丙型肝炎病毒抗原的免疫组化检测及方法学探讨

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区、Ｃ区、ＮＳ３区单克隆及多克隆抗体以及丙型肝炎患者血清及血清中ＩｇＧ抗体作为特异性第一抗体，分别应用ＬＳＡＢ、改良ＰＡＰ及直接酶标法对６５例丙型肝炎患者肝组织冰冻及石蜡包埋标本进行ＨＣＶ抗原检测，其中以ＮＳ３区抗体、ＬＳＡＢ法的检测结果较为理想（检出率２７．７％－２９．２％）。ＨＣＶ抗原呈肝细胞胞浆弥漫型、胞核型及胞浆类包涵体型表达。阳性肝细胞多呈单个散在分布。急性丙     

高压锅水浴法修复组织抗原时的几点体会

[目的]探讨高压锅水浴法修复组织抗原的方法。[方法]烤片过夜,脱蜡至水,柠檬酸盐缓冲液高压锅加热1．2～2．0min,冷却,PBS冲洗,余下按免疫组化步骤选择不同的抗体进行染色。[结果]染色定位准确、均匀、清晰。一般不产生非特异性着色。[结论]该方法简单易行,结果可靠,染色效果优于其他抗原修复方法。     

喉癌混合单抗相关抗原的定位研究

目的 研究喉癌混合单抗相关抗原的定位，为喉癌的早期诊断及导向药物治疗奠定理论基础。方法 采用三株喉癌单克隆抗体ＬＣ９，ＬＣ１１，ＬＣ１２混合（ＭＬＣ）对９０例病理证实的喉癌组织切片、１４例喉癌前病变及１０例正常喉粘膜进行了免疫组化（ＡＢＣ法）染色并进行光镜观察，同时采用ＬＳＡＢ法对９例新鲜喉癌组织细胞行免疫过氧化物酶标记电镜包埋前染色，对混合单抗相应抗原进行超微结构的定位观察。结果 混合单抗检测的     

抗C+CE复合抗原抗体鉴定的实验研究

目的 探讨区分Rh系统单一抗体和复合抗原抗体的抗体鉴定试验方法.方法 盐水介质和Liss-Coombs卡做抗体筛选和鉴定,采用37℃热吸收、氯仿放散法确认抗体的特异性,并依据抗体的特异性采用Liss-Coombs卡交叉配血.结果 患者Rh血型为ccDEe,其血浆抗体鉴定为抗C+Rh系统其他抗体,用两组细胞CCDee、ccDEE分别做吸收和放散试验,证实抗体特异性为抗C+抗-CE(Rh22),选择献血者Rh血型为ccDEe的红细胞成分交叉配血相合.结论 采用吸收放散试验可以区分Rh系统单一和复合抗原抗体,依据抗体的特异性选择合适的红细胞成分交叉配血更加快捷和安全.     

超声波对免疫组化抗原修复的作用

免疫组化是用已知抗体或抗原检测组织细胞中相应抗原或抗体的一门技术 ,广泛应用于病理诊断 ,对耳鼻咽喉科鼻咽癌的早期诊断和最后确诊有着重要作用。由于标本常规用福尔马林固定和石蜡包埋过程中造成的抗原封闭与结构改变 ,限制了一些抗体的使用或表达反应微弱。随着新的抗体不断产生 ,对抗原的修复的要求愈来愈高。目前抗原修复的方法很多 ,如高压锅加压煮沸、微波炉辐射、蛋白酶消化等 ,我科自 1998年 9月至 2 0 0 1年 9月使用病理样品快速超声处理仪利用其超声温控功能对组织抗原进行修复 ,并与微波方法对照 ,现将体会总结如下。1　材料…     

高压加热组织抗原修复的免疫组化应用

免疫组化技术对病理诊断的作用越来越为大家共识,但遗憾的是,大多数抗体只适用新鲜细胞或冰冻切片,因为常规的福尔马林固定石蜡包埋组织的许多抗原决定簇被醛基交联封闭,以至于无法和抗体结合。因此,必须进行抗原修复。我们对常用的28种抗体比较了压力锅高温高压和不用任何前处理二种方法进行免疫组化染色比较,现将结果总结如下。     

胰蛋白酶处理石蜡切片免疫酶标组织化学染色

本文用胰蛋白酶处理福尔马林固定的石蜡包埋标本,进行常规石蜡切片的免疫酶标间接法组织化学染色,显示出反应性增生淋巴结中的IgG产生细胞。分析比较了胰酶浓度和处理时间、第一抗体及第二抗体浓度等因素对染色效果的影响,证实胰酶处理有效性的同时也提出作者等的改进方法。     

中药水蛭素对荷瘤鼠Ki-67与VEGF表达的影响

目的分析Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子在荷瘤鼠组织中的表达,探讨其与肿瘤的内在关系。方法取小鼠48只,随机分成4组,左前腋下接种H22肝癌瘤细胞0.2毫升/只。连续用药水蛭素,第15天处死动物,剥离肿块称重。同时取荷瘤鼠肿块组织固定、包埋、切片、染色、孵育、滴加抗体等,用免疫组化法检测Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的表达。Ki-67阳性表达定位于细胞核,VEGF阳性表达定位于细胞质。结果Ki-67与VEGF模型对照组呈强阳性;水蛭素大剂量组呈弱阳性;水蛭素小剂量组呈阳性。结论水蛭素能抑制荷瘤鼠肝癌实体瘤Ki-67增生抗原与VEGF细胞因子的高表达,具有明显的抗肿瘤作用,这与中药水蛭素活血化瘀及强大的抗凝血功效有密切关系。     

高压蒸锅水浴法行组织抗原修复的改进

目的：探讨高压蒸锅水浴法行组织抗原修复的改进。方法：常觇切片,脱蜡至水,柠檬酸盐缓冲液高压锅加阀加热喷气后2分钟,立即流水冷却,开盖再加热10分钟,取出后PBS冲洗,余下按免疫组化步骤选择不同的抗体进行染色。结果：与以往的高压蒸锅法相比染色定位的准确度、均匀度、清晰度有所增强,一般不产牛非特异性着色,明最节省了实验时间和避免外界环境温度对染色结果的影响。结论：较以往的高雎蒸锅抗原修复方法相比,该方法更简单易行,染色效果稳定,并明显节省时间和避免外界环境温度影响的优点。     

病理切片组织抗原修复免疫组化研究

随着科技的发展,免疫组化技术对病理诊断的作用越来越为大家共识,单克隆和多克隆抗体的问世,无疑对诊断病理工作者是一个极大的鼓舞.但遗憾的是大多数抗体只适用于新鲜组织或冰冻切片,而不能用于常规的10%中性福尔马林固定、石蜡包埋组织.因为福尔马林固定后许多抗原决定簇被封闭,以至无法与抗体结合.     

自身抗体及其抗原在细胞结构中的定位方法

自身抗体及其抗原在细胞结构中的定位方法汕头大学医学院生物化学教研室李伟明，钟叔平，黄立群，温博贵汕头市皮肤病防治院丁让览，陈伊宁系统性红斑狼疮、风湿病、硬皮病等自身免疫病，患者血清中存在着多种自身抗体。目前临床上应用酶标、免疫荧光、对流免疫电泳、放免...     

加热抗原修复对乳腺癌组织中内源性抗生物素蛋白结合物的影响及其对策

目的:探讨加热抗原修复对甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织中内源性抗生物素蛋白结合物(EABA)的影响,以及消除EABA对免疫组织化学染色干扰的对策。方法:采用微波加热抗原修复法,免疫组织化学SP染色法,蛋清液封闭法,抗生物素蛋白-生物素封闭法及Envision二步法对10例甲醛固定石蜡包埋乳腺癌标本内的EABA进行检测。结果:1经甲醛固定石蜡包埋的乳腺癌组织中的EABA被封闭;2加热抗原修复可造成EABA暴露,且EABA仅存在于细胞质中;3蛋清液封闭法及抗生物素蛋白-生物素封闭法可封闭暴露的EABA。采用非生物素检测系统也可消除EABA对正常免疫组化染色的干扰。结论:微波加热抗原修复可使甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织中的EABA重新暴露。因而对生物素-抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶检测系统的免疫组织化学染色造成干扰;暴露的EABA可通过蛋清液封闭法、抗生物素蛋白—生物素封闭法封闭,或采用非生物素检测系统,达到避免EABA对正常免疫组化染色干扰的目的。     

疫组织化学RaMOS法在病理诊断中的应用

RaMOS(Rapid microwave one step method)快速微波一步法,是继微波EnVision法、LDP法等二步法之后免疫组织化学染色方法的又一次改进。我们选用了15种RaMOS法抗体,对口腔良、恶性肿瘤进行了相应的免疫组化标记,并与标准Sp法、EnVision法相对照,结果显示RaMOS法是一种快速且染色效果良好的方法。1 材料和方法1.1 材料 活检组织用4％甲醛常规固定、脱水、石蜡包埋、切片。RaMOS法试剂(即用型)和可设定实际辐射时间的ZD—Ⅱ微波仪,均由上海中达医学应用研究所提供。1.2 方法 ①组织切片(4μm)常规脱蜡至水。②微波抗原修复,切片入PBS液(pH7.4)内(250mL),温度控制在80℃～100℃之间(根据抗原类型掌握具体温度),保持10min。③冷却     

抗原修复间接法不同修复时间的效果比较

目的 探讨抗原修复间接法在不同修复时间内的修复效果.方法 采用不同修复时间的间接法对同一组织进行抗原修复,检测15种常用抗体的染色效果并和直接法比较.结果 抗原修复间接法在不同修复时间修复效果存在差异.结论 选择合适的修复时间对抗原进行间接法修复能达到理想效果,可在临床和科研中应用.     

抗-Mur抗体引起的疑难配血及其临床意义分析

目的 掌握Mur抗原的血型血清学特性,更好地指导临床输血,保证输血安全.方法 对患者血清用室温盐水法、4℃盐水法、木瓜酶法、抗人-IgG、戴安娜卡式配血系统几种方法进行比较.结果 室温盐水法与4℃盐水相同,效价是1∶2,抗人-IgG法与戴安娜卡式配血系统相同,效价1∶4,木瓜酶法不出现凝集.结论 抗Mur抗体与Mur抗原在木瓜酶法中不能显示凝集反应,说明Mur抗原同MN系统的MN抗原一样能被木瓜酶破坏,使抗原抗体不能发生反应,其特性完全一致.提示我们在怀疑存在抗Mur抗体时,一定要选择两种以上的方法配血,切记不能单用木瓜酶法配血,防止假阴性漏检,导致输血发生溶血反应,给患者造成伤害.     

免疫组化联合抗体在胸腹水沉渣石蜡包埋病理诊断中的应用

目的探讨胸腹水细胞沉渣石蜡包埋、免疲组织化学染色技术在病理诊断中的应用价值。方法对60例胸腹水液基细胞检查恶性及可疑恶性标本沉渣石蜡包埋、切片,进行免疫组化染色,应用CEA、CKlow、CK-H、Calretin、TTF-1、D2-40、K-67、Tg等多种抗体联合检测。结果胸腹水液基薄层制片阳性率高,通过细胞沉渣石蜡包埋技术,能收集到较多的细胞成分,有时能观察到组织结构,联合免疫组化染色技术,使背景清晰,阳性颗粒定位准确,检出率高,可确定肿瘤组织来源。结论该法的应用能够提高胸腹水的阳性检出率,提高疑难病例诊断的准确率。有很高的临床应用价值,方法简单,值得在基层医院推广。‘     

中药活性小分子人工抗原合成的技术要点

中药免疫分析技术适用于中药复杂组分的研究,基于此技术的研究思路与方法越来越引起研究者的重视。免疫分析的前提是抗体制备,中药活性小分子人工抗原的合成是中药活性成分抗体制备的关键步骤。从载体的选择、交联方法的选择、纯化及鉴定方法、合成条件的优化及影响免疫原性的因素等方面,对中药活性小分子人工抗原合成的技术要点进行综述,从而为中药免疫分析技术的建立和发展奠定基础。     

一种塑料包埋制备骨磨片的新方法

塑料包埋组织学技术,在国内外得到越来越广泛地应用。我们在Bancroft工作的基础上,利用甲基丙烯酸甲酯(MMA)对骨穿透力甚强,并能牢固支持组织以承受磨片,适用于较大骨组织包埋的优点,总结出     

子宫内膜异位症不孕患者血清、腹腔液IL—6、CA125及EMAb的检测

通过放射免疫法及双抗体心ELISA法检测血清白细胞介素－6（IL－6）、CA125和抗子宫内膜抗体（EMAb)的水平,了解EM不孕的免疫机制中细胞因子及相关膜抗原抗体的变化。提示IL－6、CA125和EMAb是致不孕的得要免疫学因素。     

免疫细胞化学染色技术在胸水、腹水诊断中的应用

目的:通过借助于抗原抗体的特异性结合,达到识别组织和细胞中某些化学成分的目的,并明确其在细胞内的定位。方法:统计2011年全年间门诊、病房已出现胸水、腹水症状的患者经过脱落细胞学免疫化学染色技术方法处理标本。结果:采用半定量法以确定免疫反应的强度,阳性细胞数目及确定抗原存在的部位。结论:免疫细胞化学已经成为细胞学诊断最常使用的特殊诊断手段。