳定的抗性细胞。采用Northern杂交检测对转染细胞内源性IGF-ⅡR基因转录的抑制,观察转染细胞克隆形成率,细胞生长曲线,软琼脂生长及裸鼠致瘤能力的变化。结果 IGF-ⅡR反义基因转染肝癌细胞的内源性IGF-ⅡR基因转录受到有效抑制,转染细胞克隆形成率明显降低,并失去在软琼脂上生长的能力,裸鼠致瘤性明显降低,但细胞生长曲线无明显变化。结论 IGF-ⅡR反义基因可以有效阻断IGF-Ⅱ至IGF-ⅡR的自泌/旁泌生长刺激信号环路,一定程度地抑制肝癌细胞的恶性表型。     

反义IGF—Ⅰ寡核苷酸对肝癌细胞的影响

反义寡核苷酸 (ＡＳＯＮ)技术是通过人工合成一寡核苷酸片段特异性结合靶基因或基因表达调节蛋白 ,从而干扰基因的复制、转录和翻译过程。胰岛素样生长因子 -Ｉ(ＩＧＦ-Ｉ)是许多肿瘤细胞赖以生长的细胞因子 ,ＩＧＦ -Ｉ在癌的发生发展中起重要作用 ,它具有促进细胞有丝分裂、维持癌细胞恶性转化和逃逸凋亡作用 ,肿瘤细胞通过自分泌方式过度产生ＩＧＦ -Ｉ ,从而激活ＩＧＦ -Ｉ受体 ,而使自身不断生长。因此ＩＧＦ -Ｉ成为反义核酸治疗的良好靶分子。1　材料和方法1 1　材料　 (740 2 )肝癌细胞株购自北京肿瘤研究所 ,脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃ…     

反义IGF-I R基因对肝癌细胞生长的抑制作用

目的:研究反义IGF-IR基因对肝癌细胞株7721细胞生长的抑制作用.方法:利用基因治疗的反义技术,通过脂质体介导将IGF-IR正、反义基因真核表达载体导入人肝癌细胞株SMMC-7721,经潮霉素筛选阳性克隆后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,MTT法检测细胞生长及软琼脂克隆形成试验.结果:1GF-IR反义细胞与7721细胞IGF-IR正义细胞在前6 d生长趋势无明显变化,第7天后反义IGF-IR细胞生长减慢.反义IGF-IR基因细胞G1/G 2期细胞明显增加,为63.9%,明显高于7721细胞(49.8%);S期减少(1 9.3%),细胞凋亡增加(5.89%),不能在软琼脂中生长,而7721细胞及IGF-I R正义细胞在软琼脂中生长良好.结论:反义IGF-IR基因对肝癌细胞株7721生长具有明显抑制作用.     

Ⅱ型胰岛素样生长因子受体（IGFⅡ—R）在胰腺癌组织中的表达研究

目的研究Ⅱ型胰岛素样生长因子受体(IGFⅡ-R)在胰腺癌及癌旁组织的表达水平及其临床意义。方法应用免疫组化法研究38例胰腺癌及其癌旁组织IGFⅡ-R的表达水平，结合临床进行半定量的统计学分析。结果IGFⅡ-R在胰腺癌组织中的表达指数为2.366±1.098，癌旁组织为1.233±0.971，两者比较有显著性差异(P＜0.05)，其高表达与肿瘤大小、淋巴结转移及预后有明显相关性。结论作为肿瘤生长的重要调控因子，IGFⅡ-R是术后判断胰腺肿瘤预后的重要指标。     

养阴降糖片对糖尿病大鼠IGF—Ⅱ的影响

目的：通过养阴隆糖片对实验性糖尿病大鼠ＩＧＦ－Ⅱ影响的观察，探讨其治疗作用的机理；方法：随机分为正常对照组、模型对照组、养阴降糖片组和达美康组，前两组正常饮水、喂食，养阴降糖片组按４．６６ｇ生药／ｋｇ给药，达美康组按１００ｍｇ／ｋｇ给药，比较给药前后实验性糖尿病大鼠血糖和ＩＧＦ－Ⅱ的变化情况；结果：养阴降糖片能明显提高糖尿病大鼠ＩＧＦ－Ⅱ的水平及降低血糖值；结论：养阴降糖片治疗糖尿病的机理可能与升     

胰岛素样生长因子Ⅱ受体基因微小卫星不稳定性在肝细胞癌 …

目的：了解胰岛素样生长因子Ⅱ受体（ＩＧＦⅡＲ）微小卫星不稳定性（ＭＩ）在肝细胞癌的表现。方法：用ＱＩＡａｍｐ方法提取肝细胞癌ＤＮＡ,选择７对引物,经ＰＣＲ扩增,走ＤＮＡ序列胶电泳,测定其ＭＩ的阳性率及有无ＩＧＦⅡＲ基因的突变。结果：肝细胞癌ＭＩ阳性率４４．１％（１５／３４）,癌旁组织细胞ＭＩ阳性率２３．５％（８／３４）,二者之间有明显差异（ｐ〈０．０５）。ＩＧＦⅡＲ基因有丢失、插入、替换等突变。结     

肝癌、癌旁肝组织IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体及CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达

本文采用免疫组织化学(ABC)法、Western印迹法和Northern印迹法从细胞、蛋白及转录水平观察17例肝癌及癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达。结果表明,肝癌组织中3种基因产物的表达水平显著高于正常肝组织;癌旁肝组织中IGF-Ⅱ和IGF-Ⅱ受体的表达水平显著高于肝癌组织;肝癌及癌旁肝组织IGF-Ⅱ基因呈胚胎型表达特点。但是,肝癌组织中CSF-1受体基因表达则显著高于癌旁肝组织。由此提示3种基因产物异常的过量表达与肝癌细胞自分泌生长刺激机制有关。     

LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验：将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验：构建裸鼠异...     

双侧海马注射神经肽Y Y2受体反义基因对大鼠学习记忆影响的初步探讨

目的：探讨神经肽YY2(NPY Y2)受体在大鼠学习记忆中的作用。方法：双侧海马插管，注射Y2受体的反义、错义寡核昔酸或生理盐水，采用跳台法记录训练期的错误次数(学习成绩)、记忆测试期的潜伏期和错误次数(记忆成绩)。结果：注射Y2受体反义寡核苷酸组大鼠训练期的错误次数较对照组无显著性差别，而记忆测试期的潜伏期较对照组显著缩短，错误次数显著增加，提示该组大鼠记忆能力受到显著损害。结论：NPY Y2受体参与了大鼠的记忆形成过程。     

二甲双胍对肝癌细胞HCCLM3生物学行为的影响

目的 研究二甲双胍对人肝癌细胞株HCCLM3增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 体外培养人肝癌细胞株HCCLM3,以不同浓度的二甲双胍干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,RT-PCR检测Bax及Bcl-2基因表达,细胞划痕实验观察细胞迁移情况.结果 随着二甲双胍浓度增高和作用时间延长,对HCCLM3细胞增殖抑制率较对照组显著提高(P＜0.05);浓度达到10 mmol/L可抑制HCCLM3细胞迁移能力;作用48h后HCCLM3细胞中Bax表达呈现明显递增趋势,而Bcl-2表达呈现递减趋势.结论 二甲双胍能够以浓度及时间依赖性的形式抑制肝癌细胞HCCLM3细胞的增殖及迁移活动,并能够影响其凋亡相关基因Bax与Bcl-2的表达.     

AⅡ1R基因1166位点多态性与AⅡ受体拮抗剂缬沙坦降压疗效关系的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ-1型受体(AⅡ1R)基因A 1166/C多态性与国人应用AⅡ受体拮抗剂缬沙坦降压疗效的关系,以利于结合基因分型指导临床合理用药的可行性. 方法64例轻、中度原发性高血压患者住院期间停止服用任何降压药物5个半衰期后,测量患者基础血压,并抽取血样,应用限制性内切酶酶解聚合酶链式反应(PCR-RFLP)的方法检测AⅡ1R基因型.然后给予缬沙坦80 mg,1次/d,连续服用10天,分别于第7、10天上午900测量患者卧位、左上臂血压. 结果CC基因型因其突变率极低,本次试验未发现,故未予以分组.①本组原发性高血压患者AC基因型频率为23.4%,C等位基因频率为11.7%. ②入选64例原发性高血压患者,服药后,显效52例,有效10例;无效2例,已剔除,未参与统计.AC基因型组有效率为93.33%,AA基因型组有效率为97.96%,总有效率为96.88%,AC基因型组与AA基因型组之间有效率无明显差异(P>0.05).③患者服用缬沙坦后第7天、第10天AC基因型组收缩压下降值均较AA基因型组有极显著差异(P<0.01).④患者服用缬沙坦后第7天,AC基因型组舒张压下降值较AA基因型组差异显著(0.01<P<0.05).而第10天时两基因型组舒张压下降值差异不明显(P>0.05).⑤患者服用缬沙坦后第7天,AC基因型组脉压下降值较AA基因型组差异显著(0.01<P<0.05),第10天时则差异极显著(P<0.01). 结论缬沙坦降低AC基因型组原发性高血压患者收缩压、脉压的疗效要优于AA基因型组;在早期其降低AC基因型组原发性高血压患者舒张压的疗效优于AA基因型组,10天后则差异不明显.缬沙坦对于AC基因型组原发性高血压患者的靶器官具有更好的保护作用(更有效的降低脉压).基于此,运用基因分型可以更好的指导临床合理用药.     

过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响

目的：探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法：构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（western blotting）检测过表达效率,细胞增殖实验（CCK-8）检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达LRRFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测与上皮间质转化（EMT）相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达;免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联（CoIP-MS）法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白。结果：过表达LRRFIP1促进了Huh7细胞的增殖（P<0.001）和克隆形成能力（P<0.001）,抑制了细胞凋亡（P<0.01）;过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少,S期增加（P<0.001,P&l...     

沉默IGF1和EGF二受体基因的肝癌HepG2细胞株的抗瘤放疗增敏及机制

目的：探讨同时沉默IGF1与EGF二受体基因的抗瘤放疗增敏以及其病理机制。方法按照特定的方式创造出靶向EGFR、IGF1R以及两受体的小分子干扰RNA,并在一定的条件下设定出同所有基因不产生同源的阴性对照质粒,对其进行转染超过48 h之后选择使用射线对肝癌HepG2细胞株进行照射。在成克隆的研究过程中对细胞的存活分数进行检测,选择使用单击多靶模型与线性二次函数模型两种方式共同制定出细胞存活曲线,进而获取放射生物学参数DO、Dq、N以及α、β、SF2的数值。结果将两个组之间进行对比我们可了解到,其明显控制了细胞增殖以及起到诱导细胞死亡的作用,减缓G1／S期的发展过程,bcl－2与cdk2两者之间呈现出明显的下降趋势,p21与bax则呈上升趋势。并且同时沉默EGFR与IGF1R组与对照组细胞的D0数值则是0.588与2.0704 Gy;Dq的数值则是0.5625与2.0307 Gy;a值则是0.515与0.0216 Gy－1;SF2值则是0.22与0.619。这一组的DO、Dq以及SF2值全部呈下降趋势,α值则呈上升趋势。结论同时沉默EGFR与IGF1R基因对于肝癌HepG2细胞株增殖以及死亡起到干扰的效果,并且病理机制也同bcl－2与cdk2等有着直接的联系,结合多种方法对此疾病进行治疗是目前发展前景比较广阔的方式,可在临床上进行推广及使用。