安宫牛黄丸对大鼠脑出血后MMP-9表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）后脑组织基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法将sD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组,每组5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察48h时点各组大鼠血脑屏障通透性变化,RT．PCR分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9mRNA表达的影响,WesternBlot分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9蛋白表达的影响。结果大鼠实验性脑出血后48hMMP-9阳性细胞数及伊文思蓝渗出量增多,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达增加;安宫牛黄丸处理后,MMP-9阳性细胞数减少（P〈0．01）,伊文思蓝渗出量降低（P〈0．01）,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达下降。结论脑出血后MMP-9表达与血脑屏障通透性密切相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后MMP-9表达,减轻脑水肿。     

大鼠创伤性脑损伤后Nrf2通路相关因子的表达

目的 观察大鼠创伤性脑损伤后脑组织内核因子E2相关性因子2(Nrf2)及该通路下游分子血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的表达.方法 采用改良Feeney自由落体模型制作大鼠脑外伤模型,对照组仅开骨窗不制作脑外伤.采用Western Blot法检测脑外伤24h后损伤灶周围脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量,RT-PCR法检测HO-1 mRNA、NQO1mRNA水平.结果 脑外伤后脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量显著增加,HO-1 mRNA、NQO1 mRNA水平亦明显增加(均P＜0.01).结论 脑外伤后脑组织内Nrf2通路被激活.     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后TNF-α表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）后肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,HE染色计数各组48h血肿周围炎性细胞个数,RT-PCR分析各组TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组TNF-α蛋白的表达变化。结果安宫牛黄丸治疗明显减少大鼠实验性脑出血后血肿周围炎性细胞个数,抑制脑出血后TNF-αmRNA,TNF-α蛋白的表达。结论安宫牛黄丸能够有效降低大鼠脑出血后TNF-α的表达,对脑出血后的炎症反应具有抑制作用。     

安宫牛黄丸全方及简方对大鼠脑出血损伤的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血损伤的保护作用,并比较安宫牛黄丸全方和简方(不含朱砂和雄黄)的作用差异。方法采用大鼠尾状核内注入胶原酶诱发脑出血模型,术后3 h灌胃给药1次,每天给药1次,连续3 d,观察安宫牛黄丸全方及简方对脑出血大鼠神经功能、脑系数、脑含水量及血液流变学等指标的影响。结果安宫牛黄丸全方(0.2、0.4 g/kg)及简方(0.32 g/kg)能明显改善脑出血大鼠的神经功能障碍,降低脑系数和脑血肿周围脑组织的含水量,提高红细胞变形能力。结论安宫牛黄丸全方及简方对大鼠脑出血损伤有保护作用,安宫牛黄丸全方的作用优于简方,但并无明显的统计学差异。     

安宫牛黄丸对小鼠肝脏细胞色素P450酶系统亚型RNA表达的影响

目的探索安宫牛黄丸对小鼠肝脏细胞色素P450酶系亚型mRNA表达的影响。方法 将健康雄性小鼠随机分为3组:空白对照组、安宫牛黄丸低剂量组(1.5 g/kg)、安宫牛黄丸高剂量组(3.0 g/kg),灌胃给药8d,每天1次,末次给药后1h断头取肝脏。提取、纯化总RNA,采用real-timeRT-PCR方法测定肝脏细胞色素P450酶系部分亚型mRNA的表达。结果安宫牛黄丸高剂量增加Cyp1a1 mRNA的表达;低、高剂量均明显增加Cyp2a4、Cyp3a11、Cyp4a10 mRNA的表达;Cyp7b1 mRNA的表达随给药剂量的增加而减少;而对Cyp2e1、Cyp2j5 mRNA的表达几乎没有影响。结论安宫牛黄丸可诱导小鼠肝脏Cyp1a1、Cyp2a4、Cyp3a11、Cyp4a10 mRNA的表达;抑制Cyp7b1mRNA的表达;但对Cyp2e1、Cyp2j5的表达几乎无影响。     

安宫牛黄丸对大鼠缺血性脑损伤后HSP70表达的影响

目的:探讨安宫牛黄丸对大鼠脑缺血后脑组织内热休克蛋白70(HSP70)表达的影响及意义.方法:线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,将55只SD大鼠随机分为假手术组(5只)、缺血对照组(25只)、安宫牛黄丸治疗组(25只),缺血组和治疗组再各分为12h、24h、3d、7d、14d共5个亚组,每个亚组5只,治疗组大鼠给予安宫牛黄丸0.5g/2mL灌服,1天1次,直到各亚组时间点;对照组及假手术组同时予等量生理盐水灌服.观察各组大鼠脑梗死体积、组织形态学变化,并免疫组化方法检测HSP70蛋白含量.结果:安宫牛黄丸治疗组较缺血组梗死灶体积明显减少(P<0.05),缺血组HSP70阳性细胞逐渐增多,于3天达最高峰,然后逐渐降低.在缺血再灌注3天后开始,安宫牛黄丸治疗组HSP70阳性细胞较缺血对照组明显增多(P<0.05).显微镜下见HSP70细胞主要表达于缺血半暗带区.结论:安宫牛黄丸治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与增加HSP70表达有关.     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量的影响

目的研究安宫牛黄丸对大鼠脑出血后脑组织的保护作用。方法将SD大鼠随机分为安宫牛黄丸治疗组(治疗组)、脑出血组(ICH组)、假手术组、正常对照组。每组分为6h、12h、24h、48h、72h等5个时点,每个时点5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察各组的神经功能状态、血肿周围脑组织含水量及形态学的变化。结果治疗组12h~72h各时点神经功能障碍评分均低于ICH组(P<0.05)。治疗组12h~72h各时点脑组织含水量均低于ICH组(P<0.01)。结论安宫牛黄丸能明显降低大鼠脑出血后脑含水量,同时神经功能障碍明显改善,提示安宫牛黄丸对治疗脑出血后脑水肿有一定的作用,其作用机制有待进一步探讨。     

大鼠局灶性脑外伤后脑组织糖皮质激素受体表达变化的实验研究

目的 探讨脑外伤后早期脑组织GR及其mRNA表达变化的时相特点.评价脑外伤治疗过程中应用GC的合理性.方法 采用Feeney'S脑损伤模型,致伤方式制作大鼠局灶性脑损伤模型,应用免疫组化和RT-PCR观察外伤后早期不同时段GR及其mRNA在脑组织中表达情况.结果 与对照组相比外伤后GR及其mRNA在脑组织表达均明显降低(P＜0.05).结论 脑外伤后早期脑组织GR呈低表达,本研究结果不支持在脑外伤治疗过程中使用激素.     

安宫牛黄丸对实验性脑出血大鼠血肿周围组织中MMP-9和AQP-4蛋白表达的影响

目的 研究安宫牛黄丸对实验性脑出血大鼠血肿周围组织中基质金属蛋白酶(MMP-9)和水通道蛋白-4( AQP-4)表达的影响.方法 采用大鼠尾状核内注入胶原酶诱发脑出血模型,术后3 h灌胃给予安宫牛黄丸(0.2、0.4g/kg)1次,术后连给3 d,每天给药1次,3 d后采用心脏灌流多聚甲醛固定后取脑,制作石蜡切片,应用...     

水通道蛋白4在高原脑水肿大鼠脑组织中的表达变化及意义

[目的]探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)与高原脑水肿之间的关系.[方法]制作大鼠高原缺氧损伤模型,测脑组织含水量,采用RT-PCR、免疫组织化学、Western blotting技术测定脑组织缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化.[结果]缺氧损伤后,脑组织含水量增加,水肿明显;HE染色显示部分神经元肿胀或浓缩;缺氧24 h后,AQP4 mRNA和蛋白表达量均明显增加(P＜0.05).[结论]AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中可能发挥了重要作用.     

酗酒对重型脑外伤患者脑内脱辅基脂蛋白E水平的影响及意义

目的探讨酗酒对重型脑外伤患者脑内脱辅基脂蛋白E（apoE）合成的影响及意义。方法采用RT—PCR法检测17例酗酒患者（研究组）和22例非酗酒患者（对照组）挫伤脑组织apoEmRNA的表达。并采用ELISA法测定两组患者脑外伤后不同时期脑脊液apoE含量。结果研究组脑组织apoEmRNA的表达水平及脑脊液apoE的含量较对照组降低（P〈0．05）。结论长期酗酒可使脑外伤后脑内apoEmRNA的表达水平降低,从而抑止脑内apoE的合成和分泌。     

亚低温降低创伤后脑组织炎症反应的实验研究

【目的】研究亚低温在外伤致脑组织炎症反应中的治疗作用。【方法】液压冲击法建立实验动物脑创伤模型，分创伤组和亚低温治疗组两组，亚低温治疗组动物接受冰袋全身降温处理；RT-PCR及Western blotting法检测环氧化酶-2（COX-2）mRNA及蛋白水平表达，ELISA法检测前列腺素E2（PGE2）水平。【结果】创伤组脑组织COX-2 mRNA、蛋白表达水平于伤后早期明显升高，第3天达高峰，此后逐渐降低，其反应产物PGE2出现相同变化趋势。亚低温治疗组脑组织COX-2 mRNA、蛋白表达，及其产物PGE2水平与创伤组伤后同时期比较降低明显，差异具有统计学意义（P〈0．05）。【结论】亚低温可明显降低外伤后脑组织炎症因子的产生和释放，降低炎症反应程度。     

颅脑创伤在载脂蛋白E基因影响脑电活动中的诱发作用

目的探讨颅脑创伤是否在载脂蛋白E基因(apolipoprotein E,APOE)对脑电活动的影响当中起诱发作用。方法收集118例轻-中型创伤性脑损伤患者的临床资料和40例正常成人的相关信息,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测APOE基因型。在伤后1～3 d,对所有创伤性脑损伤患者进行脑电图检测;在清醒、安静、闭目、血糖正常状态下对所有正常成人进行脑电图检测;采集所有研究对象的定量脑电数据。结果40例正常成人中,APOEε2、APOEε3、APOEε4基因型之间定量数据差异均无统计学意义(P=0.097);118例创伤性脑损伤患者中,脑电活动在APOEε2、APOEε3、APOEε4基因型之间差异有统计学意义(P=0.008);与APOEε3携带者比较,APOEε4携带者的慢活动明显增多,而APOEε2携带者的慢活动相对减少。结论携带不同APOE基因的正常成人脑电活动无差异;在颅脑创伤的诱发下,APOE对脑电活动的影响则表现出亚型特异性;APOEε4对颅脑创伤后的脑电活动带来负面影响,APOEε2则对创伤后的脑功能具有保护作用。     

选择性亚低温对脑外伤大鼠脑组织Fas-L基因表达的影响

目的研究选择性亚低温治疗大鼠脑外伤时对脑组织Fas—L基因表达的影响。方法72只大鼠随机分为假手术组、亚低温组和常温对照组。采用改进的Feeney自由落体法制作重型外伤性颅脑损伤模型,局部降温法在伤后30min内达到亚低温目标并保持6h,RT．PCR检测3组大鼠伤后不同时间点脑组织Fas—L基因表达。结果亚低温组大鼠在损伤后不同时间点（6h,24h,48h和72h）脑组织的Fas—LmRNA的相对含量分别为0．54±O．07、0．47±0．06、0．41±0．06、0．67±0．08,常温对照组分别为1．53±0．21、0．914-0．11、1．33±0．15、1．56±0．171．53,相同时间点两组间比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论亚低温对大鼠外伤性颅脑损伤急性期具有降低Fas-LmRNA的作用。     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的了解脑损伤后热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０, ＨＳＰ７０）蛋白质及 ｍＲＮＡ在脑干局部的改变,及其对维持 脑干生命中枢功能的作用。方法用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型,免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤 后 １、３、６、１２ ｈ及损伤摔死组脑于 ＨＳＰ７０的数量和分布变化;逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ水平。结果在脑损伤 １５ ｍｉｎ后脑干 ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高, ＨＳＰ７０蛋白质需 ３～６ ｈ才大量表达;损伤后 猝死的鼠脑中仅见 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ升高,ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论脑损伤后 ＨＳＰ７０合成迅速增加,清除损伤 因素,维持自稳状态;当损伤严重时,应激蛋白质的合成障碍,抗损伤的保护机制不能发挥,脑干生命中枢的功能紊 乱,生命丧失。因此, ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ－蛋白质分离可作为神经细胞致死性损伤的标志。     

神经干细胞移植联合PEP-1-SOD1对颅脑损伤大鼠神经功能恢复的影响

目的:探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植联合PEP-1-SOD1对颅脑损伤后大鼠神经功能恢复的影响?方法:SD雄性大鼠80只,建立颅脑损伤模型后随机分为4组:对照组(损伤处注入生理盐水)?NSCs移植组(损伤处注入NSCs悬液)?SOD1组(损伤处注入PEP-1-SOD1蛋白)及NSCs+SOD1组(损伤处注入NSCs 悬液+PEP-1-SOD1蛋白)?4 d后采用定量PCR及Western blot法分别检测小鼠脑组织中AQP4基因表达及蛋白合成变化;分别于损伤后1?3 d和1?2?3?4周行Bederson评分,损伤后23~28 d行Morris水迷宫试验对大鼠运动神经功能进行评价;伤后第4周取材行病理切片BrdU 免疫组织化学染色?结果:脑损伤后4 d,对照组脑损伤周围组织AQP4及其mRNA的表达高于NSCs移植组及SOD1组,NSCs移植组及SOD1组均高于NSCs+SOD1组(P < 0.05)?分别于损伤后1?3 d及1?2?3?4周行Bederson评分显示4周时各组大鼠Bederson评分均低于24 h,并且4周时Bederson评分NSCs+SOD1组低于对照组(P < 0.05)?Morris 水迷宫试验结果显示NSCs+SOD1组神经功能改善较对照组明显(P <0.05)?免疫组化染色结果显示NSCs+SOD1组大鼠损伤灶脑组织中的BrdU 阳性细胞数高于NSCs移植组?SOD1组和对照组(P <0.05)?结论:神经干细胞移植可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能,联合应用PEP-1-SOD1有协同效果?     

心肺复苏大鼠脑基质金属蛋白酶9的表达和血脑屏障的变化

【目的】 探讨心肺复苏后早期大鼠脑组织基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达和血脑屏障的变化规律&#65377;【方法】 将80只大鼠随机分为假手术组(n = 40)和复苏组(n = 40)&#65377;假手术组仅进行麻醉和气管插管&#65380;血管穿刺,不进行窒息,复苏组用气管夹闭窒息法致使心跳骤停后进行复苏,其他与对照组相同,分别在0&#65380;3&#65380;9&#65380;24 h和48 h 5个时间点处死大鼠后,取样,测定脑组织MMP9的表达&#65380;MMP9 mRNA&#65380;脑含水量与脑组织伊文思蓝含量的变化,电镜观察脑组织的超微结构&#65377;【结果】 复苏组心肺复苏后3&#65380;9&#65380;24和48 h脑组织MMP9表达明显高于假手术组,MMP9 mRNA含量与假手术组相比差异有统计学意义,脑含水量与假手术组比较明显升高,与假手术组比较,脑组织伊文思蓝含量明显升高;超微结构发生改变&#65377; 【结论】 在心肺复苏大鼠脑缺血模型中MMP9蛋白和MMP9mRNA的表达明显升高;脑组织的脑含水量和伊文思蓝含量明显升高,血脑屏障受到破坏;电镜超微结构观察证实脑组织损伤明显;这些变化在心肺复苏后24 h达高峰&#65377;     

综合康复治疗对颅脑损伤后抑郁的疗效分析

目的探讨综合康复治疗对颅脑损伤后抑郁患者日常生活活动能力和抑郁心理的影响。方法80例颅脑损伤后抑郁患者随机分成康复组和对照组，每组40例，康复组采取常规药物治疗和综合康复治疗（运动疗法＋心理治疗），对照组仅采用常规药物治疗。在患者入选时、病程3个月时分别进行Barthel指数和HAMD评定。结果与对照组比较，康复组患者Barthel指数得分在疗程3月（P〈0．001）时显著提高。HAMD得分在疗程3个月时则明显降低（P〈0．001）。结论综合康复治疗能够有效改善颅脑损伤后抑郁患者的日常生活活动能力，减轻抑郁心理。     

阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗,不作脑创伤;脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型;ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984,500 μg/kg）,每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后,分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化,干湿比重法测定脑组织含水量,RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较,脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01）,MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）;与脑创伤组比较,ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01）,MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）;（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05）,ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）;脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01）,ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

促红细胞生成素及其受体在脑外伤后的表达及意义

目的观察促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在急性重型脑外伤后大脑皮质内的动态表达规律,并探讨其意义。方法将130只Wistar大鼠分为3组:正常组10只、对照组60只(仅行开颅术)和脑损伤组60只(Feeney法)。分别在伤后5、12、24h及3、5、7d断头取脑。采用RT-PCR、免疫荧光法检测EPO和EPOR的mRNA及蛋白的表达。结果正常组和对照组各时间点有微量EPO及EPOR的表达,脑损伤组在伤后5h见少量EPOmRNA和蛋白的表达,12h和24h表达升高,至3d(mRNA0.691±0.035,免疫阳性细胞78.4±6.32)达到高峰,5d时下降,7d时降至正常水平。而EPORmRNA和蛋白在伤后5h见少量表达,12h时表达升高,至24h(mRNA0.736±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.31)达到高峰,3d(mRNA0.641±0.027,免疫阳性细胞74.8±5.49)、5d(mRNA0.656±0.011,免疫阳性细胞69.5±7.21)和7d(mRNA0.771±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.59)时仍维持在高表达水平,未见减弱。结论大鼠急性重型颅脑损伤后大脑皮质内EPO短暂升高,而EPOR持续高水平表达且呈时间依赖性,提示颅脑损伤后外源性EPO能与持续高表达的EPOR结合产生神经保护作用。