大鼠肺脏血管紧张素Ⅱ受体亚型的免疫组化研究

选用特异性ＡＴ１和ＡＴ２受体的抗肽段抗体，利用免疫组织化学染色方法对大鼠肺脏中血管紧张素Ⅱ受体的分布情况进行了观察。结果表明ＡＴ１受体主要分布于肺内血管的内皮细胞、平滑肌细胞和支气管的平滑肌细胞；ＡＴ２受体仅分布于细支气管上皮细胞表面。     

血管紧张素Ⅱ2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞，观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果在血管紧张素Ⅱ刺激下，ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０４６２±００２６）增殖能力明显强于正常组成纤维细胞（０３８９±００２１，Ｐ＜００１），纤维连接蛋白基因及蛋白质表达与正常组成纤维细胞比较显著增加，（３４１±４１）％、（１６２±２３）％（Ｐ＜００１）。结论ＡＴ２受体对ＡＴ１受体介导的细胞增殖和分泌纤维连接蛋白有一定的抑制作用     

大鼠基底动脉和肾动脉肾上腺素受体的异质性

用离体小血管收缩功能实验法比较了Ｗｉｓｔａｒ大鼠基底动脉（ＢＡ）和肾动脉（ＲＡ）β和α（α_１和α_２）肾上腺素受体分布和功能的差异。结果表明：（１）由β受体介导的非内皮依赖性舒张反应在ＢＡ明显强于ＲＡ，提示ＢＡ的β受体分布多于ＲＡ。（２）大多数ＢＡ对α_１激动剂无反应，仅个别ＢＡ对α_１激动剂显示一种低亲和力、低效能的收缩反应，这与ＲＡ明显不同。提示大多数ＢＡ无α_１受体分布，仅个别ＢＡ有α１受体分布，但其亚型可能不同于ＲＡ上的α_１受体亚型。（３）无论是保留内皮还是去除内皮，ＢＡ对α_２受体激动剂ＢＨＴ９２０（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）均无反应，而在ＲＡ保留内皮对ＢＨＴ９２０（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）呈舒张反应，去内皮后则呈收缩反应。提示在大鼠ＢＡα２受体分布极少，而在ＲＡ则有α_２受体分布，且内皮之α_２受体介导内皮依赖性舒张反应，平滑肌之α_２受体介导内皮非依赖性收缩反应。     

血管紧张素II2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的 研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法 分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞,观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果 在血管紧张素Ⅱ刺激下,ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０．４６２±０．０２６）增殖能力明显增强于正常组成纤维细胞（０．３８     

肝硬化大鼠血管平滑肌细胞Gq蛋白信号转导功能的研究

目的 为观察肝硬化大鼠动脉血管平滑肌细胞对血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）是否存在受体后Ｇｑ蛋白信号转导的异常。方法 采用总胆管结扎制血大鼠肝硬化模型，分离主动脉血管平滑肌细胞后进行细胞培养，并予免疫组化鉴定。分别采用细胞感应微生理探测系统、三磷酸肌醇（ＩＰ３）分析法、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测血管平滑肌细胞ＡＴ－Ⅱ受体介导的细胞外液酸化速率（ＥＣＡＲ）、ＩＰ３生成、Ｐ４２／４４丝裂原激活的蛋白激酶（ＭＡＰ     

内皮素—1诱导肺动脉平滑肌细胞的趋化反应

本实验发现ＥＴ－１可诱导肺动脉平滑肌细胞的趋化反应，１０＾－１２￣１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ ＥＴ－１可剂量依赖地促进ＰＡＳＭＣ的趋化反应，而高浓度的ＥＴ－１对ＰＡＳＭＣ的趋化作用减弱，内皮素Ａ型受体的特异拮抗剂ＢＱ１２３可抑制ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应，此外还观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应。提示ＥＴ－１可能对缺氧性肺血管结构重组中平滑肌细胞及其前体的迁移具有重要作用。     

家兔肝动脉平滑肌中多巴胺受体亚型分析

选用ＦＯＤＡ和ＰＢＤＡ分别作为ＤＡ１和ＤＡ２受体的特异性激动剂；以ＳＣＨ２３３９０和ｄｏｍｐｅｒｉｄｏｎｅ分别作为ＤＡ１和ＤＡ２受体的阻断剂，利用离体血管环的方法对家兔肝动脉平滑肌中多巴胺受体的存在情况进行了观察。结果表明：多巴胺受体两亚型（ＤＡ１、ＤＡ２）均在肝动脉平滑肌中存在     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失抑制诱导的成纤维细胞凋亡

目的探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）２型受体（ＡＴ２）基因表达与成纤维细胞凋亡的关系。方法分别从正常（ＡＴ２＋／＋）和ＡＴ２受体基因缺失（ＡＴ２／）胎鼠培养皮肤成纤维细胞,经ＡｎｇⅡ诱导后,采用ＲＴＰＣＲ检测成纤维细胞ＡｎｇⅡ的ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ表达,分别用基因组ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ染色和流式细胞仪等定性和定量方法检测细胞的凋亡改变。结果经１０８、１０７、１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激４８小时,成纤维细胞的ＡＴ１和ＡＴ２受体基因表达均有显著增强,并与浓度呈正相关。经１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ诱导７２小时,ＡＴ２＋／＋成纤维细胞出现了明显的标志着细胞凋亡的基因组ＤＮＡ片段化,凋亡细胞分别是（１２３±２７）％和（２１７±６７）％,而ＡＴ２／成纤维细胞则未出现明显的细胞凋亡改变。结论ＡＴ２受体基因缺失后,抑制了ＡｎｇⅡ介导的成纤维细胞凋亡,为进一步揭示ＡｎｇⅡ的生理和病理作用提供了实验依据     

血管紧张系Ⅱ受体基因敲除对跨膜钙内流的作用

目的 观察血管紧张素Ⅱ受体亚型（ＡＴ１ａ）基因敲除对跨膜钙内流的影响。方法 培养ＡＴ１ａ基因敲除及其野生型对照小鼠的主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）和应用荧光倒置显微镜及钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ动态观测ＶＳＭＣ钙离子（Ｃａ＾２＋）ｉ变化。结果 在血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激下钙内流显著增加,ＡＴ１ａ敲除组ＶＳＭＣ钙净增值为（２０４±２２）ｎｍｏｌ／Ｌ,基础（Ｃａ＾２＋）ｉ为（１０８±９）ｎｍ     

大鼠尾动脉平滑肌中多巴胺受体亚型分布的分析

长期以来认为在内脏血管中含有两种亚型的多巴胺受体ＤＡ１和ＤＡ２，而躯体血管中只存在多巴胺受体ＤＡ２亚型。但在实验中偶然发现大鼠尾动脉对ＤＡ１亚型特异性激动剂ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ有明显反应，因此应用离体血管环法和反转录聚合酶链反应方法对大鼠尾动脉平滑肌中多巴胺受体两亚型的分布情况进行了观察。结果显示：亚型选择性多巴胺受体激动剂ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ和ＰＢＤＡ（ＤＡ２亚型激动剂）在尾动脉均产生浓度依赖性舒张反应，该效应分别被亚型特异性拮抗剂部分或完全阻断；来自尾动脉之ＲＮＡ的ＰＣＲ结果可见到预期长度为２４７ｂｐ的特异性阳性扩增条带，而未加反转录酶之结果呈现阴性，说明该产物来自ｃＤＮＡ而非基因组ＤＮＡ。结论：大鼠尾动脉平滑肌中同时存在有多巴胺受体ＤＡ１和ＤＡ２两种亚型     

大鼠长期服用左旋多巴后血管平滑肌中多巴胺受体变化的观察

采用离体血管环的方法对长期服用非亚型特异性拟多巴胺类药物左旋多巴后大鼠主动脉平滑肌中多巴胺受体两亚型（ＤＡ１，ＤＡ２）的变化进行了观察。结果显示：长期服用左旋多巴后大鼠主动脉平滑肌中多巴胺受体两亚型（ＤＡ１，ＤＡ２）均显著下调，但一定时间后受体有回升趋势。     

内皮素－1诱导肺动脉平滑肌细胞的趋化反应

本实验发现ＥＴ－１可诱导肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的趋化反应，１０~（－１２）～１０~（－９）ｍｏｌ／ＬＥＴ－１可剂量依赖地促进ＰＡＳＭＣ的趋化反应，而高浓度的ＥＴ－１（１０~（－８）～１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的趋化作用减弱，内皮素Ａ型受体的特异拮抗剂ＢＱ１２３可抑制ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应，此外还观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应。提示ＥＴ－１可能对缺氧性肺血管结构重组中平滑肌细胞及其前体的迁移具有重要作用。     

内毒素血症时内皮素及受体mRNA在肝组织中的分布及意义

观察内毒素血症时内皮素１（ＥＴ－１）和内皮素Ａ型受体（ＥＴＡＲ）在肝组织中的分布及对肝组织的生理病理意义。方法选用ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只，均分为对照组和内毒素组（１０ｍｇ／ｋｇ）。采用原位分子杂交技术观察了伤后３、６、１２和２４小时肝组织中ＥＴ－１和ＥＴＡＲ在肝细胞中的分布和表达变化。肝组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ原位杂交显示，肝血窦内皮细胞、肝小叶中央静脉内皮细胞和ｋｕｐｆｅｒ＇ｓ细胞呈阳性反应，颗粒堆积，视野内阳性细胞数较对照组增多。肝组织ＥＴＡＲｍＲＮＡ原位杂交显示，肝血窦周围、肝小叶间动脉壁平滑肌细胞呈阳性反应，颗粒堆积。结论肝脏合成ＥＴ－１的细胞为肝血管、肝血窦内皮细胞和ｋｕｐｆｅｒ＇ｓ细胞。肝血管平滑肌细胞、贮脂细胞含有ＥＴＡＲ。内毒素在转录和翻译水平调节ＥＴ－１、ＥＴＡＲ合成，并使其表达增强     

老年大鼠血管平滑肌中多巴胺受体DA1亚型的改变

选用ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ作为ＤＡ１受体的特异性激动剂，利用离体血管环的方法对老年（１８月龄）大鼠与年轻大鼠（３月龄）血管平滑肌中多巴胺受体ＤＡ１亚型的差别进行了观察。结果显示，老年大鼠主动脉、肾动脉、肠系膜动脉由去甲肾上腺素引起的最大收缩反应与年轻大鼠无明显差别，但３种血管由ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ引起的累积浓度－舒张反应曲线均明显右移，提示老年大鼠血管平滑肌中ＤＡ１受体显著下调。     

梗阻性黄疸应激时大鼠胃粘膜血流减少的原因探讨

研究梗阻性黄疸应激时胃粘膜血流减少的原因。方法用结扎总胆管的大鼠冷束缚应激模型，测定胃粘膜血流和胃粘膜中内皮素１（ＥＴ－１），血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）和胃粘膜组胺Ｈ２受体（Ｈ２受体），肾上腺素能α１受体（α１受体）的变化，以及应激前使用抗ＥＴ－１血清、依那普利、甲氰米胍、酚妥拉明后胃粘膜血流的改变。结果梗阻性黄疸应激时胃粘膜ＥＴ－１和Ａｎｇ－Ⅱ明显增加，Ｈ２受体和α１受体明显减少和胃粘膜血流明显减少。应激前使用它们的拮抗物胃粘膜血流明显增加。结论应激时胃粘膜中ＥＴ－１和Ａｎｇ－Ⅱ增加及Ｈ２受体和α１受体减少可引起胃粘膜血流减少。应激前使用它们的拮抗物可改善胃粘膜血流，它们有保护胃粘膜的作用。     

老年大鼠血管平滑肌中多巴胺受体DA_1亚型的改变

选用ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ作为ＤＡ＿１受体的特异性激动剂，利用离体血管环的方法对老年（１８月龄）大鼠与年轻大鼠（３月龄）血管平滑肌中多巴胺受体ＤＡ＿１亚型的差别进行了观察。结果显示，老年大鼠主动脉、肾动脉、肠系膜动脉由去甲肾上腺素引起的最大收缩反应与年轻大鼠无明显差别，但３种血管由ｆｅｎｏｌｄｏｐａｍ引起的累积浓度－舒张反应曲线均明显右移，提示老年大鼠血管平滑肌中ＤＡ１受体显著下调。     

内皮素—1及其基因在早期STZ糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

为探讨内皮素－１（ＥＴ－１）及其基因在早期ＳＴＺ糖尿病大鼠肾脏组织的表达及其人意义,作者采用免疫组化ＡＢＣ法和原位杂交技术检测了２４只早期ＳＴＺ糖尿病大鼠肾组织中ＥＴ－１及ＥＴ－１ｍＲＮＡ的定位及半定量表达。实验分为４组,每组６只。结果：ＥＴ－１和ＥＴ－１ｍＲＮＡ的分布一致,主要分布于肾小球内皮细胞、系膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞及肾小以细胞之中。随质中ＥＴ－１和ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达高于波细     

尼可地尔在抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨丝裂素活化的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）,在ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制内皮素（ＥＴ－１）诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法：将１０~（－７）～１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ的尼可地尔导于培养血管平滑肌细胞,ＥＴ－１诱导培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定磷酸化 ＭＡＰＫ蛋白表达。［~３ Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞 ＤＮＡ合成。结果：ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞［~３Ｈ］胸腺嘧啶核苷酸掺入并同时剂量依赖性下调 ＭＡＰＫ蛋白表达。结论： ＡＴＰ敏感钾通道开放剂尼可地尔可通过下调ＭＡＰＫ的表达从而抑制ＥＴ－１诱导的培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

葛根总黄酮对离体家兔主动脉平滑肌的作用

目的研究葛根总黄酮（ＴＦＲＰ）对血管平滑肌的作用及其机制。②方法制备离体家兔胸主动脉螺旋条，采用去甲肾上腺素（ＮＡ）和高钾Ｋｒｅｂｓ液引起血管平滑肌（ＶＳＭ）收缩，观察ＴＦＲＰ的解痉作用；用酚妥拉明（Ｐｈｅｎ）或普奈洛尔（Ｐｒｏｐ）对标本进行预处理，观察两药对ＴＦＲＰ扩血管作用的影响；制作ＮＡ的剂量－效应曲线，研究ＴＦＲＰ对其影响。③结果ＴＦＲＰ４ｇ／Ｌ可使高钾和ＮＡ引起收缩的血管条明显松弛（ｔ＝４．３０４，６．８２３，Ｐ均＜０．０１），肌张力分别降低了４３％±１２％和５８％±１５％．在有或无Ｐｈｅｎ和Ｐｒｏｐ存在情况下，ＴＦＲＰ的扩血管作用差异无显著性（ｔ＝１．２８１，１．４４９，Ｐ均＞０．０５）。ＴＦＲＰ２ｇ／Ｌ可使ＮＡ的量－效曲线呈非平行性右移，并抑制ＮＡ收缩血管的最大效应。④结论ＴＦＲＰ对高钾和ＮＡ引起的血管痉挛有明显的松弛作用，其作用不是通过影响肾上腺素α受体或β受体而产生的     

知管紧张素Ⅱ及其拮抗剂对纱膜细胞内游离钙的影响

目的 探讨Ｌｏｓａｒｔａｎ拮抗局部肾素－血管紧张系（ＲＡＳ）对预防高血压致肾脏靶器官损伤的意义,方法 应用细胞培养和Ｆｕｒａ－２方法,观察血管紧张素Ⅱ和血管紧张素Ⅱ型受体（ＡＴ１受体）拮抗剂Ｌｏｓａｒｔａｎ对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压大鼠（ＷＫＹ）肾小球系膜细胞内游离钙浓度的影响。结果 ＡｎｇⅡ使ＳＨＲ系膜细胞「Ｃａ＾２＋」ｉ增高,对ＷＫＹ无影响;ＡｎｇⅡ对ＳＨＲ系膜细胞「Ｃａ＾２＋」ｕ