系统性红斑狼疮患者长链非编码RNA差异性表达研究

目的利用长链非编码RNA表达谱芯片技术筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者的差异表达长链非编码RNA并对其进行分析,以进一步阐明系统性红斑狼疮发病的分子机制。方法分采用利用长链非编码RNA表达谱芯片检测技术,筛查系统性红斑狼疮及健康对照组单个核细胞中的差异表达长链非编码RNA,并通过Rreal-time PCR对部分差异表达基因进行验证。结果 uc003ngn、uc010loq、uc003wbg、uc003wax、HM-lincRNA1145、uc010jsn、uc003wax、HMlincRNA1145等lncRNA在SLE患者外周血单个核细胞中显著上调,AK022005、uc010cik、uc010gdp、uc010nwn、uc010imt、HMlincRNA678等lncRNA在SLE患者外周血单个核细胞中显著下调。结论多个长链非编码RNA在SLE患者外周血单个核细胞中异常表达,提示它们可能在SLE的发生发展中起着重要的调控作用。     

丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在健康人和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的差异表达

目的分析丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平,探讨该蛋白检测在系统性红斑狼疮病情判断中的可能应用。方法实验分为3组:SLE稳定组、SLE活动组和健康对照组,每组6例,分别收集其外周血单个核细胞,用相对和绝对定量的等量异位标签串联质谱技术对丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白进行鉴定和相对定量分析,用Western blot技术对该蛋白的表达水平进行较大样本的独立验证。结果基于质谱分析的蛋白组学结果表明,丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白在系统性红斑狼疮活动期患者外周血单个核细胞中表达显著下调(与正常人的相对比值为0.2906),且该蛋白的低表达为Western blot实验进一步证实。临床资料分析表明,该蛋白的表达水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数呈负相关(r=-0.607,P<0.05)。结论丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白可能参与SLE的发病,该蛋白有望作为系统性红斑狼疮的活动阶段特异性标志物。     

IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMC B细胞刺激因子表达中的作用

 【目的】探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)B细胞刺激因子(Blys)基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响。【方法】梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞,分为2组,IL-10(100ng/mL)组和培养基组(仅含RPMI1640培养基),分别于培养0、6、12、24、72h离心收集PBMCs,RT-PCR法检测刺激后0～24h细胞Blys mRNA表达,流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72h膜结合型Blys蛋白表达。【结果】①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA和蛋白表达体外高于健康对照(P<0.001)。②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mRNA表达,12h作用最强(0.487±0.058 vs 0.251±0.050,P<0.001;0.638±0.084 vs 0.392±0.059,P<0.001)。③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达(FACs,4.53±0.71 vs 3.24±0.57,P<0.001;5.79±0.91 vs 4.55±0.83,P<0.001)。④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示，IL-10刺激后Blys表达增强。【结论】IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中单链DNA(ssDNA)表达情况.方法 流式细胞术检测26例SLE患者(SLE组)外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比(ssDNA阳性率),设立正常对照组(n=17)和其他结缔组织病(CTD)对照组(n=7).结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(0.906±0.838)%、(0.216±0.371)%和(0.270±0.311)%.统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组(P<0.01, P<0.05);SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为(1.228±0.259)%和(0.510±0.436)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关.     

B细胞刺激因子在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞上的表达及意义

目的 探讨B细胞刺激因子(Blys)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞上的表达情况及临床意义.方法 应用流式细胞仪技术,检测50例SLE患者(其中活动期和稳定期各25例)外周血单个核细胞上Blys的表达,与25例健康献血人员作比较.并分析SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达与病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系.结果 SLE患者外周血单个核细胞上表达Blys的百分率上调(P＜0.001),活动期和稳定期SLE患者Blys的表达率均高于健康对照组(P＜0.001和P＜0.05);其中,活动期和稳定期SLE患者比较,活动期患者Blys的表达更高(P＜0.05).SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.702,P＜0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM呈正相关(r=0.695,P＜0.001和r=0.356,P＜0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.42,P＜0.001和r=-0.31,P＜0.05).dsDNA抗体( )组患者外周血单个核细胞上Blys的表达较dsDNA抗体(-)组高(P＜0.05).Clq抗体( )组患者外周血单个核细胞上Blys的表达也较C1q抗体(-)组高(P＜0.05).结论 Blys在SLE外周血单个核细胞上的表达率升高.Blys的表达在一定程度上反映了病情的活动,并与自身抗体的产生相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th_(17)细胞的检测及意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)的水平和意义。方法:分离、刺激培养人外周血单个核细胞后,利用流式细胞术(FCM)分析SLE患者和正常人外周血中Th17细胞占CD+4T的比例,定量PCR检测外周血单个核细胞RORγt的表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血IL-17的水平。结果:静止期和活动期SLE患者外周血中Th17细胞比例与正常对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05),且活动期SLE患者与静止期患者相比差异有统计学意义(P<0.05)。SLE患者活动期组外周血单个核细胞RORγt mRNA表达水平与健康组及静止期组相比差异有统计学意义(P<0.05),静止期组和健康组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组相比,静止期和活动期SLE患者血清IL-17的水平有显著升高(P<0.05),且与静止期患者相比,活动期SLE患者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Th17细胞可能通过分泌细胞因子IL-17参与了SLE发病及病情发展。     

泌乳素对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞表面CD40/CD154表达的影响

目的 研究泌乳素(PRL)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞表面CD40、CD154表达的影响,从而探讨其在系统性红斑狼疮发病机制中的作用.方法 检测30例系统性红斑狼疮患者和20例正常健康人血清PRL水平,分离外周血单个核细胞(PBMC).采用流式细胞仪检测CD40、CD154的表达水平.结果 ①高PRL的SLE患者组CD154的表达水平明显高于正常PRL的SLE患者组和正常对照组(P＜0.05);②正常PRL的SLE患者组PBMC经重组泌乳素(rhPRL)刺激后CD154的表达水平较刺激前明显增加(P＜0.05),而正常对照组PBMC经rhPRL刺激后CD154表达增加不明显(P＞0.05);③高PRL的SLE患者组、正常PRL的SLE患者组(加rhPRL)加入溴隐亭(Brc)前后,CD154表达水平无明显差异(P＞0.05).④SLE患者组PBMC表面CD40表达水平与正常对照组差异无显著性(P＞0.05).结论 PRL可通过上调PBMC表面CD154的表达,在SLE的发病中起重要作用;Brc对内源性、外源性PRL均无明显抑制作用.     

IL-10在系统性红斑狼疮患者PBMCB细胞

【目的】探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）B细胞刺激因子（Blys）基因和蛋白在体外的表达及IL-10对其表达的影响。【方法】梯度密度离心法分离25例系统性红斑狼疮患者和20名女性健康志愿者外周血单个核细胞，分为2组，IL-10（100ng/mL）组和培养基组（仅含RPM11640培养基），分别于培养0、6、12、24、72h离心收集PBMCs。RT-PCR法检测刺激后0—24h细胞Blys mRNA表达，流式细胞仪和直接免疫荧光法检测72h膜结合型Blys蛋白表达。【结果】①系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys mBNA和蛋白表达体外高于健康对照（P〈0．001）。②IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞BlysmBNA表达，12h作用最强（0．487±0．058vs0．251±0．050，P〈0．001；0．638±0．084vs0．392±0．059，P〈0．001）。③IL-10显著增强健康对照和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白表达（FACs。4．53±0．71vs3．24±0．57，P〈0．001；5．79±0．91vs4．55±0．83，P〈0．001）。④直接免疫荧光法检测外周血单个核细胞膜结合型Blys蛋白显示，IL-10刺激后Blys表达增强。【结论】IL-10可上调系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞Blys基因和蛋白表达。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞单链DNA表达研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中单链DNA（ssDNA）表达情况。方法流式细胞术检测26例SLE患者（SLE组）外周血ssDNA表达阳性的PBMC细胞百分比（ssDNA阳性率）,设立正常对照组（n=17）和其他结缔组织病（CTD）对照组（n=7）。结果 SLE组、正常对照组和CTD对照组外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（0.906±0.838）%、（0.216±0.371）%和（0.270±0.311）%。统计学分析表明,SLE组患者外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率显著高于两对照组（P〈0.01,P〈0.05）;SLE组内有与无狼疮肾炎患者的外周血B淋巴细胞中ssDNA阳性率分别为（1.228±0.259）%和（0.510±0.436）%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SLE和狼疮肾炎的发生和发展可能与患者外周血表达ssDNA的B淋巴细胞异常增多有关。     

热休克蛋白90在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法使用免疫组化SP法和细胞原位杂交技术检测45例SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)中HSP90蛋白、HSP90mRNA的表达情况,另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者PBMC中HSP90蛋白阳性表达17例(37.78%),15例正常对照组中未见明显阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90蛋白表达的平均吸光度(A)值为(0.412±0.230),显著高于正常对照组(0.117±0.033)和SLE非活动组(0.187±0.019)(均P<0.01);SLE非活动组也显著高于正常对照组(P<0.05)。45例SLE患者中HSP90mRNA阳性表达20例(44.44%),15例正常对照组中未见阳性细胞。半定量分析SLE活动组PBMC中HSP90mRNA表达的平均A值为(0.350±0.225),显著高于正常对照组(0.114±0.009,P<0.01)和SLE非活动组(0.221±0.040,P<0.05);SLE非活动组与正常对照组比较也显著升高(P<0.05)。SLE中抗心磷脂抗体阳性患者HSP90水平明显高于阴性患者。结论SLE患者中存在HSP90的过度表达,且在抗心磷脂抗体阳性的患者中尤其明显,并与疾病的活动性相关。提示HSP90可能在SLE的发病机制中起着重要作用。     

系统性红斑狼疮患者SCF/c-kit的表达及其临床意义

【目的】通过研究系统性红斑狼疮患者血清干细胞因子(SCF)及外周血单个核细胞c-kit表达水平,探讨SCF及其受体c-kit在SLE患者中是否存在异常,是否与SLE疾病活动程度相关,并探讨SCF/c-kit在SLE发病机制中可能的作用。【方法】以ELISA法检测血清的SCF,以流式细胞仪检测外周血单个核细胞的c-kit蛋白的表达率,对比分析SLE活动组、非活动组及正常对照组间SCF/c-kit水平的差异,同时对SLE患者进行SLEDAI评分,并分析各组SCF/c-kit水平与SLEDAI的相关性。【结果】SLE患者SCF/c-kit水平升高,活动期更明显,且与SLEDAI呈正相关。【结论】SCF/c-kit在SLE患者外周血中表达显著增高且与疾病活动程度相关,可作为评估SLE疾病活动程度的指标;SCF/c-kit有可能参与了SLE的发病过程。     

环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮中的分子机制的初步研究

目的:研究环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达并初步分析其分子机制.方法:选取广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2019年3月至2020年9月收治的SLE患者30例(观察组)和健康志愿者34例(对照组),采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测h...     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNIP1基因表达

目的 探讨TNIP1 基因在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中的表达情况,以及与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、单核苷酸多态性(SNP)位点rs10036748的相关性.方法 收集61例SLE患者和66例正常对照的临床资料及血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中TNIP1 mRNA表达量;应用Sequenom MassArray技术对所有病例对照SNP rs10036748位点进行基因分型.结果 SLE患者TNIP1基因 mRNA表达低于正常对照组(P=0.000 4);TNIP1基因 mRNA表达水平与SLEDAI和SNP rs10036748基因型之间无相关性.结论 TNIP1基因在SLE发生中可能起着某种作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中微小RNA-146a的表达

目的 采用生物信息学和分子生物学技术相结合,寻找在系统性红斑狼疮(SLE)中特异性表达的微小RNA,为进一步研究微小RNA在SLE发病机制中的作用打下基础.方法 查找与SLE发病相关的基因,采用微小RNA靶基因预测数据库预测SLE相关基因上的可能微小RNA靶位点,选择其相对应的微小RNA-146a,即hsa-miR-146a,采用实时荧光定量PER方法检测SLE患者与正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA的表达差异.结果 SLE患者外周血PBMCs中hsa-miR-146a的循环阈值的差值高于正常对照组(4.52±1.18比2.76±1.38,P=0.02),hsa-miR-146a的表达量显著低于正常对照组.结论 SLE患者PBMCs中hsa-miR-146a的表达水平降低,表明hsa-miR-146a在SLE发病机制中可能发挥一定的作用.     

女性系统性红斑狼疮患者雌激素受体的表达

目的:检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中雌激素受体在基因和蛋白水平的表达,分析其表达类型与女性系统性红斑狼疮的相关性。方法:收集46例女性SLE患者和33例健康体检者空腹静脉血,分离PBMCs,采用RT-PCR法检测PBMCs中雌激素受体(estrogen receptor,ER)αmRNA、ERβmRNA的表达,荧光免疫技术检测ERα和ERβ在蛋白水平的表达。分析两组ER表达的差异。结果:SLE患者组PBMCs中ER亚型在基因和蛋白水平上的表达率与正常对照组无显著差异(P>0.05)。结论:ER的表达类型与女性SLE没有相关性。     

体外循环心内直视术对外周血单个核细胞蛋白质表达谱的作用

目的:观察体外循环(CPB)心内直视术患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化.方法:11例体外循环心内直视术患者,分别于体外循环前(T0)、体外循环主动脉开放后1 h(T1)和术毕(T2)3个时点抽取动脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用双向电泳和质谱方法比较、分析3个时间点差异蛋白的表达,并采用Western blot进行验证.结果:双向电泳和质谱鉴定出12个差异蛋白,其中S100A9表达量于CPB后1 h达到高峰,手术结束时开始下降,但未回复到术前水平(P<0.05).结论:体外循环能上调外周血单个核细胞S100A9等蛋白的表达.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th17/Treg细胞和尿单核细胞趋化蛋白-1的检测及意义

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17细胞)/调节性T细胞(Treg细胞)比率及尿液单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平及临床意义。方法 选取2018年7月—2020年9月十堰市人民医院收治SLE患者68例,根据SLE患者有无肾脏受累分为非狼疮肾炎组28例(non-LN组)和狼疮肾炎组40例(LN组),同期医院健康体检者35例为健康对照组。收集受试者临床资料,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比率,采用RT-PCR技术检测Th17细胞和Treg细胞相应的转录因子维甲酸相关孤核受体(ROR-γt)和叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)mRNA表达量,采用ELISA法检测尿液MCP-1水平。采用Spearman相关分析Th17/Treg细胞比率与尿液MCP-1的关系及其与临床指标的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析Th17/Treg细胞比率和尿液MCP-1水平诊断SLE患者合并LN效能。结果 LN组和non-LN组Th17细胞比例均高于健康对照组(F=12.345,P=0.015),Treg细胞比例比较,L...     

SLE患者PBMC中IFN-γ和IL-6的表达

目的 :在单个细胞水平上研究系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)的细胞内细胞因子IFN γ和IL 6的表达与疾病发病的关系。方法 :用酶联免疫斑点法 (ELISPOT)检测患者PBMC的细胞内细胞因子IFN γ和IL 6的表达情况。结果 :活动期SLE患者PBMC中IL 6及Th2 Th1 比值与正常人相比显著升高 (P <0 .0 1)。结论 :在SLE患者PBMC中细胞因子IL 6升高 ,表达倾向于向Th2 偏移 ,Th1 Th2 平衡在SLE发病机制中起重要作用。     

ZBTB20在SLE患者外周血B细胞中的表达和临床意义

目的 研究锌指和BTB结构域蛋白20 (ZBTB20)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞中的表达,并探讨ZBTB20在SLE中的临床意义.方法 采用RT-PCR技术检测36例SLE患者(SLE组)和30例健康对照者(对照组)外周血CD19+B细胞中ZBTB20 mRNA的表达水平;Western blot检测分析外周血ZBTB20蛋白水平;流式细胞术检测B细胞亚群所占比例.分析SLE患者B细胞中ZBTB20 mRNA的表达与B细胞亚群比例变化的关系及与临床指标(抗ds-DNA抗体、抗核抗体、免疫球蛋白IgG、抗ENA抗体)的相关性.结果 SLE组外周血CD19+B细胞中ZBTB20 mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.05);SLE组患者外周血ZBTB20蛋白水平高于对照组(P＜0.05).与对照组相比,SLE患者外周血B细胞亚群,CD19+B细胞比例降低(P＜0.05),CD19-CD138+浆细胞/CD19+B细胞之间的比值及CD19-CD138+浆细胞比例明显增高(P＜0.05);SLE患者B细胞中ZBTB20 mRNA的表达水平与CD19-CD138+浆细胞/CD19+B细胞的比值呈正相关(P＜0.05);ZBTB20 mRNA与抗ds-DNA抗体、免疫球蛋白IgG、抗核抗体、抗ENA抗体均呈正相关(P＜0.05).结论 ZBTB20可能通过促进B细胞分化从而参与SLE发病.     

IKB激酶在系统性红斑狼疮患者中的表达及临床意义

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)IKB激酶(IKK-β)表达水平,并探讨其临床意义。方法:实时荧光定量聚合酶链反应技术检测IKK-βmRNA表达水平;蛋白印迹法检法检测IKK-β、磷酸化IKK-β表达水平,并观察IKK-β的表达与疾病活动的相关性。结果:(1)SLE患者TNF水平(242.88±49.95pg/ml)显著高于正常对照组(115.23±31.55pg/ml),差异有统计学意义(p0.05);(2)SLE患者IKK-β基因表达水平(1.61±1.3)与正常人(1.57±1.38)相比无差异(p0.05);(3)SLE患者磷酸化IKK-β蛋白表达水平(1.55±0.21)显著高于正常人(0.95±1.1),差异有统计学意义(p0.05);(4)SLE患者IKK-β表达与抗核抗体、dsD水平呈正相关(p0.05)。结论:SLE患者外周血IKK-β表达明显增高,与SLE发病及病情活动相关,提示IKK-β在SLE的发病中发挥重要的作用。