食管鳞状细胞癌P53蛋白表达和基因突变与预后的关系

目的 检测食管鳞癌P53蛋白表达和基因突变状况与临床病理及预后的关系。方法 采用免疫组织化学(LSAB法)检测222例食管鳞癌P53蛋白表达；用聚合酶链反应-单链构象多态分析(PCR-SSCP)检测55例食管鳞癌P53基因突变，并进行生存分析。结果 食管鳞癌P53蛋白表达阳性率为51．80％，与组织学分级(P=0．001)、TNM分期(P=0．005)、肿瘤浸润深度(P=0．000)、淋巴结转移(P=0．035)有关；P53蛋白阳性表达患者预后差于不表达者(P=0．0190)，特别是TNMⅡ期患者(P=0．0084)。食管鳞癌P53基因大多数变异位于外显子5—8，其中变异热点在密码子24l和282位，P53基因第5，6，7，8，10外显子突变率分别为14．5％、1．8％、5．5％、18．2％、1．8％，总突变率为41．80％。P53基因突变阳性组与阴性组间患者生存时间有显著性差异(P=0．0417)。P53蛋白表达与P53基因突变符合率为82．14％。结论 P53蛋白的过量表达及基因突变，可以作为判断食管鳞癌生物学行为和预后的指标。     

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制.方法采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂作用72h后,免疫细胞化学表明Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP53、Bcl-2、Myc蛋白表达有关,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

8-Br-cAMP对人肺腺癌细胞P53蛋白表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨8－Br-cAMP对人肺腺癌细胞株A549细胞端粒酶活性和P53蛋白表达的影响。方法：用终浓度分别为20μmol/L及60μmol/L的8－Br-cAMP 处理人肺腺癌细胞株A549细胞，以未处理者为对空白对照。采用PCR－ELISA法检测端粒酶活性，用免疫荧光标记法测定P53蛋白的表达。结果：8－Br-cAMP作用后的A549细胞，端粒酶活性明显降低，P53蛋白表达明显减少。结论：8－Br-cAMP能抑制肺腺癌细胞的端粒酶活性和P53蛋白的表达。     

食管癌患者P53表达的临床意义

目的分析食管癌患者P53表达的临床意义。方法应用酶联免疫吸附法（EuSA）对67例食管癌患者治疗前的血清P53抗体进行检测,对照组为17例健康人;用免疫组化法检测患者肿瘤组织标本的P53蛋白表达情况。结果67例患者有32例血清P53抗体呈阳性,阳性率为47．8％;17例正常健康人血清P53抗体均为阴性,两者比较有统计学意义（P〈0．05）;血清P53抗体阳性率与食管癌TNM分期、细胞分化程度的差异有统计学意义（P〈0．055）。67例患者的肿瘤组织标本中,45例P53蛋白呈阳性,其阳性率为67．2％;22例表达P53蛋白阴性,两者比较有统计学意义（P〈0．05）,P53蛋白的表达与患者的肿瘤分期呈显著相关（P〈0．05）。结论血清P53抗体检测可以作为食管癌辅助诊断的指标．肿瘤组织P53蛋白的表达与食管癌发生有关。     

P^53蛋白在喉癌中表达与细胞增殖状态及预后的关系

目的：探讨喉癌P53蛋白的表达与细胞增殖活性，淋巴结转移及预后的关系。方法：采用免疫组化LSAB法检测了46例喉癌P53蛋白，增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果：46例喉癌标本中28例（60.9％）P53蛋白表达阳性。P53蛋白阳性的喉癌中其细胞增殖活性及淋巴结转移率均较阴性者高（P＜0.05）;而5年生存率较阴性者低（P＜0.05）。结论：P53基因突变以及由此导致的细胞异常增殖不仅与喉癌的发生有关，而且在其淋巴道扩散中也起重要作用。     

同化疗药物刺激对HEPG2增殖蛋白表达的影响

目的探讨3种常用化疗药物连续刺激对人肝癌细胞株HEPG2增殖蛋白表达的影响。方法HEPG2细胞株经阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）、联合化疗刺激。应用流式细胞术分别检测增殖相关蛋白erbB-2和c-myc的阳性细胞数及平均荧光强度，以此推算出不同药物连续作用细胞株后以上增殖蛋白总表达量。结果HEPG2细胞株正常培养过程中，各蛋白表达本身存在极大不确定性；各化疗药物组以及联合化疗药物纽连续刺激细胞株6个周期，erbB-2和c-myc蛋白表达总量变化无明显规律。将各组不同周期表达的增殖蛋白总量进行相关性分析，未发现组间相关有统计学意义（P〉0.05）。结论不同药物作用下肝癌细胞增殖蛋白表达完全不同，提示临床进行个体化精确化疗的必要性。     

宫颈癌组织中HPV和p53基因表达的检测

①目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）感染和p53基因异常在宫颈癌发生发展中的作用。②方法 用PCR技术检测12例宫颈原位癌、45例宫颈癌和20例正常宫颈组织中HPVl6／18DNA，RT-PCR检测HPV16／18阳性标本E6基因mRNA表达，聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测p53基因外显子5～8的突变，同时采用免疫组化技术检测P53蛋白的表达。③结果 宫颈原位癌、宫颈癌HPV16／18阳性率均为66．67％，明显高于正常宫颈组织（20．00％），差异有显著性（χ^2=5．12、12．09，P〈0．05、0．01）。宫颈癌组织中HPV16／18 E6基因mRNA阳性表达率明显高于正常宫颈组织，差异有显著性（P=0．039）。宫颈原位癌和正常宫颈组织间、宫颈原位癌和宫颈癌间HPV16／18 E6 mRNA阳性表达率差异均无显著性（P=0．141、0．272）。45例宫颈癌标本中测得exon5和exon7突变各1例，均发生在HPV阴性宫颈癌组织，未检测到exon6和exon8的突变。宫颈原位癌和正常宫颈组织中均未检测到p53基因突变。正常宫颈组织中未检测到P53蛋白表达，宫颈原位癌和宫颈癌组织中P53蛋白阳性表达率分别为25．00％和42．22％，明显高于正常宫颈组织（χ^2=10．81，P（0．01）。P53蛋白的表达与HPV16／18感染无明显相关性（P〉O．05）。④结论 HPV感染和p53基因异常与官颈癌的发生密切相关，官颈癌组织中p53基因的突变率较低，推测P53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致。     

大肠癌p53基因突变抗体的相关性研究及其临床意义

目的　研究大肠癌患者血清 p53 Ab与 p53基因突变及蛋白表达之间关系 ,以探讨p53基因在大肠癌发生与早期诊断中的作用及其临床意义。方法　运用ELISA法检测 34例大肠癌及 10例健康对照组血清 p53 Ab ,同时运用PCR SSCP与IHC法分析p53基因第 5～ 8外显子突变及蛋白表达情况。结果　 34例大肠癌中 ,p53 Ab阳性率为 17 6 % (6 /34) ,正常对照组均为阴性。大肠癌组织中p53基因第 5～ 8外显子突变及蛋白表达阳性率分别为52 9% (18/ 34)和 55 9% (19/ 34) ,正常粘膜未见p53蛋白表达。 12例癌组织中有 p53基因突变的患者其粪便中基因突变阳性率为 4 1 6 % (5/ 12 )。p53蛋白表达与基因突变呈正相关 (rs=0 349,P <0 0 5) ,p53 Ab存在与 p53基因突变及蛋白表达均无关 (P >0 0 5)。p53基因突变、蛋白表达及 p53 Ab存在与腺癌组织分化、淋巴结转移及其它临床病理因素均无关 (P >0 0 5)。结论　p53基因突变是参与和影响 p53蛋白表达和生物学功能的主要因素。p53基因突变或蛋白表达可诱导 p53 Ab产生 ,但不是其产生的唯一决定因素。ELISA法检测血清p53 Ab对于诊断大肠癌具有 10 0 %特异性 ,血清p53 Ab的检测可成为一种新的肿瘤标记物用于大肠癌的诊断及高危人群的筛检普查。     

低氧诱发人肝癌细胞株HepG2中IAP-2表达及相关机制

目的 研究极度低氧下人肝癌细胞株HepG2中凋亡抑制蛋白2（IAP-2）表达的变化，初步探讨其与缺氧诱导因子1（HIF-1）的相关性。方法 HepG2细胞株分组孵育，用免疫细胞化学定性检测IAP-2蛋白，再用Western blot半定量检测IAP-2蛋白变化，同时对比HIF-1蛋白表达；用RT-PCR检测IAP-2基因水平改变。结果 免疫细胞化学检测IAP-2蛋白在HepG2细胞中呈阳性表达，定位于胞质。Western blot显示，极度低氧1 h IAP-2蛋白表达明显高于常氧组（t=5．723，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，复氧后恢复基线水平；实验还显示HIF-1和IAP-2的蛋白表达具有差异性：常氧组HIF-1未表达，低氧4h可诱发，IAP-2保持基线水平；极度低氧HIF-1无变化，IAP-2表达明显增高；复氧后HIF-1不表达，IAP-2恢复基线表达；加入氯化钴后HIF-1恢复表达，IAP-2保持基线。RT-PCR检测表明，极度低氧1 h IAP-2 mRNA表达明显高于常氧组（t=7．097，P〈0．05），3、5 h IAP-2持续高表达，该结果与上述IAP-2蛋白表达具有一致性。结论 首次表明极度低氧下IAP-2在人肝癌细胞株HepG2表达上调，并具有独立于HIF-1的抗凋亡机制。     

TGF-β1对胃癌和耐药性胃癌细胞株的生长抑制与p53和cyclin D1蛋白相关性研究

目的通过已建立的耐药性胃癌细胞株模型，探讨TGF—β1对胃癌细胞及耐药性胃癌细胞株的生长抑制作用与P53和cyclin D1蛋白相关关系的研究。方法利用MTT、Western blot方法检测细胞生长抑制率、P53和cyclin D1蛋白的表达水平；结果TGF—β1明显抑制SNU-601／WT和SNU-601／cis2细胞的生长，与对照组相比具差异有显著性（P〈0．01），同时，对SNU-601／cis2细胞的抑制率与SNU-601／WT细胞相比，48和72h时明显增高（P〈0．05）。Western blot结果，TGF-β1可时间依赖性抑制P53蛋白的表达，与对照组相比差异具有显著性（P〈0．01）。而对cyclin D1蛋白的表达，在SNU-601／cis2细胞中24和48h有明显抑制作用（P〈0．01）。结论TGF—β1抑制SNU-601／WT细胞及SNU-601／cis2细胞的生长，在耐药性胃癌细胞中其抑制作用更明显。其抑制作用可能与抑制P53蛋白的表达有关；同时，在耐药性胃癌细胞株中早期可抑制cyclin D1蛋白的表达。     

p53基因结构和表达的改变与慢性粒细胞性白血病急变的关系

应用PCR- SSCP、Northern blot和免疫细胞化学方法,对30例临床各期慢性粒细胞性白血病(CML)和K562、HL-60细胞系进行p53基因突变与表达的研究。结果发现,17例慢性期CML中仪1例有外显子6的突变和细胞内P53蛋白的聚积,所有病例均可检测到p53的mRNA表达。而4例加速期和9例急变期CML中各有2例分别在外显子5、6、7上发现突变,有p53表达的仅7例,1例加速期患者的P53蛋白呈强阳性。K562和HL-60细胞系中P53蛋白和mRNA均呈阴性。CML恶化进程中p53基因突变和表达频率的改变表明P53基因的改变至少在部分CML急变中起着重要作用。     

喉癌中P53基因突变与突变型P53基因蛋白表达的相互关系及意义

目的：探讨喉癌Ｐ５３基因突变与突变性Ｐ５３基因蛋白表达之间的相互关系及意义。方法：对４０例喉癌新鲜手术标本采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测Ｐ５３基因突变,免疫组化方法（ＬＳＡＢ）检测突变型Ｐ５３基因蛋白表达,并比较其相互间的关系。结果：４０例喉癌中有２６例基因突变阳性（６５％）,Ｐ５３基因蛋白表达阳性者２３例（５７．５％）;Ｐ５３基因突变与其突变型蛋白表达比较,两者皆阳性为４５％,两者均阴性为２２．５％,     

P53 Gene Mutation and Expression of MDM2, P53, P16 Protein and their Relationship in Human Glioma

To investigate the effect of P53 protein accumulation and p53 gene mutation in the pathogenesis of glioma and to study the role of MDM2, P53 and P16 protein in glioma formation and progression and their relationship with each other, LSAB immunohistochemical staining method and non-isotopic PCR-SSCP techniques were used to detect the expression of MDM2, P53 and P16 protein and p53 gene mutation in 48 cases of gliomas. The results showed that the positive expression rate of MDM2, P53 and the negative rate of P16 was 22.9 %, 41.7 % and 60.4 %, respectively. The latter two in high grade （grade Ⅲ , Ⅳ） gliomas had a significantly higher rate than in the low grade （grade Ⅱ ） gliomas. Moreover, the co-expression of MDM2 and P53 protein was confirmed in only 1 of 48 cases. No significant difference was found in the rate of the expression of MDM2 between high grade and low grade gliomas （P〉0.1） . PCR-SSCP results showed that mutation of 5 --8 exons of p53 gene was detected in 17 out of 48 cases （35.42 %） . Mutation was detected in 16 of 20 cases of positive p53 expression, and another one was detected in 28 cases of negative expression cases. The correlation between p53 mutation and p53 immunopositivity was observed in 89.6 % of the cases. P53 gene mutation and the level of MDM2, P53 and PI6 protein were not related to age, gender of the patients, tumor location and size. It is concluded that the mutation of p53 and deletion of p16 might play important roles in the tumorigenesis of gliomas and it was significantly associated with the grade of tumor differentiation. P53 protein accumulation can indirectly reflect p53 mutation. MDM2 amplification and overexpression might be an early event in the growth of human gliomas.     

P21、P185、P53蛋白表达及P53基因突变与膀胱癌移行细胞生物学行为关系的研究

目的：探讨癌基因及抑癌基因改变与膀胱癌生物学行为产关系。方法：采用免疫组织化学方法及分子生物学技术,检测了８２例膀胱移行细胞癌Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达及３８例Ｐ５３基因突变。结果：Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达阳性率分别为６２．２％（５１例）、５８．５％（４８例）、３１．７％（２６例）。１２例（３１．６％）有Ｐ５３抑癌基因突变,其中全部有第２８０位密码子Ｇ－Ｃ突变;３例合并有２４８密码子     

食管鳞癌p53基因突变和p53功能失活的对照研究

目的研究食管鳞癌p53基因突变在p53功能失活中所占的比例,并初步探索食管鳞癌p53功能失活的原因。方法对45例新鲜食管鳞癌组织（正常食管组织作为对照）进行p53基因突变检测（p53-PCR-SSCP法）、p53sD能失活检测（p53SD能测定法）以及2种p53结合蛋白MDM2和HPV16／18-E6的表达检测（免疫组化sP法）。对上述结果进行统计学分析。结果p53功能失活率为64％,p53基因突变平为49％;p53基因无突变组中,p53功能失活者HPV16／18--E6表达率高于p53功能正常者,也高于p53基因突变组l而3组间MDM2表达率无统计学差异。结论食管鳞癌p53SD能失活率高于p53基因突变率,p53sD能失活有望成为一种评价食管鳞癌生物学特性的新指标;食管鳞癌p53功能失活的原因可分为p53基因突变和非基因突变原因,前者占72％,后者占28％。在非基因突变原因中可能存在p53结合蛋白HPV16／18-E6的参与,而不存在MDM2的参与。     

乙型肝炎病毒相关性肝癌与p53基因变化的关系

目的：探讨与ＨＢＶ感染相关的肝癌其ｐ５３基因变化及意义，方法：收集１６例西安地区的肝癌及其旁肝组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测了组织中ＨＢＶＤＮＡ的状态，免疫组化确定ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ，ＨＢｘＡｇ和肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白的分布，采用ＰＣＲ扩增后直接ＤＮＡ序列分析，检测了ｐ５３基因第５～８外显子的基因序列。结果：１６例中１３例ＨＢＶＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性，１０例癌组织和１３例癌旁组织ＨＢｘ     

口腔舌鳞癌p53基因突变及其表达的相关性研究

目的：探讨口腔舌鳞癌中p53基因突变及其蛋白的表达两者相关性。方法：应用Western blot和聚合酶链反应-单链构象多态性方法检测38例口腔舌鳞癌、20例口腔癌前病变及10例正常口腔黏膜组织中p53蛋白表达及p53基因突变情况。结果：p53蛋白在口腔舌鳞癌、癌前病变和正常口腔黏膜组织的阳性表达率分别为42．1％（16／38）、10．0％（2／20）、0％（0／10）。39．5％（15／38）的口腔舌鳞癌存在p53基因第5、8外显子突变。在p53基因突变的病例中，p53蛋白表达与其基因突变密切相关。结论：p53基因突变及其蛋白过量表达与口腔舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。     

85例非小细胞肺癌中p53基因异常的预后价值

目的：探讨ｐ５３蛋白表达和基因突变在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的预后价值。方法：利用免疫组化方法检测８５例ＮＳＣＬＣ的ｐ５３蛋白表达，聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３１例肺腺癌ｐ５３基因５、６、７、８外显子突变，研究结果进行单因素生存分析。结果：本组ＮＳＣＬＣ病人的平均年龄为５５．６±８．４岁（中位数５５岁），随访时间的中位数为４７个月，３年、５年总体生存率分别为６６％和６１％。ｐ５３蛋白表达与预后无关（χ２＝１．００，Ｐ＝０．８），而ｐ５３基因突变组病人的生存率显著低于无ｐ５３基因突变组（χ２＝４．８１，Ｐ＝０．０３）。同时，ｐ５３蛋白表达与ＰＣＲ－ＳＣＰ检测的ｐ５３基因突变的一致率仅为５２％。结论：在ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达和基因突变可能有不同的预后意义，ｐ５３基因突变可作为肺腺癌的辅助预后指标。     

溃疡性结肠炎及伴发癌的p53改变和微卫星不稳定性

目的:探讨溃疡性结肠炎和不典型增生、癌变组织的p53基因改变和微卫星不稳定性状况.方法:采用SP法检测21例70个手术切除的溃疡性结肠炎标本和25例正常人的P53蛋白表达;人工微切割-PCR-SSCP/HA-克隆测序技术检测溃疡性结肠炎标本p53基因第5-8外显子的点突变;SSLP-测序技术检测10个微卫星位点的改变情况.结果:P53蛋白免疫组化发现25例正常人全部阴性;溃疡性结肠炎患者4例阳性,其中炎症性、低度不典型增生(LGD)、高度不典型增生(HGD)与癌变阳性标本分别为0/5例、1/7例、2/7例和1/2例.SSCP/HA、SSLP结果各有2例阳性,其中1例癌变病例癌组织 p53基因第6外显子及Bat26微卫星位点均阳性,其LGD区Bat26也阳性;1例LGD病例Bat26位点阳性;另1例HGD病例p53基因第8外显子阳性,后者经测序证实发生了移码突变.21例标本在TGFβRII(A)10、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFβRII(GT)3、BAX(G)8、hMSH3(A)8、hMSH6(C)8、TCF4(A)9和DPC4(CA)179个微卫星位点都阴性.结论:溃疡性结肠炎和癌变黏膜的早期就存在P53蛋白的过表达和微卫星不稳定性,前者部分是基因突变的结果.