三种羧甲基壳聚糖的初级生物学评价

本文旨在对三种不同取代位置的羧甲基壳聚糖（N-羧甲基壳聚糖（CMC）,N,O-羧甲基壳聚糖,O-羧甲基壳聚糖）进行初级生物学评价。本文利用化学改性的方法制备的三种羧甲基壳聚糖,其生物学评价试验包括细胞毒性试验和溶血试验。细胞毒性试验：采用浸提液试验中的细胞增殖度法提取材料浸提液培养L929细胞,观察其对细胞生长、增殖的影响,测定加样后2、4、7d的OD值,计算RGR,评定细胞毒性等级;溶血试验：采用溶血率法评价材料的溶血性能,取新鲜兔血与材料直接接触,测定溶血率。毒性试验结果发现：经纯化的壳聚糖和三种CMC的细胞毒性均为0级或1级,符合医疗用途的技术要求。材料浸提液浓度越大,细胞毒性越大,壳聚糖的三种羧甲基化产物中,N-CMC和N,O-CMC的细胞毒性比壳聚糖小,O-CMC的细胞毒性最大。溶血试验结果发现：壳聚糖和三种CMC的溶血率均小于5%,符合医疗用途的技术要求。N-CMC的溶血率最小,O-CMC的最大,这结果与细胞毒性试验一致。经体外细胞毒性试验和溶血试验可知：经初步检验,可认为壳聚糖的羧甲基化衍生物具有良好的生物相容性,为以后更深一步的研究提供了科研基础和实验依据。     

羧甲基壳聚糖的合成研究

目的：制备水溶性的羧甲基壳聚糖,方法：壳聚糖溶于氯乙酸溶液中,在一定的反应温度和反应时间下,滴加入氢氧化钠溶液,羧甲反应之后,蒸去过量的水,乙醇沉淀,抽滤分出羧甲基壳聚糖。结果：在近水沸点下,壳聚糖多聚单元与氯乙酸的摩尔比为1：3,NaOH加入量与氯乙酸等摩尔,羧化后可获得水溶性的羧甲基壳聚糖,收率达到87％以上,结论：本工艺方法可以在水溶液中制备出水溶性羧甲基壳聚糖,方法简便易行。     

水溶性O-羧甲基壳聚糖的制备

目的 :合成一种完全水溶的壳聚糖衍生物— O-羧甲基壳聚糖。方法 :在碱性条件下 ,用氯乙酸修饰粉末状的壳聚糖 ,得到产物。结果 :产物经元素分析、FT-IR分析 ,证实其结构与预期相吻合。结论 :该法所得 O-羧甲基壳聚糖具有优越的水溶性能     

微波辐射制备羧甲基壳聚糖研究初探

在微波辐射下用氯乙酸对壳聚糖进行化学改性，探讨微波条件下，反应物投料比、反应时间、反应温度等对羧甲基壳聚糖产率和粘度的影响。应用红外光谱分析确认在壳聚糖上引入了羧甲基基团。当氨基葡萄糖单元与氯乙酸的摩尔比为l：4，反应时间为20min，反应温度为65℃时，所得的羧甲基壳聚糖产率和粘度较高。     

羧甲基壳聚糖的制备及抑菌作用的研究

目的：研究羧甲基壳聚糖的合成反应及其抑菌活性.方法：用化学方法修饰壳聚糖,用稀释法对常见病原菌进行抑菌实验.结果：产物经红外光谱证实,壳聚糖已被氯乙酸所修饰,产物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌均有抑菌作用.结论：本法制得的羧甲基壳聚糖具有优越的水溶性能,对常见致病菌有一定的抑菌活性.     

羧甲基壳聚糖的遗传毒性评价

目的:通过小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验、小鼠精子畸形试验及小鼠初级精母细胞染色体畸变试验,对治疗骨关节炎的新药羧甲基壳聚糖(CMCTS)进行初步药物遗传毒性的安全性评价,为二期临床试验提供依据。方法:按照国家颁发的毒性试验标准进行小鼠骨髓细胞染色体畸变分析试验、小鼠精子畸形试验及小鼠初级精母细胞染色体畸变试验。结果:各试验中阳性对照组腹腔注射环磷酰胺(CP)可诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变率明显增加,与各实验组及阴性对照比较差别具有显著性(P<0.01),各实验组与阴性对照组之间相比较差别无显著性(P>0.05)。结论:在高剂量腹腔注射羧甲基壳聚糖的情况下,不引起小鼠死亡,对小鼠体细胞与生殖细胞染色体未见明显致突作用。     

壳聚糖-羧甲基纤维素膜的制备及预防肠粘连的实验研究

目的:制备壳聚糖-羧甲基纤维素膜并探讨其预防肠粘连的效果.方法:将壳聚糖和羧甲基纤维素按1:1质量比混合,加入戊二醛、硫酸铝铵双交联,甘油增塑后烘干成膜;测定膜的拉伸强度及断裂伸长率并行电镜扫描.48只SD大鼠随机分成为3组(n=16),2组擦伤其回肠浆膜,制成肠粘连模型,于损伤部位分别包裹壳聚糖-羧甲基纤维素膜、壳聚糖膜;另一组不作处理作为对照组.术后第14天观察各组肠粘连情况.结果:膜拉伸强度约为20 MPa,断裂伸长率约为65%;扫描电镜(SEM)显示膜表面结构呈相互交错的纤维状,表面有不规则的孔状结构.壳聚糖-羧甲基纤维素膜组和壳聚糖膜组的粘连程度显著低于对照组(P＜0.01).光镜下见壳聚糖-羧甲基纤维素膜、壳聚糖膜组炎症反应轻微,纤维增生不显著;对照组粘连处纤维组织增生活跃,局部炎症反应明显.透射电镜下见壳聚糖-羧甲基纤维素膜组上皮细胞修复较壳聚糖膜组好,成纤维细胞增生不明显,对照组上皮细胞增生较慢,成纤维细胞分泌胶原功能活跃.结论:壳聚糖-羧甲基纤维素膜适于术中缝合需要,预防肠粘连效果显著,性能优于壳聚糖膜.     

N-羧甲基壳聚糖微泡超声造影剂的制备与性能评价

目的制备N-羧甲基壳聚糖微泡超声造影剂,观察其基本特征及对动物肝脏超声显影效果。方法采用(油/水)/油复合乳液-溶剂蒸发法制备微泡超声造影剂,通过光学显微镜和扫描电镜观察微泡的大小、形态及粒径分布,通过股动脉注射0·5ml该超声造影剂到动物体内,观察动物肝脏超声显影效果。结果N-羧甲基壳聚糖微泡为空心球形结构,分散均匀,形状规则,粒径在2~3μm,壁厚为250~300nm。该造影剂对动物肝脏超声显影效果明显增强。结论N-羧甲基壳聚糖微泡可作为一种性能较好的超声造影剂。     

羧甲基壳聚糖预防大鼠术后腹膜粘连的研究

 【目的】 比较4种氮氧不同取代度羧甲基壳聚糖(CMC)预防腹膜粘连的效果?【方法】 制作简单?可重复?有效?经济的大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型,药效印证分8组,包括N-O-CMC-5#?N-CMC?N-O-CMC-2#?O-CMC?透明质酸?医用几丁糖?生理盐水?空白组,.每组至少10只,比较大鼠术后腹膜粘连情况?设立CMC中粘连评分最低者?医用几丁糖?盐水对照?空白对照4组,每组10只,进行腹膜粘连组织的羟脯氨酸测定;同法设4组,每组18只,进行腹膜粘连组织的组织学研究,包括HE染色?Masson染色?电镜?免疫组化TGF-β1测定? 【结果】 N-O-CMC-5#组毒性大?N-CMC?透明质酸?N-O-CMC-2#?O-CMC?几丁糖粘连评分与空白组及生理盐水组比较差异有意义(P < 0.05)?O-CMC粘连评分最低,O-CMC?几丁糖组 ?盐水组?空白对照组羟脯氨酸均值(μg/mg)分别为0.41 ± 0.09?0.42 ± 0.09?0.71 ± 0.07?0.89 ± 0.10(P < 0.05)?组织学观察O-CMC组损伤粘连处空白组较炎症细胞浸润少?成纤维细胞增殖少,胶原形成少?空白组透射电镜示空白组大鼠炎症细胞增多,肥大细胞 成纤维细胞跃,细胞器发达,胶原集结成束?TGF-β1免疫组化染色示术后3 d O-CMC?几丁糖组表达减弱?空白组术后3 d? 7 d? 14 d石蜡切片TGF-β1免疫组化染色PU比较, 结果为差异有统计学意义(P < 0.05),3 d组分别与7 d组?14 d组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05);术后3 d不同的处理组石蜡切片TGF-β1免疫组化染色PU比较,结果为差异有统计学意义(P < 0.05)?【结论】 O-CMC? N-O-CMC-2#?N-CMC?医用透明质酸钠?几丁糖均有减少大鼠剖腹术后腹膜粘连发生的程度和范围的作用?其中O-CMC粘连评分中位数最低,有望成为新一代防粘连材料?     

壳聚糖的酶法降解

用壳聚糖酶降解壳聚糖,探讨了壳聚糖降解过程中温度、pH值、底物浓度和金属离子对酶促反应的影响。结果表明:酶促反应进行到5 h左右时,即可得到聚合度小于10的壳寡糖。该酶促反应的最适温度为50℃,最适pH=5.5;最适底物浓度为0.02 g/mL;金属离子Ca2+和Mg2+对酶降解有一定的促进作用,而Zn2+、Cu2+对酶降解有较强的抑制作用。该酶促反应符合米氏动力学方程,米氏常数Km=7.80 g/L,最大反应速率Vmax=7.72 g/(min.L)。     

壳聚糖及其衍生物抗菌性能的研究进展

就近年来对壳聚糖及其衍生物抑菌性能的研究进展予以综述,主要针对影响壳聚糖抑菌效果的影响因素(分子量、脱乙酰度、浓度、pH值以及菌株种类)以及抑菌机理进行分析。另外还对壳聚糖的衍生物的抑菌性能的研究进展进行综述。     

壳聚糖/羧甲基壳聚糖金属配合物对氧自由基的清除作用研究

以NADH-PMS-NBT体系产生超氧阴离子自由基(o2-·)和EDTANa2·Fe(Ⅱ)-H2O2体系产生 羟自由基(·OH)来研究壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合物、羧甲基壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合物时氧自由基的 清除作用。结果显示配合物对O2-·和·OH均具有明显的清除作用,其中铜(Ⅱ)配合物对O2-·的清除活 性最高,而锌(Ⅱ)配合物比铜(Ⅱ)配合物具有更强的清除·OH的能力,羧甲基壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合 物与含有相同金属离子的壳聚糖配合物相比对O2-·和·OH具有更高的抑制活性。     

壳聚糖改性及用其整理纺织品抗菌性能的研究

用羟甲基化和醚化等方法制备了改性壳聚糖羟甲基壳聚糖和羟乙基乙基醚壳聚糖。在中性条件下它们溶解于水。实验显示，改性壳聚糖具有较好的抑菌作用和吸湿保湿性能。对织物进行的后整理实验发现，羟乙基乙基醚壳聚糖适用于对棉布的整理加工，羟甲基壳聚糖适用于对真丝绸的整理加工。经整理后的织物具有较好的抗菌性，且吸湿、透湿、染色性能较优。研究表明改性壳聚糖可作为优良的功能性天然“绿色”纺织品整理剂。     

羧甲基壳聚糖修饰阿霉素纳米脂质体的制备及体外细胞实验

以羧甲基壳聚糖（CMCT）为修饰剂,采用薄膜pH梯度法制备具有pH敏感性的阿霉素纳米脂质体（CMCTDOXNL）,以增加抗癌药物在肿瘤部位的蓄积,同时增强抗癌药物向肿瘤细胞内的传递。结果表明：制备的CMCTDOXNL粒子形貌圆整,粒径分布均匀为 （38±221）nm,药物包封率为8883%;相比传统的阿霉素纳米脂质体（DOXNL）, CMCTDOXNL与Hela细胞的结合和摄取均有所提高,对细胞的杀伤作用更强; CMCTDOXNL的体外药物释放具有明显的pH敏感性,比普通的阿霉素脂质体更能促进阿霉素（DOX）向肿瘤细胞内的传递。     

用GPC研究壳聚糖氧化降解过程中的分子量及其分布

用凝胶渗透色谱法跟踪研究了过氧化氢对壳聚糖氧化降解过程中壳聚糖的分子量及其分布的影响,结果表明,反应温度、时间和过氧化氢用量对壳聚糖的降解程度及降解产品质量均有影响。     

不同取代羧甲基壳聚糖的制备及其结构测定

目的　制备不同取代的羧甲基壳聚糖并测定其结构。方法　通过不同反应条件得到不同位置取代和取代度的羧甲基壳聚糖 ,并用物理和化学方法进行分子结构表征。结果　在 O位和 (或 ) N位发生了羧甲基化反应 ,产物为不同取代度的 N,O-羧甲基壳聚糖 (N,O- CMC) ,N-羧甲基壳聚糖 (N- CMC)和 O-羧甲基壳聚糖 (O- CMC)。结论　胶体滴定法是测定羧甲基壳聚糖取代度的优选方法 ;壳聚糖羧甲基化后水溶性极大地改善 ,应用前景广泛