用菌体抗原筛选霍乱弧菌单克隆抗体的ELISA

<正> 众所周知,ELISA常用作筛选和鉴定可溶性抗原单克隆抗体(McAb)的常规方法。但对颗粒性抗原的淋巴细胞杂交瘤产生的McAb,则缺少准确、敏感、微量、快速的筛选和鉴定的检测系统。Stocken(1979)Nachamkin(1981)曾将细菌等细胞性抗原贴附于微孔塑料板上进行固相免疫测定。我们在     

用单克隆抗体研究和分析霍乱弧菌抗原

本文用ELISA以12株单克隆抗体(McAb)对55株EL-Tor霍乱弧菌和用遗传学方法突变的28株霍乱弧菌的菌体抗原进行了研究1同时与四种常规分型方法进行对比试验。结果用12株McAb可将55株EL-Tor霍乱弧菌分成11种抗原决定簇和18个McAb型,将遗传学方法的突变株分成9种抗原决定簇和10个McbA型。其中一株McAd 2B_1H_1F_3能识别所有55株EL-Tor弧菌和大部份突变株霍乱弧菌,表明有种的特异性;其余11株McAb与各型霍乱弧菌的抗原     

用单克隆抗体研究和分析霍乱弧菌抗原(摘要)

本文用ELISA以12株单克隆抗体(McAb)对55株EI Tor霍乱弧菌和用遗传学方法突变的28株霍乱弧菌的菌体抗原进行了研究,同时与四种常规分型方法进行对比试验。结果用12株McAb可将55株EI Tor霍乱弧菌分成11种抗原决定簇和18个McAb型,将遗传学方法的突变株分成9种抗原决定簇和10个McAb型。其中一株McAb 2B_1H_1F_3能识别所有55株 EI     

单克隆抗体对霍乱弧菌抗原性的研究——Ⅰ.12株McAb对50株霍乱弧菌菌体抗原的初步研究

本文是用12株单克隆抗体对50株El Tor生物型霍乱弧菌的菌体抗原的研究结果。采用的方法是ELlSA间接法:于酶联板中加入经鉴定的待检测的菌体抗原50ul/孔(1亿/ml),过夜蒸干包被,洗3次,加入1％BSA100ul/孔,37℃经1小时封闭,洗3次:加入McAb(1:80)50ul/孔,37℃1小时,洗3次,加兔抗鼠酶标抗体50ul/孔,37℃作用2小时,洗3次后,加底物20分钟后,用2M硫酸终止反应,于酶联免疫检测仪中测定OD值,以P/N>     

用结核菌单克隆抗体纯化PPD抗原的初步研究

本文用自备一株人型结核菌单克隆抗体(TB-15C_3)经亲和层析方法提纯人型结核菌H_(37)RvPPD。纯化抗原(定名C_3Ag)于SDS-PAGE电泳分析有二条带,分子量为66,000及56,000。Westen免疫印迹显示该二个位点的蛋白与TB-15C_3抗体反应。酶标TB-15C_3 ELISA检出C_3Ag的最小量10μgml。C_3Ag ELISA检测血清抗体最适浓度1～10μg/ml,C_3Ag的特异性是与     

供应霍乱弧菌单克隆抗体

<正> 由上海第二军医大学微生物教研室研制的霍乱弧菌单克隆抗体(稻叶型和小川型)已经专家鉴定。认为可用于霍乱弧菌的实验诊断和科学研究(包括对霍乱弧菌抗原的分析研究等)。本单克隆抗体比多克隆抗体特异和敏感,效果佳,需要者可与该室吴挹芳同志联系。     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅱ.酶标霍乱弧菌单克隆抗体快速检测霍乱弧菌的实验研究

本文就所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中有种特异性的三株(2B_1H_1C_6,2B_1H_1F_6及2B_1H_1F_3)单克隆抗体及抗霍乱弧菌多克隆抗体,作酶标抗体直接法和间接法,对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,探究在临床诊断应用中的价值。结果表明,酶标McAb较酶标多克隆抗体敏感,前者在10~4/ml菌时可以检出,后者要在10~4～10~6/ml菌时才能检出;同时表明酶标间接法比直法敏感,特异性实验结果显示酶标单克隆抗体对10株霍乱弧菌有很高的     

单克隆抗体诱发肿瘤抗原调变的初步研究

给同基因小鼠皮下接种TD。小鼠宫颈癌(U_(14))细胞;然后,给实验组动物腹腔注入不同剂量的抗U_(14)单克隆抗体(AU_(14-1))。结果发现,肿瘤细胞接种后的267天中,对照组动物全部未发生肿瘤,都存活;而在大剂量AU_(14-1)处理的实验组动物中,86—88%在接种部位发生了实体瘤,且死于全身性肿瘤疾患。表明AU_(14-1)对于U_(14)细胞的免疫促进作用。应用AU_(14-1)研究U_(14)细胞在体外对特异抗体的反应,结果证实,AU_(14-1)诱发U_(14)细胞抗原调变。间接膜免疫荧光表明,AU_(14-1)抗体和U_(14)抗原从这些细胞表面消失。本研究结果提示抗原词变可能是宫颈癌细胞逃逸单克隆抗体治疗的重要机制。     

用狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体分析其抗原决定簇

本文通过聚丙烯酰胺凝胶电泳方法精制糖蛋白,用蛋白酶V_8消化的糖蛋白碎片经25%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,转移到硝酸纤维素薄膜上,用糖蛋白单抗进行免疫染色。通过WesternBlot分析技术,得到一个与单抗起阳性反应的多肽碎片(G—V—6),并分析该碎片的氮基酸序列。资料表明,糖蛋白的这个抗原决定簇位于残基130—141位置。结果提示,Western Blot分析技术在合成疫苗的发展中将是一个有用的工具     

用单克隆抗体分析日本脑炎病毒的抗原结构

采用对日本脑炎(JE)病毒中山-RFVL株有血凝抑制反应的26株单克隆抗体,分析了JE病毒的抗原结构。 这些抗体均能与JE病毒的E糖蛋白(V_3)反应。采用ELISA竞争法分析了其中21株IgG类抗体所识别的抗原决定簇的位置关系。分析结果表明,JE病毒至少有5个不同的抗原决定簇部位。此外,推测JE病毒种特异性部位与黄病毒属特异性部位是各自独立存在的。 上述抗体对中山-RFVL株的ELISA效价、HI效价及中和抗体效价之间没有明显的关系。     

霍乱弧菌单克隆抗体的诊断应用

本文将获得的12株抗霍乱弧菌单克隆抗体及霍乱弧菌多克隆抗体,对各型霍乱弧菌及其他各种肠道等菌进行敏感性和特异性凝集试验并以荧光素异硫氰酸荧光黄和吖啶橙、葡萄球菌A蛋白及过氧化物酶标记这些抗体制成标记试剂后对这些细菌和霍乱弧菌粪便模拟实验标本进行检测,探索其用于快速诊断的价值。实验结果证明抗霍乱弧菌单克隆抗体比抗霍乱弧菌多克隆抗体特异和敏感,制成单克隆抗体标记试剂用于快速诊断效果同样佳。文中对各种标记的单克隆和多克隆试剂的特异性、敏感性及用于临床检验的适用性进行了讨论。     

用单克隆抗体对ITP自身抗血小板抗体及其相关抗原的初步研究

本文应用三种抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体,按ELISA 间接法、ELISA双抗体夹心法、ELISA竞争法,对ITP患者自身抗血小板抗体及其相关抗原进行了初步研究。实验结果表明,抗血小板抗体的相关抗原呈多态性,包括:GPⅠb、GPⅡb及/或 GPⅢa,以 GPⅡb及/或 GPⅢa占多数,还可能包括血小板膜蛋白以外的其它抗原成分。这提示,ITP可能是一组复杂的、不均一的自身免疫性疾病。     

霍乱弧菌菌体蛋白双向电泳技术的建立

目的建立霍乱弧菌全菌体蛋白的双向电泳技术，获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱。方法利用适当的裂解液处理霍乱弧菌，提取全菌蛋白；采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳；考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Elite5．0图象分析软件进行分析，所得的数据用SPSS15．0进行统计分析。结果得到了（1081±16）个蛋白斑点，蛋白主要集中在pI4．24～7．20之间，重复胶的匹配点数为（1057±28），匹配率为97．85％。结论建立了霍乱弧菌全菌双向电泳分析方法，2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性非常高，获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱，为进一步研究其蛋白质组学奠定了基础。     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅲ.单克隆抗体免疫荧光快速检测霍乱弧菌的实验研究

为了进一步研究所获得的霍乱弧菌单克隆抗体在诊断应用中的价值,将其中一株2B_1H_1C_6用FITC标记,进行免疫荧光直接法和间接法快速检测霍乱弧菌模拟标本,同时以标记多克隆抗体相比较。结果表明,单克隆抗体的间接荧光比多克隆抗体的间接荧光特异,前者仅对伤寒疾杆菌和痢疾杆菌有很微弱的非特异荧光(±),而后者对多数肠道菌有±～++的非特异荧光,在1000～10,000菌/ml时,两种抗体的免疫荧光均可检出,18份粪便模拟粪便的     

抗霍乱弧菌O139群单克隆抗体的制备及初步鉴定

制备抗霍乱弧菌(V. cholerae)O139群特异性单克隆抗体(MAbs),进而制备检测霍乱弧菌O139群的胶体金免疫层析试纸条.福尔马林灭活的霍乱弧菌O139群免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立分泌抗霍乱弧菌O139群MAbs的杂交瘤细胞株.对配对较好的4株MAbs用ELISA法测定MAbs免疫球蛋白类及亚类,用ELISA法和凝集法鉴定MAbs的特异性.结果表明4株MAbs免疫球蛋白均为小鼠IgM;这些MAbs均与霍乱弧菌O139群菌株发生凝集反应,与霍乱弧菌O1群、大肠杆菌、出血性大肠杆菌O157∶H7、副溶血弧菌、麦氏弧菌、河弧菌、结肠炎耶尔森氏菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及甲型、乙型、丙型副伤寒杆菌不发生凝集反应.4株MAbs具有较高的特异性,有可能用于制备检测霍乱弧菌O139群的检测试剂.     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究—Ⅰ.霍乱弧菌单克隆抗体的敏感性和特异性检测结果

将所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体(McAb),用不同年代的霍乱弧菌(两种生物型)及常见的肠道菌(含不凝集弧菌),以试管凝集试验法测定它们的敏感性和特异性,并以霍乱弧菌多克隆抗体比较。结果表明,12株霍乱弧菌单克隆抗体,对各型霍乱弧菌(9株)均有不同程度的抗体效价(1:40～1280),其中四株单克隆抗体对各型霍乱弧菌的凝集效价比多克隆抗体的凝集效价高,所以较敏感;所有12株单克隆抗体,对不凝集弧菌等9种、株肠道菌的凝集效价,均<1:140,而多克隆抗体对这些肠道菌有不同程度交叉凝集(1:40～220)的却有2/4,证明这些单克隆抗体的特异性比多克隆抗体高,适合于诊断应用。     

用单克隆抗体作Q热立克次体保护性抗原的分析

从研制成功的Ⅰ相及Ⅱ相Q热立克次体单克隆抗体(McAbⅠ及McAbⅡ)中,选择1-4B_5(Ⅰ相)及2-2E_5(Ⅱ相)单抗作中和试验和被动保护试验证明,McAbⅠ具有明显的抗Q热立克次体感染的作用。1-4B_5与10~3MID_(50)纯化活立克次体在体外作用后,接种BALB/c小鼠能完全保护小鼠不发生感染。在小鼠腹腔接种10~3MID_(50)Q热立克次体前一小时及以后隔日