丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽细胞免疫应答作用的研究

目的探讨丙型肝炎病毒高变区1模拟表位7肽在体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后的细胞增殖情况。方法选用经7肽皮下多点免疫和脾内直接注射两种免疫途径的免疫小鼠,无菌条件下分离脾淋巴细胞后,实验组分为刺激组与未刺激组,刺激组脾细胞再经7肽刺激,应用单溶液细胞增殖检测法体外检测7肽对免疫小鼠脾淋巴细胞在不同浓度和不同培养时间点增殖的影响。结果体外7肽刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后,刺激组的脾淋巴细胞增殖反应与未刺激组比较存在促进作用,与对照组比较出现了明显的增殖反应。结论丙型肝炎病毒高变区1合成肽在体外对免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的促增殖作用。     

应用早熟染色体凝聚方法研究电离辐射对细胞的损伤及修复

大量的实验已证明电离辐射诱发的淋巴细胞染色体畸变可作为可靠的生物剂量仪。然而常规细胞遗传学方法,只能分析分裂中期细胞中的染色体,间期的淋巴细胞要进入有丝分裂期,必须在植物血凝素刺激下培养二天才能达到。     

乙型肝炎患者外周血中淋巴细胞产生白细胞介素-2水平的检测

白细胞介素-2(IL-2)是机体免疫反应过程中的一个中心调节分子,参与各种免疫调节过程。IL-2可促使T细胞增殖,活化杀伤细胞,增强B细胞抗体分泌。IL-2在体内的活性变化与许多疾病的发生及转归有密切关系。因此,检测乙肝患者淋巴细胞在植物血凝素(PHA)刺激下产生IL-2水平,可以间接判断乙肝患者细胞免疫状态。作者采用IL-2依赖的细胞株(CytotoxicT-lymphocyte line,CTLL)检测各型乙肝患者淋巴细胞在PHA刺激下产生IL-2的     

PHA—LCM净化骨髓混合培养中HL—60细胞的实验研究

植物血凝素刺激的人外周血白细胞条件培养液(PHA-LCM)可以在体外诱导 HL-60细胞分化为单核-巨噬细胞。在混合的人骨髓细胞与 HL-60细胞悬液中加入PHA-LCM,有明显的选择性抑制 HL-60细胞生长的效果,从而,为在自体骨髓移植中体外净化髓系白血病细胞提供了一个实验研究的模型。     

狗外周血淋巴细胞转化动力学研究

自从发现植物血凝素(PHA)能够刺激离体人外周血淋巴细胞分裂增殖以来,这一方法被广泛地应用。Ling、Elves已作了较为详细的论述。本文介绍正常狗外周血淋巴细胞转化动力学的观察资料。材料与方法一、培养方法培养液配制。在2毫升RPMI 1640液中(内含20％胎牛血清),加入青霉素200单位,链霉素200微克,PHA300微克(广州     

人外周血淋巴细胞体外辐射敏感性的评定

本文报道了31例(男性20例,女性11例;18～46岁)正常成人外周血淋巴细胞经X线体外照射后增殖能力的实验结果。标本采用全血和经葡聚糖-泛影钠密度梯度法分离的单核的细胞;照射剂量为0～400拉德;用集落形成和淋巴细胞刺激试验(LST)对照射细胞进行辐射敏感性分析。各实验组又分别用植物血凝素(PHA)、刀豆球蛋白A(Con-A)、A蛋白(PA)、美洲商陆(PWM)或结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)作为促进细胞分裂的丝裂原,并用经2500拉德照射过的淋巴细胞作为刺激细胞,经0～400拉德照射后的淋巴细胞作为反应细胞,进行单向淋巴细胞混合培养(MLC)。分析不同方法所得的结果表明:用集落形成的方法检测淋巴细胞的辐射敏感性较LST更为灵敏,比较全血照射和分离的淋巴细胞照射后淋巴细胞的D_(37)值,发现全血照射在大部分的实验组中D_(37)值较相应淋巴细胞照射组为低。作者认为全血照射对淋巴细胞的损伤作用更大,其机理可能与密度梯度法分离的淋巴细胞中含更多的辐射抗性细胞有关,也不排除血内其他细胞的间接或直接影响。现将实验结果择要列表如下:     

γ射线和裂变中子诱发用或不用PHA刺激人淋巴细胞的微核

在有丝分裂期间不能掺入子核的染色体或染色体断片,以微核形式存留在胞质中.辐射能诱发微核,并证明离体照射血细胞,微核与剂量存在着良好的剂量-效应关系.采用Fenech和M?rley提出的用松胞素B(Cyt-B)阻断胞质分裂的方法,研究正常人淋巴细胞在低剂量率(LDR)和高剂量率(HDR)γ射线以及低剂量率的~(252)Cf照射后所诱发的经PHA(植物血凝素)刺激和不经PHA刺激淋巴细胞的微核率.     

细胞免疫试验在肝癌临床上的应用与体会

我们用OT(旧结核菌素)、SK-SD(链导酶、链激酶)、DNCB(二硝基氯苯)皮试、E玫瑰花(自然玫瑰花形成试验)及PHA淋转(植物血凝素淋巴细胞转化)等5项细胞免疫试验,在了解肝癌病人的免疫状态、疗效及予后估计等方面做了些工作,初步体会到体内、体外细胞免疫试验综合使用的重要性。现将有关资料综述如下。     

158例皮肤病细胞免疫功能测定临床意义的进一行探讨

本文对五类158例皮肤病进行了细胞免疫功能的测定研究,其主要目的是了解这些皮肤病的细胞免疫功能的状态和评价体内外细胞免疫功能测定的临床意义。试验方法:采用了两种体外试验(PHA-LTT=植物血凝素——淋巴细胞转化试验,EaFT=活性自然花瓣形成试验);一种体内试验(PHA皮试)。均以患者发病阶段首次的测定来估价,为了了解疾病在各试验中反映的程度,参考正     

人间充质干细胞Stro-1+和Stro-1-亚群免疫抑制作用差异的体外研究

目的 探讨人Stro-1 和Stro-1-间充质干细胞(MSCs)体外免疫抑制作用的差异.方法 从骨髓细胞中分离单个核细胞接种于75cm2的培养瓶中,培养体系为Dexter培养液.当细胞在瓶底贴壁生长达50%融合时消化,并与Stro-1抗体共孵育.再将所获Stro-1 和Stro-1-MSCs扩增15天(中位数)后进行流式细胞仪分析.设立单向混合淋巴细胞反应(MLR,于96孔板中加入反应淋巴细胞及刺激淋巴细胞各1×105/孔)及非特异性丝裂原刺激的淋巴细胞增殖反应体系(于96孔板中加入人外周血淋巴细胞1×105/孔、植物血凝素10μg/ml及白介素-2 500U/ml).在两反应体系中分别加入1×103～3×104个经照射的Stro-1 或Stro-1-MSCs,检测其对淋巴增殖反应的影响.结果 原代贴壁细胞中含中位数为9%(5%～26%)的Stro-1 MSCs,该细胞亚群表达更高的MSCs表型;在MLR和非特异性丝裂原刺激的淋巴增殖体系中,Stro-1 和Stro-1-MSCs均可引起数量依赖性的增殖抑制效应(单向MLR中,当Stro-1-MSCs的数量为1×103时,该抑制效应消失);各个剂量组中,Stro-1 MSCs的抑制效应均显著高于相同剂量的Stro-1-MSCs(P＜0.05).结论 人MSCs中的Stro-1 亚群具有更强的免疫抑制作用,推断该细胞亚群为更原始、均一性更佳的骨髓基质细胞.     

全血培养中PHA对淋巴细胞亚群的刺激作用

目的:探索PHA(植物血凝素)对用血清培养基(RPMI1640)或非血清培养基(Iscove's)全血培养的淋巴细胞亚群的刺激作用。     

血红素加氧酶-1在间充质干细胞免疫抑制效应中的作用

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）中血红素加氧酶-1（HO-1）的表达及其对MSCs免疫抑制效应的影响。方法：从人骨髓中分离培养MSCs,流式细胞术检测其纯度。尼龙棉柱法分离外周血T淋巴细胞,用植物血凝素（PHA）刺激后,将其与MSCs共孵育,再加入HO-1特异性抑制剂Znpp,MTF法测定T细胞的增殖并计算增殖转化抑制率。RT—PCR法检测MSCs中HO-1mRNA的表达。结果：人MSCs中有HO-1mRNA的表达,MSCs可使异体T细胞增殖转化受抑,加入Znpp可使MSC对T淋巴细胞免疫抑制效应减弱。结论：HO-1在MSCs对T淋巴细胞的免疫抑制效应中可能发挥重要的作用。     

低剂量X射线对小鼠树突状细胞与T淋巴细胞之间免疫反应的影响

低剂量辐射(low dose radiation,LDR)兴奋效应机制的研究,涉及了基因调控、信号转导、细胞功能和整体调节等方面,但电离辐射对免疫细胞间反应影响及机制研究的报道不多,特别是在体外采用两种免疫细胞共培养体系,探讨LDR对其细胞间反应的研究尚少见报道.树突状细胞( dendriticcells,DC)作为体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),在启动适应性免疫应答中起着独特的作用.本研究从体外DC与T淋巴细胞共培养体系着手,着重观察低剂量电离辐射对DC与T淋巴细胞表面共刺激分子CD80/CD28及其IL-12、IFN-γ、 TGF-β1细胞因子含量的影响,探讨DC和T淋巴细胞免疫细胞间反应的变化.     

HBsAg致敏的树突状细胞体外抗乙型肝炎病毒的效应

目的 探讨用HBsAg致敏的树突状细胞(DCs)体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗乙型肝炎病毒的免疫效应.方法 从乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导DCs,在DCs成熟前加入纯的HBsAg刺激,将成熟后的DCs与自身T淋巴细胞体外共培养,5天后收集T细胞,分组加入2.2.15细胞培养液中,分别收集第1、3、5和7天的培养上清液,检测其HBeAg和HBsAg的分泌情况以及其与T淋巴细胞共培养产生的IFN-γ和IL-12的含量.结果 经抗原刺激后的DCs刺激自身T淋巴细胞增殖可明显加强其细胞毒作用,同时其产生的IFN-γ和IL-12的浓度明显高于未经抗原刺激的DCs组(P＜0.05)和对照组PBMC(P＜0.01).经抗原激活的T细胞可有效地抑制HBeAg的表达,但未发现对HBsAg有明显的抑制作用.结论 体外经HBsAg刺激后的DCs激活的自身T细胞可明显地增强细胞毒作用并可提高产生IFN-γ和IL-12的含量,从而显著地抑制2.2.15细胞上清中HBeAg的表达,致敏后的DCs疫苗体外可有效地起到抗乙型肝炎病毒的效应.     

X射线诱发外周血淋巴细胞TCR基因突变研究

目的 用培养法研究X射线诱发的人外周血淋巴细胞TCR 基因突变情况。方法 以不同剂量(0~8 Gy) 的X射线照射新鲜分离的健康成人外周血淋巴细胞, 植物血凝素、白细胞介素2(IL-2)协同刺激培养7 d, 流式细胞术检测TCR基因突变频率(TCR MF),并拟合剂量效应关系。结果 随着照射剂量的增加,TCR基因突变频率随之上升, 最佳拟合曲线为二次多项式模型。结论 TCR 基因突变可作为辐射生物剂量计,用于急性辐射照射生物剂量的估算。     

PMA诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达

目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate），100nmol／L）及50％的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞。RT-PCR检测不同时间点mPer1 mRNA的表达水平，比较两者的诱导效率；PMA刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞，RT—PCR检测不同时间点rPer1，rDbp mRNA的表达水平。结果PMA及50％的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似；并首次发现C6细胞的rPer1，rDbp基因存在着近日节律振荡。结论PMA是一种有效的体外节律诱导剂；经PMA诱导后，C6细胞的节律基因存在近日振荡，为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据。     

小鼠骨髓树突状细胞的体外诱导培养及生物学特性分析

目的探讨从小鼠骨髓中体外诱导培养树突状细胞（DC）的可行性并进行生物学特性分析与鉴定。方法用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞,倒置显微镜动态观察形态学变化,扫描电镜观察其表面形态特征,流式细胞术分析细胞表面分子,同时进行抗原吞噬功能和刺激初始型T淋巴细胞增殖能力的检测。结果经体外诱导培养可获得大量未成熟和成熟DC,出现典型树突状形态。未成熟DC的细胞表型为CD11c^high、MHCⅡ^low、CD86^low,具有极强的抗原吞噬能力;未成熟DC经LPS刺激培养后可转变为成熟DC,细胞表型为CD11c^high、MHCⅡ^low、CD86^low,可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖。结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC。     

10-羟基喜树碱对异抗原刺激下大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用

为探讨10-羟基喜树碱（HCPT）对异基因大鼠器官移植物急性排斥反应抑制作用的机制和有效浓度,制作器官移植体外动物模型,以SD大鼠淋巴细胞为刺激物,Wistar大鼠淋巴细胞为反应物行体外混合淋巴细胞培养试验,观察HCPT对淋巴细胞增殖反应的抑制作用,以及不同剂量浓度与抑制效果之间的量-效关系。结果显示,100μg/ml、10μg/ml和2μg/ml浓度的HCPT对SD大鼠淋巴细胞刺激下Wistar大鼠淋巴细胞的增殖均有明显的抑制作用,抑制指数分别为0.734±0.085,0.537±0.361,0.503±0.225;100μg/ml组的抑制效果明显高于10μg/ml和2μg/ml组（P<0.05,P<0.01）。提示HCPT对抗原刺激下大鼠淋巴细胞的分化增殖具有明显的抑制作用,且抑制效果与药物浓度具有显著的相关性。     

人参皂苷Rg1免疫佐剂作用的研究

目的：探讨人参皂苷Rg1的免疫佐剂效应。方法：分别将人参皂苷Rg1以及氢氧化铝胶（Alum）作为佐剂和卵清白蛋白（OVA）抗原混合免疫BALB/c小鼠,二次免疫后2周采血和取脾脏,分离血清,观察免疫前后血清OVA诱导特异性抗体及亚类含量变化,以及淋巴细胞在抗原刺激下的体外细胞增殖反应。结果：Rg1和抗原混合物免疫小鼠后,未见任何不良反应;Rg1组小鼠血清抗体IgG,IgG1和IgG2a水平显著高于抗原对照组（P〈0.05）;人参皂苷Rg1免疫小鼠受刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）和OVA刺激产生的淋巴细胞体外增殖能力显著高于OVA组（P〈0.05）,Rg1组小鼠脾淋巴细胞受OVA刺激后培养上清检测细胞因子IL-5和IFN-γ浓度显著高于OVA组。结论：Rg1是一种能同时激活Th1和Th2型免疫反应的免疫佐剂。     

小鼠巨核系祖细胞的微量培养

本文报道一种用于小鼠巨核系祖细胞的微量甲基纤维素的培养方法。以从再生障碍性贫血病人尿中粗提的红细胞生成素(Epo)制备物作为刺激因子的来源,成功地培养出了巨核细胞集落及单个成熟巨核细胞,巨核细胞可用原位乙酰胆碱脂酶染色的方法鉴别。在培养第7天时,巨核细胞集落及单个巨核细胞的产率与接种的骨髓细胞数呈线性关系。马血清的种类,浓度及2—巯基乙醇和 L—谷氨酰胺的浓度对产率有一定影响。马血清在使用前需要筛选。本方法可用以体外定量测定巨核系祖细胞,也可用以体外观察巨核细胞成熟分化过程。