血及脑脊液β-淀粉样蛋白对老年期痴呆鉴别诊断的意义

目的:探讨血及脑脊液中β-淀粉样蛋白(β-AP)对老年期痴呆主要包括老年性痴呆(AD)、血管性痴呆(VD)及其他原因所致的痴呆(OD)的鉴别诊断意义。方法:采用平衡饱和竞争放射免疫分析法对55例不同类型的痴呆患者及30例正常对照者血清及脑脊液(CSF)中β-AP进行测定。结果:在正常对照组,随着观察者年龄的增长,血清β-AP含量缓慢增高,CSF中β-AP含量缓慢下降(r分别为0.56,0.52,均P<0.01)。不同病因痴呆患者血清β-AP含量均高于对照组,其中AD组最明显;CSF中β-AP含量在AD组最低,明显低于对照组(P<0.01),在VD组最高,接近对照组(P>0.05)。AD组中的重度痴呆患者,其β-AP含量在血清中升高最明显,同时在CSF中降低也最显著。结论:血清及CSF中β-AP含量变化的测定,可能有助于各型痴呆的鉴别诊断及AD患者病情轻重的判断,但这种变化具重叠性。     

神经细胞凋亡(Apoptosis)与Alzheimer's病(AD)

<正> 到目前为止,确切的AD动物模型还没有建立,对神经元变性的研究仍以体外培养的神经细胞为实验基础。自从发现淀粉样蛋白(β-AP)是AD的病理特征—老年斑的主要成份以来,β-AP与AD的发病关系得到了大量的证实和公认,本文以β-AP诱导神经元变性为线索,综述了细胞凋亡可能是AD的发病机制之一。     

阿尔茨海默病患者脑脊液中IL-1β及IL-6含量的变化

Alzheimer病(AD)特征性病理学改变是在大脑皮质和海马出现大量老年斑(senile plaque, SP)或神经炎性斑和神经纤维缠结(NFT)并伴有神经元丧失.近年来许多研究发现IL-1β、IL-6参与AD脑内神经炎性病变及老年斑形成过程而非炎症结果[1].我们测定了AD、多发性梗塞痴呆(MID)及对照组患者脑脊液(CSF)中IL-1β和IL-6含量,进行对比分析,以探讨IL-1β和IL-6在AD发病机制中的作用及其临床意义.     

拟阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区HSP27及IL-1表达

目的 探讨Aβ(β-淀粉样肽)诱AD大鼠模型中海马HSP27和IL-1的表达, 研究信号转导及炎性机制在AD中的作用.方法 采用立体定向下双侧海马注射Aβ1-42建立AD动物模型,通过免疫组化染色及Western blot等方法, 观测大鼠学习记忆能力、海马组织结构的病理改变及HSP27和IL-1 的表达情况.结果 HE染色显示,模型组大鼠海马神经元变性、缺失,胶质细胞浸润;免疫组化结果显示模型组大鼠海马CA1区HSP27和IL-1 免疫阳性细胞表达多见(P＜0.05);Western blot显示模型组海马组织HSP条带增宽表达强度高于对照组(P＜0.05).结论 HSP27在AD的炎症反应机制中可能具有重要作用.     

β-淀粉样蛋白对海马长时程增强的影响及作用机制

阿尔茨海默病(AD)是老年人群中最普遍的神经退行性疾病,其主要特征是海马区淀粉样蛋白寡聚体的沉积.β-淀粉样蛋白(Aβ)聚合成寡聚状态被认为是AD发病过程中最重要的环节,而海马区是AD发病中的最敏感的区域.AD的早期临床症状即包括与海马相关的认知功能的下降,如空间学习和记忆能力的下降等.长时程增强(LTP)是反映突触可塑性的重要指标之一,被认为与学习和记忆的形成有关.本文结合近年来相关研究,就Aβ对海马LTP的影响及其主要机制作一阐述.     

四氢小檗碱对β-AP诱导神经元凋亡的影响

目的阐明β-AP诱导神经元凋亡的机制及四氢小檗碱的保护作用。方法1．形态学观察β-AP25-35诱导离体海马培养神经元凋亡；2．玻片法培养海马神经元，分6组观察四氢小檗碱的保护作用；3．用MTT法检测细胞存活情况；4．用Fura2技术测定细胞内游离Ca2+含量。结果四氢小檗碱组的海马神经元凋亡数量均显著降低(P<0．05)，及明显降低β-AP可诱导细胞内Ca+增高，并呈剂量依赖性。结论四氢小檗碱对神经元凋亡有保护作用，可能与降低细胞内Ca+含量有关。     

熟地黄抑制阿尔茨海默病样大鼠海马神经元凋亡的作用

目的探讨凋亡机制在β-淀粉样肽致阿尔茨海默病(AD)作用中的意义及熟地黄对Aβ神经毒的干预效果。方法用β-淀粉样肽1￣40片段(Aβ1-40)行大鼠侧脑室注射以建立AD样病变动物模型;用Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆功能;蛋白印记法及激酶活性测定法检测海马内半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和活性,琼脂糖凝胶电泳观察海马神经元凋亡;以熟地黄(大、小剂量)对Aβ1-40处理的大鼠连续灌胃21d,观察其干预效果。结果大鼠脑内注射Aβ1-40后,经行为学检测发现其学习记忆功能明显减退;海马内caspase-3含量和活性明显增高,细胞核DNA降解;经熟地黄灌胃处理后,对上述变化有不同程度的改善作用。结论Aβ1-40能诱导海马神经元凋亡,熟地黄对Aβ1-40诱导的大鼠海马神经元凋亡有保护作用,这可能是其改善AD样大鼠学习记忆功能作用机制之一。     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

阿尔茨海默病患者海马雌激素受体α和β共表达减少

目的　探测雌激素受体在阿尔茨海默病 (AD)患者海马中的变化。方法　运用免疫荧光细胞化学双标和激光共聚焦扫描显微镜 ,对 10例AD患者和 10例对照组海马进行观察 ,并进行统计分析。结果　在老年对照组和AD患者组中 ,雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)均主要在锥体层神经元中表达 ,而放射层和始层中稀少 ;且多分布于胞质 ,胞核较少。ERα和ERβ免疫荧光双标细胞可分为三种类型 :(1)胞质双标细胞 ;(2 )胞核双标细胞 ;(3)ERα核染色而ERβ质染色细胞。海马CA1区胞核双标神经元与ERα阳性神经元的比率或与ERβ阳性神经元的比率 ,AD组分别为2 6 %± 0 5 %和 1 7%± 0 3% ,均低于对照组 (分别为 5 0 %± 0 7%和 3 9%± 0 6 % ) ,均 (P <0 0 0 1)。结论　雌激素受体α和 β核双标细胞的减少可能在AD发病机制中起重要作用。     

14-3-3蛋白与阿尔茨海默病tau蛋白异常磷酸化的关系

目的研究阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)患者海马组织1433蛋白家族与神经原纤维缠结(NFT)形成及tau蛋白异常磷酸化之间的关系。方法以4例临床及病理确诊的AD患者及4名对照者海马组织为材料,用免疫组织化学、免疫印迹及免疫共沉淀技术来研究1433蛋白在AD患者海马的表达情况及其与异常磷酸化tau蛋白之间的关系。结果1433蛋白ζ及γ亚型能使AD患者海马的NFT显色,β亚型主要使海马的颗粒神经元着色,同时也使少许NFT染色。免疫印迹显示β和ζ亚型在AD中明显上调,其像素值(分别为4570±92和5630±40)比对照组(分别为1849±65和956±140)高2～3倍(P<0.01,t检验)。免疫共沉淀分析发现单抗双螺旋细丝(PHF1)从AD患者脑中沉淀的1433蛋白像素值(3859±78)显著多于对照组(1540±138,AD组像素值比对照组高1倍,P<0.05,t检验),这3种亚型均与异常磷酸化tau蛋白在AD患者脑部形成复合物。σ亚型在AD患者和对照组脑中均无表达。上述发现在4名对照者脑组织中并未观察到。结论β、ζ及γ亚型1433蛋白参与NFT形成,它们均可能参与tau蛋白的磷酸化调节,具体机制有待阐明。     

白藜芦醇对β-淀粉样蛋白致小鼠学习记忆障碍改善作用的机制研究

目的探讨白藜芦醇改善阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型学习记忆障碍的作用机制。方法本实验采用45只小鼠侧脑室注射Aβ1-42建立AD模型,随机分为假手术组、模型组、白藜芦醇给药组。Morris水迷宫试验观察大鼠学习记忆能力的变化,尼氏染色观察大鼠海马神经元结构变化,ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α和IL-1β的含量。结果 Aβ1-42侧脑室注射可造成小鼠明显的学习记忆功能障碍和海马神经元的大量丢失,并可导致海马区TNF-α和IL-1β产生量明显增加和NF-κB炎症信号通路激活,引起炎症反应。小鼠灌胃给予白藜芦醇后可明显改善其学习记忆功能障碍(P<0.05)和提高海马神经元的数量(P<0.05),显著抑制TNF-α(P<0.01)和IL-1β(P<0.05)产生量和NF-κB(P<0.05)炎症信号通路的激活。结论白藜芦醇对AD具有治疗作用,其作用机制可能与抑制炎症反应,进而保护神经元有关。     

Humanin对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病大鼠空间记忆的影响及其作用机制

目的 探讨Humanin(HN)对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠空间记忆的影响及其作用机制.方法 36只Wistar大鼠按照随机数字表法分为生理盐水组(海马注射生理盐水)、AD模型组(海马注射Aβ_(1-42))和HN治疗组(海马注射Aβ_(1-42)制成AD模型后在同一部位注入2 μL HN),每组各12只.对各组大鼠进行Morris水迷宫空间记忆能力测试.免疫组织化学方法检测各组大鼠微管相关蛋白2(MAP2)的表达.利用Western blot方法检测各组大鼠synapsin 1蛋白水平.结果 与生理盐水组相比,AD模型组Morris水迷宫测试的潜伏期明显延长,MAP2表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),HN组则无统计学意义(P>0.05).Synapsin 1蛋白在HN治疗组中表达明显高于生理盐水组和AD模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),而生理盐水组和AD模型组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 HN可以显著改善由Aβ_(1-42)所致AD大鼠的空间记忆能力,推测与HN提高MAP2与synapsin 1蛋白表达有关.     

白藜芦醇对AD大鼠学习记忆能力和海马P-tau表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠学习记忆能力的影响及作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和白藜芦醇高、中、低剂量组。采用Aβ双侧海马注射建立AD大鼠模型。水迷宫试验观察大鼠学习记忆能力的变化,HE染色观察大鼠海马组织形态结构变化,免疫组化SP法检测大鼠海马组织P-tau的表达。结果白藜芦醇可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.01),减少海马神经元丢失,显著性降低海马P-tau蛋白的表达(P<0.01)。结论白藜芦醇能改善AD模型大鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与有效降低P-tau蛋白有关。     

褪黑素对阿茨海默病大鼠海马突触素表达的影响

目的 研究褪黑素(melatonin,MT)对阿茨海默病(Alzheimer's disease , AD)大鼠的海马突触素表达的影响.方法 大鼠随机分为4组,分别为AD组、AD-MT大剂量干预组、AD-MT小剂量干预组和假AD组.应用β-淀粉样蛋白(Aβ)注入大鼠海马CA1区,建立大鼠AD模型,AD-MT干预组随之以MT灌胃,1次/d,直至试验结束.应用电迷宫检测大鼠学习记忆情况,用免疫组化方法检测大鼠海马CA1区突触素的表达情况.结果 MT可以明显改善AD大鼠的学习记忆能力,提高大鼠海马CA1区突触素的阳性表达.结论 MT对AD大鼠有显著脑保护作用.     

钾通道阻断剂4-氨基吡啶诱导海马CA1锥体神经元钙瞬变

目的 研究4-氨基吡啶(4-AP)诱导的急性脑片海马CA1锥体神经元钙瞬变现象,探讨钾通道功能与钙瞬变的关系及可能机制.方法 荧光探针标记正常大鼠急性脑片海马神经元.共聚焦显微镜技术进行钙成像,观察不同浓度4-AP及细胞灌流液条件对神经元钙瞬变的影响.结果 低浓度(<15 mmol/L)4-AP诱导的钙瞬变峰值与剂量呈线性相关(r2=0.910,P=0.000),高浓度(20～80 mmol/L)4-AP诱导的钙瞬变峰值随浓度增高而下降.在无钙灌流液条件下,4-AP诱导的钙瞬变峰值水平下降,达峰时间延长,与含钙灌流液比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 4-AP可诱导急性脑片海马CA1锥体神经元的钙瞬变,其机制包括细胞外钙内流与钙库钙释放.     

钾通道阻断剂4-氨基吡啶诱导海马CA1锥体神经元钙瞬变

目的 研究4-氨基吡啶(4-AP)诱导的急性脑片海马CA1锥体神经元钙瞬变现象,探讨钾通道功能与钙瞬变的关系及可能机制.方法 荧光探针标记正常大鼠急性脑片海马神经元.共聚焦显微镜技术进行钙成像,观察不同浓度4-AP及细胞灌流液条件对神经元钙瞬变的影响.结果 低浓度(<15 mmol/L)4-AP诱导的钙瞬变峰值与剂量呈线性相关(r2=0.910,P=0.000),高浓度(20～80 mmol/L)4-AP诱导的钙瞬变峰值随浓度增高而下降.在无钙灌流液条件下,4-AP诱导的钙瞬变峰值水平下降,达峰时间延长,与含钙灌流液比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 4-AP可诱导急性脑片海马CA1锥体神经元的钙瞬变,其机制包括细胞外钙内流与钙库钙释放.     

炎性细胞因子在Alzheimer病发病中的作用

Alzheimer病(AD)是以进行性痴呆为主要临床特征的神经系统退行性变性疾病.其病理改变为选择性神经元丢失、神经元外的β淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成老年斑(SPs)、神经元内tau蛋白异常聚集形成神经原纤维缠结(NFTs);另外尚伴有颗粒空泡变性(GD)、平野小体和脑血管改变.病理改变主要分布于海马、杏仁核、皮质和皮质下区的连接部位(除外小脑),即与智力、学习和记忆相关的关键部位.AD的病因至今尚未完全明了,其发病机制有多种学说.现对炎性细胞因子在AD发病中的作用综述如下.……     

ω-3不饱和脂肪酸DHA改善β淀粉样蛋白沉积致AD的小鼠模型记忆功能的机制研究

目的 探讨ω-3不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)改善β淀粉样蛋白(Aβ1-42)沉积所致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的小鼠模型记忆功能的作用机制。方法 采用Aβ-intrahippocampal injection法向36只小鼠脑内海马部位注射寡聚态Aβ1-42建立AD小鼠模型,随机分为假手术组(羧甲基纤维素钠灌胃)、Aβ模型组(羧甲基纤维素钠灌胃)和Aβ+DHA组(DHA灌胃)。Morris水迷宫检测小鼠的记忆功能;尼氏染色检测海马神经元的变化; ELISA法检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素16(IL-16)的含量; Western blot检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、干扰素-γ(IFN-γ)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果 与假手术组相比,Aβ模型组和Aβ+DHA组小鼠的潜伏期延长,跨越平台次数和BDNF蛋白相对表达量减少,而TNF-α和IL-16含量、IFN-γ和NF-κB蛋白表达量升高;与Aβ模型组相比,Aβ+DHA组小鼠的潜伏期缩短,跨越平台次数和BDNF蛋白表达量增加,而TNF-α和IL-16含量、IFN-γ和NF-κB蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论 DHA可以改善Aβ1-42致AD小鼠模型记忆功能障碍,其作用机制可能与降低海马组织中TNF-α和IL-16含量,抑制IFN-γ和NF-κB蛋白表达,促进BDNF蛋白表达有关。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在阿尔茨海默病患者脑中的沉积及与Aβ1-42的关系

目的通过研究阿尔茨海默病(AD)患者脑中α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)与β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的关系，初步探讨α7nAChR在AD发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学单染和共染方法，观察α7nAChR在3例临床和病理证实的AD患者脑中的沉积及与Aβ1-42的关系，以3名正常脑组织蜡块为对照。结果抗α7nAChR和抗Aβ1-42单染发现：AD脑中有α7nAChR的异常沉积，其沉积部位与Aβ1-42形成的老年斑的沉积部位一致，主要发生在海马和颞叶皮层，绝大部分在细胞外，偶尔在细胞内，其沉积方式从形态来看主要存在于老年斑中。正常脑中无α7nAChR沉积。抗α7nAChR和抗Aβ1-42共染进一步显示，α7nAChR和Aβ1-42共同沉积于AD脑的老年斑中，两者在海马、颞叶、额叶中的平均共染率分别为57．8％、51．0％和21．8％，α7nAChR在海马和颞叶中的沉积比额叶更多。结论α7nAChR与Aβ1-42可能在AD患者脑中结合，使α7受体遭受破坏或阻滞，或造成α7nAChR介导的胆碱能神经元的死亡，从而影响认知和记忆。     

阿尔茨海默病脑海马凋亡神经元发生率增高

通过对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)和老年对照患者死后脑海马凋亡神经元的检测 ,探讨AD脑神经元丢失的可能机制。使用TUNEL(terminaltransferase mediateddUTP biotinnickendlabeling)法对 7例确诊的AD和 9例老年对照患者死后海马组织中的凋亡神经元进行标记 ,用生物图像分析系统对结果进行定量分析。AD和对照组间TUNEL阳性细胞数无显著性差异 ;AD组海马CA1和CA4区正常神经元数减少 ,其中CA1区减少具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;AD组海马CA1和CA4区凋亡神经元发生率高于对照组 ,其中CA1区具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AD组海马组织中凋亡神经元发生率明显增高 ,说明细胞凋亡可能参与了AD海马神经元退行性变的过程。