犬陈旧性心肌梗死时连接蛋白43的分布

目的：探讨陈旧性心肌梗死时心肌缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43)的分布特征。方法：结扎犬冠状动脉造成心肌梗死,术后恢复40－50d,用改良的免疫细胞化学法显示心肌梗死区,边缘带及非缺血区Cx43的分布,半定量分析不同部位Cx43的分布密度。结果：与正常心肌相比,梗死病灶及其邻近区域Cx43的分布出现明显紊乱：梗死中心区Cx43完全消失;边缘带Cx43呈现不均匀消失,少量Cx43分布于岛状或半岛状尚存活的心肌;心肌细胞端－端相接处的Cx43严重消失,而细胞侧－侧相接处的Cx43仍有部分存在。非缺血区Cx43的密度和分布与正常心肌相比无明显改变。结论：陈旧性心肌梗死时Cx43的数量和分布呈现高度不均一性,尤其在边缘带Cx43的分布特点是形成局部传导阻滞和折返性心律失常的结构基础。     

兔早期心肌缺血不同时段Connexin43的表达

目的 探讨急性心肌缺血不同时间心肌缝隙连接蛋白43的分布特征。方法 结扎兔左冠状动脉造成急性心肌缺血模型,于结扎后不同时间取左心室前壁心肌。用HBFP染色定位心肌缺血区域,用SP法观察心肌缺血区、交界区及非缺血区Cx43的分布,用图像分析系统分析。结果 急性心肌缺血30 min,Cx43阳性面积减少约40％,此后Cx43逐渐降低,大约480 min,Cx43几乎消失。结论 兔急性心肌缺血时,Cx43的减少有时间特点。     

甲状腺功能亢进性心脏病猝死者左心室心肌连接蛋白43的分布改变

目的:探讨甲亢性心脏病猝死者心肌连接蛋白43(myocardial connexin 43,Cx43)表达及其与猝死的关系。方法:挑选长江大学医学院病理学教研室2010～2012年尸体解剖案例26例,分为2组,每组各13例。①实验组:男9例,女4例,年龄20～52岁,平均年龄34.7岁,均为甲亢性心脏病猝死。②非心源性死亡对照组:男7例,女6例,年龄22～60岁,平均年龄38.8岁。每例心脏进行常规病理学检查并取材后,运用免疫组织化学和图像分析技术,检测左心室肌的Cx43染色情况。结果:实验组心肌Cx43阳性颗粒数分布于心室肌细胞内或细胞侧-侧连接处;对照组心肌Cx43阳性颗粒数分布于闰盘。定量检测并经统计分析发现,实验组Cx43蛋白染色阳性的面积和与对照组均有非常显著的差异(P<0.01),而平均光密度比较,两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:甲亢性心脏病猝死者心室肌Cx43蛋白的分布发生明显改变,甲亢性心脏病的猝死可能与Cx43的分布变化有一定的关系。     

美托洛尔对大鼠心肌梗死周边区缝隙连接蛋白43的影响

目的:探讨美托洛尔对大鼠心肌梗死(心梗)后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法:80只大鼠随机分为假手术组(20只)、心梗组(30只)和美托洛尔组(30只),用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心梗模型,美托洛尔组给予美托洛尔5mg/(kg.d)灌胃,心梗组给予安慰剂。手术8周后,测量梗死周边区心室颤动阈值(室颤阈值)。用蛋白印记分析和RT-PCR分别观察心梗后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化的蛋白质及总量表达和mRNA表达的变化;免疫荧光法观察梗死周边区Cx43的分布。结果:8周后,美托洛尔组室颤阈值高于心梗组[(11.0±2.65)V比(7.1±4.1)V,P<0.05],美托洛尔组Cx43磷酸化的蛋白质及总量均显著高于心梗组,Cx43mRNA的表达也明显高于心梗组。Cx43的密度和分布均显著高于心梗组。结论:美托洛尔能显著改善梗死周边区缝隙连接重构,这可能是美托洛尔能够抑制心梗后室性心律失常的一个机制。     

Cx43转基因自体成肌细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的观察间隙连接蛋白43(Cx43)基因转染自体骨骼肌成肌细胞(SMCs)后心肌内细胞移植对犬急性心肌梗死(AMI)后心功能和心肌结构的影响。方法构建真核表达质粒载体pLenti6／V5-DEST-Cx43,利用慢病毒表达包装系统将目的基因Cx43 cDNA转染入体外培养的SMCs,并经克隆筛选后得到Cx43基因高表达的SMCs (Cx43-SMCs)。将24只AMI模型制备成功的杂种犬采用计算器随机法分为SMCs移植组、Cx43-SMCs移植组和对照组等3组(n=8),于犬AMI后4周分别在各组心肌梗死区进行细胞移植:SMCs移植组注入用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的SMCs、Cx43-SMCs移植组注入用BrdU标记的Cx43-SMCs、对照组注入等量的细胞培养液。分别在AMI前1天、AMI后4周和细胞移植4周后,用超声心动图(UCG)测量左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVDD)和左室收缩末期内径(LVSD);同时进行病理组织学检查和应用免疫组织化学技术检测BrdU标记移植细胞的存在情况;并通过透射电子显微镜观察移植区细胞的超微结构和缝隙连接形成情况。结果实验杂种犬在AMI前、AMI后4周(即移植前)、移植后4周均获得良好UCG图像。AMI前UCG检查显示犬的左室形态和收缩功能均正常,建立AMI模型4周后,与对照组相比,SMCs移植组和Cx43-SMCs移植组各实验犬的左心室腔扩大,左室前壁变薄,收缩活动减弱至消失,LNEF降低,LNDD和LVSD均增加(P<0．05),为成功的AMI模型。移植后4周,与移植前AMI时比较,SMCs移植组和Cx43-SMCs移植组的LVEF升高,LNDD和LVSD则减少(P<0．05),心功能趋于恢复,其中Cx43-SMCs移植组较SMCs移植组为显著(P<0．05)。病理组织学检查显示在细胞移植组心肌瘢痕区及其边缘均发现了植入的移植细胞;免疫组化检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在和分布,移植细胞的颜色呈棕褐色,与正常原位心肌细胞不同,其中Cx43-SMCs移植组植入的Cx43-SMCs在宿主心肌组织内排列有序,基本与宿主心肌的排列方向一致;电子显微镜观察到SMCs移植组可见骨骼肌样细胞(核偏、线粒体较小),有少部分移植细胞呈现闰盘(缝隙连接)形成初期;Cx43-SMCs移植组则见到有“心肌样”肌细胞分布在宿主心肌移植区中,且各细胞之间形成缝隙连接．结论Cx43基因转染自体SMCs后自体心肌移植能够在宿主体内生长、增殖,并可在一定程度上改善心肌梗死后心肌结构和心功能。     

高血压性心脏病猝死者心肌连接蛋白43的表达

目的:探讨高血压性心脏病(HHD)猝死者心肌连接蛋白43(Cx43)表达及其与猝死的关系。方法:挑选我校基础医学院法医学教研室2009-2011年尸体解剖案例20例,分为两组,每组各10例。①HHD组:男性9例,女性1例;年龄为41-73岁,平均年龄56.5岁;均为高血压性心脏病猝死。②非心源性死亡对照组:男性7例,女性3例;年龄为40-53岁,平均年龄46.8岁。每例心脏进行常规病理学检查并取材后,运用免疫组织化学和图像分析技术,检测左心室肌的Cx43染色情况。结果:HHD组心肌Cx43阳性颗粒数量显著减少,着色明显减弱,部分呈颗粒状,且分布于心室肌细胞内或细胞侧-侧连接处;对照组的染色未见明显变化。定量检测并经统计分析发现,HHD组Cx43蛋白染色阳性的面积和平均光密度与对照组均有非常显著的差异(P<0.01)。结论:高血压性心脏病猝死者心室肌Cx43蛋白的表达明显减少,高血压性心脏病的猝死可能与Cx43的表达变化有一定的关系。     

靶向Cx43在常见心血管疾病中的研究进展

近年来,心血管疾病发病率呈升高趋势,对人类健康造成严重影响.缝隙连接蛋白43(Cx43)是心脏缝隙连接中的主要蛋白,与高血压、心肌梗死、心肌肥厚、心力衰竭、心律失常等心血管疾病的发生发展密切相关,目前Cx43已被确定为治疗心血管疾病的新靶点.Cx43水平、磷酸化和分布状态的改变可影响心血管疾病的发生和发展.因此,探索C...     

电针“内关”“心俞”对急性心肌梗死大鼠心肌组织MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的:探讨电针对急性心肌梗死大鼠心肌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织基质金属蛋白酶-2(TIMP-2)和缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组3组。记录各组大鼠心电图变化,以RT-PCR测定心肌组织中MMP-2、TIMP-2表达的变化,用免疫组化检测Cx43。结果:与模型组比较,电针组心电图有明显改善,TIMP-2、Cx43 MMP-2表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:电针内关、心俞通过调节MMP-2、TIMP-2的表达保护缺血梗死心肌组织,且有效对抗心律失常。     

脑利钠肽对兔心肌梗死后缝隙连接蛋白重构及炎症因子的影响

目的探讨脑利钠肽对兔急性心肌梗死后梗死周边区缝隙连接蛋白43（Cx43）及炎症因子的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支的方法制备兔心肌梗死模型,随机分为假手术组（Sham组）,心肌梗死组（MI组）,心肌梗死后人重组脑利钠肽（recombinan human brain natriuretic peptide）干预组（rh BNP组）。rh BNP组自术后即刻给予rh BNP 0.01μg/kg/min持续静脉泵入24 h;MI组、Sham组给予同等剂量的生理盐水静脉泵入。术后8周行电生理实验,并通过RT-PCR方法检测IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平;用免疫荧光结合激光共聚显微镜技术检测Cx43的分布及表达。结果 MI组心肌细胞有效不应期（ERP）明显延长,且室性心律失常诱发率明显高于Sham组;脑利钠肽干预后室性心律失常诱发率降低。MI组梗死灶周IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平均较Sham组相应部位均明显增高（P〈0.01）,rh BNP组较MI组IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平减低（P〈0.05）。Sham组的Cx43荧光斑分布较均匀,MI组Cx43的数量较Sham组明显减少,且分布紊乱,rh BNP组较MI组梗死灶周Cx43数量增加,不均一分布的程度减轻。结论脑利钠肽可能对心梗后心肌的急性炎症过程产生影响,部分逆转缺血对缝隙连接的损伤作用,抑制心肌梗死后室性心律失常的发生。     

养心通脉有效部位方对MSCs移植大鼠急性梗死心肌影响的研究

目的 探讨养心通脉有效部位方(apr-YTF)对急性梗死心肌实施骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促修复的影响.方法 将造模成功的AMI大鼠分为模型对照组、空白对照组、阳性对照组[重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)]和实验观察组(apr-YTF),分别给予MSCs以及相应药物心肌注射,PcLab生物医学信号采集处理系统测定在体心功能,免疫组织化学检测缝隙连接蛋白43(Cx43),RT-PCR检测心脏早期发育基因NKx2.5.结果 实验观察组动物的心功能恢复最好;心肌细胞Cx43阳性着色颗粒呈分散样改变,主要分布于端端连接的闰盘区域和侧侧连接的胞膜上,实验观察组的IOD值最高;各组NKx2.5均有一定水平的表达,实验观察组表达最强,而模型对照组则只有极弱的表达.结论 apr-YTF能促进MSCs移植修复急性梗死心肌,改善心功能.     

辛伐他汀抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡及改善心功能的实验研究

目的:观察辛伐他汀对心肌梗死后心肌细胞凋亡及心功能的影响.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死模型,实验组给予药物处理(辛伐他汀40 mg/kg),7天后,TUNEL法检测心肌组织中的凋亡心肌细胞,超声检测左心室功能参数,生化法检测血脂水平.结果:辛伐他汀组较心肌梗死组在梗死区、梗死周边区、远离梗死区凋亡心肌细胞显著减少(P＜0.05),左心室功能改善(P＜0.05),血脂水平没有显著性差异(P＞0.05).结论:辛伐他汀抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡,改善心功能.     

迷走神经刺激对大鼠缺血性心律失常的影响及其机制

目的:探讨急性心肌缺血时刺激迷走神经对室性心律失常的影响及其潜在的机制。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型作为心肌缺血组(MI,n=25)、缺血+迷走神经刺激组(MI-VS,n=25)、缺血+迷走神经刺激+阿托品组(MI-VS-Atr,n=25)和假手术组(SO,n=20)。心电图监测室性心律失常的发生。Western blot分析缝隙连接蛋白43(Cx43)的磷酸化蛋白及总量表达变化。RT-PCR分析Cx43 mRNA的表达变化。免疫荧光观察Cx43表达分布情况。结果:MI-VS组室速/室颤发生率(16.0%,4/25)较MI组(52.0%,13/25)显著降低(P<0.05)。冠脉结扎30 min后,与SO组相比,MI组磷酸化Cx43的比例明显减少(P<0.05);迷走神经刺激明显抑制了缺血所致的Cx43脱磷酸化(P<0.05);而阿托品明显阻断了迷走神经刺激对磷酸化Cx43的保护作用。MI组Cx43 mRNA表达均较SO组显著减少(P<0.05);而MI-VS组Cx43 mRNA表达较MI组显著增加(P<0.05)。免疫荧光发现缺血能够诱导Cx43的分布发生改变,而迷走神经刺激能够抑制缺血引起的Cx43的分布改变。结论:急性心肌缺血时迷走神经刺激能够抑制室性心动过速或室颤的发生,其机制可能主要与迷走神经刺激抑制了Cx43的脱磷酸化及其分布变化有关。     

Semaphorin 3A对大鼠慢性心肌梗死周边区交感神经重构的影响

目的:探讨不同浓度Semaphorin 3A(Sema 3A)对大鼠心肌梗死慢性期梗死周边区交感神经重构及心室颤动阈值(室颤阈值)的影响。方法:80只大鼠随机分为两组。心梗组(20只):结扎冠状动脉前降支;Sema 3A组(60只):结扎冠状动脉前降支后于梗死周边区分别注入不同浓度的Sema 3A。8周后测定大鼠梗死周边区室颤阈值,免疫组化染色检测生长相关蛋白43(GAP43)和酪氨酸羟化酶(TH)阳性纤维密度。结果:室颤阈值在Sema 3A注射组中随药物浓度增加而升高,1.0mg/L浓度组相比心梗组有明显提高(P<0.05)。Sema 3A注射组GAP43和TH神经纤维密度与心梗组差异明显(P<0.05);且随药物浓度提高神经纤维密度呈下降趋势,在药物浓度达到1.0mg/L时表现显著(与1.0mg/L组相比P<0.05)。结论:不同浓度的Sema 3A对室颤阈值有不同的提升效应,而对大鼠心肌梗死后交感神经重构产生不同的抑制作用。     

维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达及其功能的影响

目的 探讨维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白（Cx43）表达及其功能的影响。方法 体外培养的睾丸癌I-10细胞分别予2.5、5.0、10.0 μmol/L维甲酸处理24 h,Western blot法检测I-10细胞Cx43蛋白表达,细胞免疫荧光法观察细胞膜表面Cx43蛋白分布的改变,细胞接种荧光示踪法检测细胞荧光传递功能的变化。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增加I-10细胞中Cx43蛋白表达(P<0.05),其增强率分别为43.14%±2.1%、58.09%±1.8%、143.13%±1.6%;细胞免疫荧光法结果显示,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可显著增加I-10细胞膜表面Cx43蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增强I-10细胞间荧光传递功能(P<0.01),增强率分别为26.1%±2.3%、63.3%±1.6%、140.5%±3.4%。结论 维甲酸可通过增加I-10细胞Cx43蛋白的表达来增强细胞间的缝隙连接功能。     

Atorvastatin prevents connexin43 remodeling in hypertrophied left ventricular myocardium of spontaneously hypertensive rats

Background  Connexin43 (Cx43) is the predominant gap junction protein in heart and is involved in the control of cell-to-cell communication to modulate the contractility and the electrical coupling of cardiac myocytes. Left ventricular (LV) hypertrophy is accompanied by changes of Cx43 expression. Recent studies have demonstrated that statins reduced cardiac hypertrophy. However, it is unknown whether statins can affect Cx43 expression in hypertrophied left ventricular myocardium. This study was designed to assess the effects of atorvastatin on LV hypertrophy and Cx43 expression in spontaneously hypertensive rats (SHR).
Methods  Nine-week old SHRs were randomly divided into two groups. Some received atorvastatin at 30 mg/kg by oral gavage once daily for 8 weeks (SHR-A); others received vehicle. Age-matched Wistar-Kyoto rats (WKY) received atorvastatin or vehicle for 8 weeks were used as controls. At the end of the experiment, we investigated LV hypertrophy and the expression of Cx43 in LV myocardium in four groups. Cx43 expression was investigated by the methods of Western blotting, immunohistochemistry, and transmission electron microscope. LV hypertrophy was accessed by pathological analysis and plasma brain natriuretic peptide (BNP) level.
Results  LV hypertrophy was prominent in untreated SHR. In SHR, LV myocardium Cx43 level was upregulated, and the distribution of Cx43 was displaced from their usual locations to other sites at various distances away from the intercalated disks. After atorvastatin treatment, myocardium Cx43 level was reduced in SHR-A, and the distribution of Cx43 gap junction became much regular and confined to intercalated disk. Statins also prevented LV hypertrophy in SHR.
Conclusions  These results provide novel in vivo evidence for the key role of Cx43 gap junctions in LV hypertrophy and the possible mechanism in anti-hypertrophic effect of statins. Atorvastatin treatment may have beneficial effects on LV hypertrophy in spontaneously hypertensive rats.

     

兔早期心肌缺血Connexin 43的变化

目的 探讨早期急性心肌缺血缝隙连接蛋白43(Cx43)的变化。方法 结扎兔左冠状动脉造成急性心肌缺血模型，于结扎后30min取左心室前壁心肌，用免疫组织化学法和免疫电镜胶体金法观察、定位心肌缺血Cx43的分布，半定量统计分析。结果 急性心肌缺血(30min)，免疫组化图像分析系统分析结果显示Cx43阳性面积减少约40％；免疫电镜显示胶体金颗粒明显减少，分布未见改变。结论 兔急性心肌缺血早期Cx43有明显减少。     

卡维地洛对心肌梗死后心房缝隙连接重构的影响

目的:研究慢性左室心肌梗死对心房肌缝隙连接蛋白重构的影响,并观察肾上腺素能受体阻断剂卡维地洛的干预作用。方法:新西兰白兔30只随机分为3组:对照组10只,心肌梗死组10只,卡维地洛干预组10只。心肌梗死组结扎冠状动脉左前降支;对照组只开胸但不结扎冠状动脉。卡维地洛5 mg/(kg.d)组直接灌胃给药,另外两组灌等量蒸馏水,3组均喂养8周。8周后采用免疫荧光组织化学法观察左心耳缝隙连接蛋白40(Cx40)的空间分布,Western blot技术检测左心耳Cx40的含量变化。结果:心肌梗死组左心耳Cx40的含量与对照组相比显著降低(P<0.01),并呈现不均一分布;卡维地洛干预组Cx40的含量比心肌梗死组高(P<0.05),不均一分布程度减轻。结论:慢性左室心肌梗死可使心房Cx40发生重构,其分布高度异质性,且蛋白含量明显下降,卡维地洛可减轻Cx40的重构。