神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

Smad7反义寡核苷酸对TGF-β1调控人牙髓细胞生长和分化的影响

目的 :观察Smad7反义寡核苷酸对转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor -β ,TGF -β1)调控人牙髓细胞生长和分化的影响。方法 :细胞培养 ,细胞转染 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :Smad7反义寡核苷酸促进TGF -β1对人牙髓细胞增殖的诱导作用和对碱性磷酸酶活性的抑制作用。 结论 :Smad7参与介导TGF -β1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的调控 ,提示TGF -β1调控人牙髓细胞生长和分化可能是通过Smad信号途径发生的     

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的：探讨bFGF和TGF-β对体外培养的人牙髓f细胞增殖和分化能力的影响。方法：采用MTT法分别测定了bFGF和TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓十细胞分化能力的影响。结果：0～40ng／mL范围内，bFGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖，EL具有浓度和时间依赖性，而TGF～8促增殖作用较弱；两肯联合作用，促增殖作用无显著提高，而促分化作用显著增强，不仪细胞形态明显改变，而且碱性磷酸酶活性显著提高，DSP、DMP-1呈阳性表达，向成牙本质细胞样细胞分化。结论：bFGF和TG-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用，为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。     

人重组骨形成蛋白-1对牙髓细胞生物学效应的研究

通过细胞培养技术，噻唑盐比色测定，酶动力学方法和放射免疫技术，了解人重组骨形成蛋白－１对体外培养的人牙髓细胞增殖，碱性磷酸酶活性及骨钙素表达的影响。结果表明，ｒｈＯＰ－１牙促进牙髓细胞增殖，提高牙髓碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达，在本实验剂量范围内呈浓度依赖关系，具有诱导牙髓细胞中成骨方向转化的趋势。     

大鼠牙髓细胞复合β-磷酸三钙多孔陶瓷体外培养的实验研究

目的:研究大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养后的生长情况及细胞活性,探讨β-TCP作为大鼠牙髓细胞支架材料的可行性。方法:实验分两组,实验组为大鼠牙髓细胞与β-TCP复合培养,对照组为大鼠牙髓细胞常规培养。采用相差显微镜、电子显微镜观察细胞生长、贴附情况;采用MTT、细胞蛋白检测、碱性磷酸酶检测的方法评价大鼠牙髓细胞生长情况及细胞活性。结果:大鼠牙髓细胞复合β-TCP后生长良好,贴附于材料表面及孔隙内壁。MTT及细胞蛋白检测复合培养组和对照组无差异,6 d、9 d时复合β-TCP培养的大鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性明显高于对照组。结论:复合β-TCP进行培养的大鼠牙髓细胞生长良好,没有出现生长抑制现象,其细胞活性更明显增强,表明β-TCP完全符合牙髓细胞支架材料的要求,是一个具有很好应用前景的牙髓组织工程支架材料。     

羟基磷灰石、氢氧化钙对鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：检测羟基磷灰石和氢氧化钙颗粒对鼠原代牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用０．５％胰酶－０．１％ＥＤＴＡ消化法获取ＳＤ鼠原代牙髓细胞。细胞接种后，分别加入氢氧化钙和羟基磷灰石颗粒（＜５０μｍ），在７ｄ或１４ｄ分别测定鼠原代牙髓细胞的碱性磷酸酶活性。结果：氢氧化钙抑制牙髓细胞碱性磷酸酶活性与其高浓度抑制细胞生长有关；羟基磷灰石具有良好的生物相容性，但其能够显著抑制牙髓细胞碱性磷酸酶的活性，抑制率（０．６ｍｇ／ｍｌ）在７ｄ时为５４．６％，１４ｄ时为４９．０％。结论：羟基磷灰石颗粒的作用可能与牙髓细胞去分化过程有关，两种材料对牙髓细胞的活性存在着不同的作有机制。     

釉基质蛋白对体外培养的兔骨髓基质细胞生物学功能的影响

目的：观察釉基质蛋白对兔骨髓基质细胞增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白合成等一般生物学功能的影响。方法：MTY法检测细胞增殖能力，酶动力法检测细胞碱性磷酸酶活性，利用Biophotometer生物检测仪检测细胞总蛋白合成能力。结果：釉基质蛋白可以促进骨髓基质细胞的增殖、提高细胞的碱性磷酸酶活性和总蛋白合成能力。以100mg／L釉基质蛋白的促进作用最明显。釉基质蛋白促进细胞增殖、提高细胞碱性磷酸酶活性、促进细胞总蛋白合成的作用分别在120h、72h、168h时最明显。结论：釉基质蛋白对兔骨髓基质细胞增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白合成能力等一般生物学功能有不同程度的促进作用。     

脑源性神经营养因子在人牙髓干细胞中的表达及其对细胞增殖分化的影响

目的:检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurtrophie factor,BDNF)在人牙髓干细胞中的表达,初步观察其对细胞增殖和分化的影响.方法:采用酶消化法分离培养人牙髓干细胞;RT-PCR检测细胞中BDNF mRNA表达;MTT和碱性磷酸酶活性检测观察其对细胞增殖分化的影响.结果:RT-PCR反应扩增出BDNF mRNA阳性产物;与对照组相比,25 ng/mL BDNF可显著促进牙髓干细胞的增殖(P<0.05);100 ng/mL时可显著提高碱性磷酸酶活性(P<0.05).结论:BDNF可表达于人牙髓于细胞,对细胞增殖分化有一定促进作用.     

体外持续培养对人牙髓细胞分化能力的影响

目的：探讨人牙髓细胞在体外持续培养时，其分化能力的变化趋势。方法：体外持续培养人牙髓细胞，检测不同代次细胞的碱性磷酸酶活性、钙化能力及Ⅰ型胶原表达，并对比分析。结果：随着体外培养细胞代次的增多，在同等刺激分化条件下，人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性整体呈下降趋势，钙化结节的数目和面积逐渐减少，Ⅰ型胶原表达合成逐渐减少。结论：人牙髓细胞在体外持续培养时，分化能力逐渐下降，可能与其含有的未分化细胞（人牙髓干细胞）数目逐渐减少有直接关系。     

小肠黏膜下层对牙髓细胞粘附、增殖和再矿化影响的研究

目的探讨小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)作为盖髓材料的可行性。方法分别以SIS、聚乳酸(polylactic acid,PLA)医用膜为细胞支架与人牙髓细胞复合培养,测定2组细胞粘附率、细胞增殖指数,并通过比较2组细胞的碱性磷酸酶活性水平和钙结节形成的大小,研究各组牙髓细胞的矿化能力。结果复合培养24 h时SIS组的细胞粘附率为64.36%,高于PLA组(P<0.05),且复合培养3、5、7 d时SIS组的细胞增殖指数分别为23.0、18.9、17.9,均高于PLA组(P<0.05)。SIS组细胞的碱性磷酸酶活性水平在7、14、21 d均高于PLA组(P<0.05),并且28 d时SIS组形成钙结节,PLA组未形成明显的钙结节。结论 SIS有良好的生物相容性,在体外能促进牙髓细胞增殖、矿化,有望成为一种新型的盖髓材料。     

表皮生长因子对MDPC-23细胞增殖和ALP活性的影响

目的 :观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)对成牙本质细胞系MDPC -2 3细胞增殖和碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)活性的影响。 方法 :细胞培养、MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :在一定浓度范围内 ,EGF明显促进MDPC -2 3细胞增殖 ,抑制MDPC -2 3细胞内碱性磷酸酶活性 ,并呈一定的剂量依赖性。结论 :EGF能促进成牙本质细胞增殖 ,而抑制其分化     

3D打印个体化钛网的机械力学性能及生物相容性分析

目的 比较3D打印钛网与成品钛网的机械力学性能差异,并评价3D打印钛网对细胞生长及分化的影响。方法 采用激光打印技术制备个体化3D打印钛网,用静态拉伸压缩载荷实验检测机械力学性能,评估机械力学性能。选择4周龄雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞,与不同孔径大小的3D打印钛网共培养。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;对各组细胞进行成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶（ALP）活性改变,运用实时荧光定量PCR检测相关成骨基因的表达;通过扫描电镜及活/死细胞染色,观察细胞在3D打印钛网上的黏附和生长情况。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果 3D打印钛网的拉伸压缩负载实验结果显示其具有优异的力学性能;相比对照组,不同孔径钛网对细胞增殖的影响不大,细胞在钛网上显现出良好的黏附和生长状态。3D打印钛网对成骨分化具有一定的促进作用。结论 3D打印钛网的机械力学性能优异,且具有良好的生物相容性。     

nHACP／CF材料与成骨细胞体外复合培养的实验研究

目的:检测甲壳素纤维增强多孔胶原基骨组织工程支架材料(nHACP/CF)对成骨细胞附着增殖的影响,为骨组织工程支架材料的选择提供实验依据.方法:原代培养大鼠成骨细胞,将第3代细胞与nHACP/CF材料体外复合培养.碱性磷酸酶(ALP)染色对成骨细胞进行鉴定;将不同浓度成骨细胞接种到nHACP/CF支架上,通过检测ALP活性测定最佳接种浓度;通过扫描电镜观察和各培养时点细胞增殖率及ALP活性检测,评价nHACP/CF材料对成骨细胞的影响.采用SPSS11.5软件包对测定结果进行单因素方差分析.结果:大鼠成骨细胞ALP染色阳性.统计分析表明,6×105/ml为细胞最佳接种浓度;大鼠成骨细胞能在nHACP/CF材料上附着、增殖,其生长及功能不受抑制.结论:nHACP/CF材料是大鼠成骨细胞附着生长的良好载体.     

纳米羟磷灰石/聚酰胺66对成骨细胞生物学作用的实验研究

目的　研究新型纳米根管充填材料纳米羟磷灰石/聚酰胺66(nHA-PA66)对成骨细胞的生物学作用。方法 　以含nHA-PA66的细胞培养基(DMEM)浸提液作用于实验组细胞,DMEM培养基作用于对照组细胞,采用MTT比 色法检测nHA-PA66对成骨细胞生长的影响;酶联法检测细胞ALP活性的变化;QRT-PCR测量细胞骨钙素基因表达 的变化。结果　实验组细胞的相对增殖率在98%~106%之间,且无量效关系,实验组与对照组间无显著性差异 (P>0·05);实验组和对照组细胞的ALP活性及骨钙素基因表达相似,皆无显著性差异(P>0·05)。结论　nHA- PA66对成骨细胞的生长和功能无不良影响,具有骨细胞相容性。     

FN对牙龈和牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的：观察纤维结合蛋白（FN）对牙龈成纤维细胞（GF）、牙周膜成纤维细胞（PDLF）的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶（ALP）测定法、考马斯亮蓝法和茜素红染色法。结果：FN能促进两种细胞的增殖，对PDLF的碱性磷酸酶活性和蛋白合成也有促进作用，但对其矿化结节形成能力无显著影响。结论：FN能促进牙龈和牙周膜成纤维细胞的增殖及蛋白合成，但其促进细胞分化的能力有限，尚需其它生长因子的协助以促进组织再生。     

信号素3A对成牙骨质细胞系OCCM-30增殖和矿化功能影响的实验研究

目的:初步探讨信号素3A(Semaphorin3A, Sema3A)对成牙骨质细胞增殖、矿化的影响。方法:采用不同浓度的重组人Sema3A(0、0.5、1 mg/L)处理成牙骨质细胞OCCM-30。MTT法检测Sema3A对成牙骨质细胞增殖的影响,酶比活性法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,实时荧光定量 PCR法检测骨钙素(OCN),骨桥蛋白(OPN)和Runx2基因的表达,茜素红染色法检测矿化结节的形成。结果:Sema3A对成牙骨质细胞的增殖和ALP活性无明显影响。Sema3A抑制OCN和Runx2基因的表达(P<0.05),并抑制矿化结节的形成。结论:Sema3A对成牙骨质细胞的增殖无明显影响,但对细胞的矿化功能起到抑制作用。     

富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。     

壳聚糖修饰的羟基磷灰石纳米粒载体介导BMP-2转染成骨细胞的研究

目的:研究壳聚糖(chitosan,CS)修饰的羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)纳米粒载体携带骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein2,BMP2)基因转染成骨细胞,及转染后对细胞增殖与分化的影响。方法:采用MTT法检测HA-CS纳米粒载体对成骨细胞的毒性反应;用HA-CS纳米粒载体转染技术,将BMP-2目的基因导入成骨细胞,评估转染效率;检测细胞增殖情况及碱性磷酸酶(alkaline phoaphatase,ALP)活性。结果:MTT结果提示HA-CS纳米粒混悬液浓度在500mg/L以下对成骨细胞无毒性作用;其转染效率优于没经修饰的HA;转染后促进成骨细胞增殖并增加了ALP活性。结论:HA-CS纳米粒在一定浓度下对成骨细胞无毒性作用,作为输送载体可以安全地将目的基因BMP-2导入成骨细胞,并促进了成骨细胞的增殖与分化。     

1,25-二羟维生素D3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3)对成牙本质细胞系MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:细胞培养,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法.结果:1,25-(OH)2D3明显抑制MDPC-23细胞增殖,而促进MDPC-23细胞内碱性磷酸酶活性,呈一定的剂量和时间依赖性.结论:1,25-(OH)2D3可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用.