泛素-蛋白酶体系统及蛋白酶体抑制剂与大肠癌关系研究进展

大肠癌（eolorectaleflncer,CRC）包括结肠癌和直肠癌,是最常见的消化道肿瘤之一,其年死亡率为5．07／10万人,在恶性肿瘤中居第5位。随着饮食结构的改变,我国的大肠癌发病率逐年上升。目前,大肠癌的治疗首选外科手术以及放化疗,但疗效仍不令人满意。有研究表明,泛素一蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasomesystem,UPS）的异常在多种疾病的发病机制中都可能发挥重要作用,在大肠癌中同样如此。UPS突变会导致对靶蛋白的调控能力丧失,     

泛素-蛋白酶体抑制剂对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移是动脉粥样硬化(As)、高血压和冠状动脉成形术后再狭窄的主要病理表现。而As也是导致心脑血管疾病的重要原因。泛素-蛋白酶体系统是真核细胞内主要的细胞降解系统,而泛素-蛋白酶体抑制剂可以抑制VSMC的增殖及迁移。     

泛素-蛋白酶体系统及其抑制剂与动脉粥样硬化的相关性研究

动脉粥样硬化是全球高病死率的疾病之一,尽管多年来其发病机制不断被研究,但临床治疗效果仍不理想,迫切需要一种新的、具有针对性的治疗药物。泛素-蛋白酶体系统调控的蛋白水解对细胞维持蛋白稳态至关重要,其已被公认为心脑血管疾病的重要监管途径,参与影响动脉粥样硬化疾病进展的许多过程。然而在研究过程中,泛素蛋白酶抑制剂对动脉粥样硬化的影响结果有所差异。因此,针对泛素蛋白酶系统治疗动脉粥样硬化的合理性和可行性越来越受到重视。本文对泛素-蛋白酶体系统对动脉粥样硬化的监管机制,以及差异影响的原因做一综述。     

泛素蛋白酶体抑制剂在急性髓系白血病中的研究进展

泛素蛋白酶体系统(UPS)在真核生物蛋白质循环中具有重要生物学作用,出现异常可导致肿瘤的发生。目前包括白血病在内的多种肿瘤患者体内均检测到高水平的泛素蛋白酶体活性。泛素蛋白酶体抑制剂通过影响泛素蛋白酶体系统的E3连接酶、去泛素化酶以及蛋白质降解活性位点能够有效地杀伤肿瘤细胞。临床上已经将相关泛素蛋白酶体抑制剂用于治疗血液系统肿瘤,但在急性髓系白血病中的应用相对较少。本文对影响蛋白质泛素化降解不同阶段的抑制剂在急性髓系白血病中的研究进展进行相关总结,为研发急性髓系白血病有效疗法提供新思路。     

泛素-蛋白酶体系统在心肌肥厚中的研究进展

泛素-蛋白酶体系统(UPS)是真核细胞内蛋白质降解的主要途径之一。UPS参与真核细胞的许多生物学功能(如炎症、细胞信号转导、转录调控以及细胞凋亡等)。心肌肥厚是导致多种心血管疾病发病率和病死率升高的独立危险因素之一。心肌肥厚的发生机制极其复杂,蛋白酶体可在心肌肥厚模型中被激活,而蛋白酶体抑制剂能阻止或逆转心肌肥厚。     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过体外实验研究成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人类卵巢癌细胞系0VCAR3,用不同浓度的FAP(0、0.0625、0.125、0.25、0.5及1μg/mL)处理24 h或48 h后,通过MTT法检测FAP对卵巢癌细胞增殖的影响。0VCAR3用不同浓度的FAP(0、0.0625、0.25及1μg/mL)处理48 h后,通过流式细胞术检测FAP对OVCAR3细胞凋亡的影响。结果 MTT法示FAP可促进卵巢癌细胞OVCAR3增殖,其作用呈时间、剂量依赖性(P0.05);流式细胞术示FAP对卵巢癌细胞系OVCAR3的细胞凋亡率并无明显影响(P0.05)。结论 FAP可促进卵巢癌细胞系OVCAR3的增殖,对其凋亡水平无明显影响。     

尿激酶对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨尿激酶(Urokinase,UK)对大鼠肺成纤维细胞凋亡的影响。方法:5只SD雄性大鼠气管内灌注博莱霉素造肺纤维化模型,将模型组肺成纤维细胞与不同浓度的尿激酶培养24~96h,流式细胞术测定细胞凋亡。结果:尿激酶以时间和浓度依赖的方式抑制肺成纤维细胞生长,流式细胞术检测到凋亡小体。结论:尿激酶能抑制肺成纤维细胞增殖,与凋亡有关。     

蛋白酶体抑制剂对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌细胞系BELT402体外增殖和凋亡的影响。方法：用MG-132处理体外培养的BEL7402细胞，采用MTT法测细胞的生长抑制率，Annexin V／PI法、电镜、DNA片段分析观察MG-132对细胞凋亡的诱导作用及比色法测半胱天冬酶cagpage-3活性的变化。结果：MG132可明显抑制BEL7402细胞体外增殖，随着MG132浓度的增加和处理时间延长，细胞凋亡率增加，电镜观察发现，经MG-132处理后的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征，细胞DNA抽提电泳发现特征性凋亡梯状条带，caspase-3活性显著升高。结论：MD132可抑制人肝癌BEL7402细胞增殖并促进其凋亡。     

亚砷酸对小鼠成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究亚砷酸对成纤维细胞株增殖和凋亡的作用.方法 运用镜下观察细胞生长形态、MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞Annexin V的表达.结果 在4.0 mg/L的亚砷酸作用下,成纤维细胞不呈现典型的梭形贴壁细胞形态,增殖受抑制,并明显诱导细胞Annexin V的表达.亚砷酸低于2.0 mg/L时,对成纤维细胞无明显的凋亡诱导作用,而且细胞抑制不明显.结论 高剂量的亚砷酸能改变成纤维细胞的细胞形态,并具有诱导细胞凋亡和抑制增殖的作用.     

重组高效复合干扰素对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究重组高效复合干扰素(rSIFN-co)对肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法 筛选rSIFN-co对A549细胞的有效浓度,及与顺铂联合用药的最佳浓度和作用时间。分为rSIFN-co（5 μg/mL）组、传统重组集成干扰素α(干复津,5 μg/mL）组、rSIFN-co（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、干复津（5 μg/mL）+顺铂（2 μg/mL）组、顺铂（2 μg/mL）组和RPMI-1640液空白组,分别干预A549细胞。MTT法检测各组7 d活细胞数并作生存曲线,流式细胞仪检测48 h各组细胞凋亡率,免疫荧光法检测48 h各组凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2表达。结果 rSIFN-co的有效浓度为1 ～64 μg/mL,顺铂的最低有效浓度为2 μg/mL,与2 μg/mL顺铂联合用药时rSIFN-co 的最佳浓度为5 μg/mL,最佳作用时间为48 h。生存曲线示rSIFN-co对A549的抑制作用强于干复津,rSIFN-co+顺铂的抑制作用强于干复津+顺铂。rSIFN-co可诱导A549细胞凋亡,rSIFN-co组凋亡率高于干复津组(P=0.000),rSIFN-co+顺铂组凋亡率高于rSIFN-co组（P=0.004）及顺铂组（P=0.023）。rSIFN-co能增强A549中Fas的表达,并抑制Bcl-2的表达,其中rSIFN-co组Bcl-2表达低于干复津组(P<0.05)。结论 rSIFN-co能抑制A549增殖,且作用强于干复津,与顺铂联合应用的抑制作用增强,其对A549的抑制作用与调节凋亡相关基因表达有关。     

唾液酸酶对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨唾液酸酶与子宫内膜癌细胞Ishikawa浸润、增殖和凋亡的关系。 方法 培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,并分成对照组和处理组,处理组给予唾液酸酶活性抑制剂(DANA)处理,比对两组细胞上清液的唾液酸酶活性后通过免疫荧光检测、流式细胞学或MTT实验检测对照组和处理组细胞基质金属蛋白酶（MMPs）表达水平、细胞增殖核抗原（PCNA）水平、凋亡和增殖情况。 结果 处理组上清液唾液酸酶活性减弱且细胞MMPs的表达降低,处理组的细胞凋亡率明显降低,各组细胞的增殖能力无差异。 结论 唾液酸酶可影响Ishikawa细胞的侵袭性和凋亡率,但对细胞的增殖能力无明显影响。     

环孢霉素A对人胚肺纤维母细胞增殖及凋亡的影响

目的 :通过观察环孢霉素 A( Cs A)对人胚肺纤维母细胞 ( 2 BS)增殖及凋亡的影响 ,探讨该药在抑制肺纤维化中的疗效及其作用机制。方法 :采用生物活性法观察药物对 2 BS细胞的增殖抑制作用 ,采用流式细胞仪检测药物诱导的 2 BS细胞凋亡小体形成百分率 ,同时观察其对细胞周期的影响 ,并与甲基强地松龙 ( M- pred)对比研究。结果 :1 Cs A和 M- pred两种药物对 2 BS细胞均有增殖抑制作用 ,分别与对照组比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,Cs A的药物作用比 M- pred明显( P<0 .0 1 ) ;2 Cs A和 M- pred明显促进 2 BS细胞凋亡 ,与对照组比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,Cs A作用较 M- pred更明显 ( P<0 .0 5 )。Cs A主要作用于细胞 S+ G2 /M期 ,M- pred主要作用于 S期。结论 :Cs A和 M- pred可抑制 2 BS细胞增殖并促进其凋亡 ,Cs A作用明显强于 M- pred。Cs A是治疗肺纤维化更为有效的药物 ,促进细胞凋亡可能是其主要药物作用机制之一。     

单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的研究兔单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞增殖和凋亡活性的影响.方法 24只5～6月龄的日本大耳白兔被随机分为两组：空白对照组和手术组.手术组通过手术切除右侧髁突建立动物模型,分别于术后2月、4月的时间处死动物,取其左侧（非手术侧）颞颌关节,采用免疫组化染色和TUNEL染色,分别观察非手术侧髁突软骨中增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡细胞的表达和分布.结果免疫组化和TUNEL染色显示与同时间段空白对照组相比,无论是手术组（单侧髁突切除）术后2月,还是手术组术后4月,非手术侧髁突软骨PCNA阳性细胞表达量均降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）;与手术组术后2月相比,手术组术后4月PCNA阳性细胞表达量降低;而TUNEL染色阳性细胞数增高（P〈0.05）.结论单侧髁突切除可导致非手术侧髁突软骨细胞增殖能力下降,凋亡细胞数量增加.     

菊米提取液对人胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响

目的观察菊米提取液对人胃癌细胞株AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法 AGS细胞与0.001、0.002、0.005、0.010mg/ml的菊米提取液共同孵育48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,分光光度法检测caspase-3/7酶及caspase-6酶活性。结果不同浓度(0.001～0.010mg/ml)的菊米提取液对AGS细胞的生长具有明显的抑制作用,呈现出一定的剂量依赖性;含菊米提取液0.002、0.005、0.010mg/ml的药物组细胞凋亡发生率分别为(11.03±2.01)%、(15.53±1.96)%及(23.77±1.65)%,不含药的对照组细胞凋亡发生率为(1.77±0.60)%;与对照组相比,除最低浓度(0.001mg/ml)药物组以外,其余药物组(0.002、0.005、0.010mg/ml)caspase-3/7酶及caspase-6酶活性有显著增强。结论菊米提取液在体外可呈浓度依赖性抑制人胃癌细胞株AGS的增殖并通过caspase-3、6、7通路促进其凋亡。     

蛋白酶体抑制剂在癌症治疗中的作用

蛋白酶体抑制剂对人工培养的细胞具有有效的抗肿瘤活性,通过降解受调控的促生长细胞周期蛋白来诱导肿瘤细胞的凋亡。这种可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡的方法被证明在动物模型以及人体试验中都非常有效。第一个获准临床试验和上市的蛋白酶体抑制剂硼替佐米,在治疗多发性骨髓瘤的患者中获得了较高的总体有效率和完全缓解率,这些显著的临床效果同时也激励着科学工作者们不断地向新的领域研究和探索。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

SD大鼠髁状突颈部骨折对大鼠髁状突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的研究发育期SD大鼠髁状突颈部骨折对下颌髁状突软骨细胞增殖和凋亡活性的影响.方法18只4周龄SD大鼠,分为髁状突骨折组及空白对照组,分别于术后1周、3周、5周时脱颈处死,取骨折组手术侧、非手术侧及空白对照组髁状突软骨,分别采用免疫组织化学染色和TUNEL染色,观察髁状突软骨细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和凋亡细胞数.结果在各时间点,手术侧、非手术侧的PCNA阳性细胞数存在统计学差异(P<0.01).术后3、5周,空白组与手术侧PCNA阳性细胞数有统计学差异(P<0.01);术后3周,非手术侧大鼠髁突软骨中凋亡细胞数明显增多,手术侧凋亡细胞数随时间推移明显降低;术后1周,手术侧的凋亡细胞数明显多于非手术侧(P<0.01);术后3周,非手术侧的凋亡细胞数明显多于手术侧(P<0.01);术后1、5周,空白组与手术侧凋亡细胞数有显著性差异(P<0.01).结论一侧髁状突颈部骨折导致两侧髁状突所受应力失衡,影响两侧髁状突软骨细胞增殖与凋亡的平衡,进而影响下颌骨及颌面部的发育.     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度（0．5、1．0、5．0、10．0和50．0μmol／L）的MG132处理Raji细胞24h和48h,MTT法检测细胞增殖情况;5．0μmol／LMG132处理Raji细胞24h,流式细胞术进行细胞凋亡率及细胞周期分析。结果：浓度为1．0、5．0、10．O、50．0μmol／L的MG132作用于Raji细胞24h和48h后,细胞增殖OD（A490nm）值均显著低于对照组（P〈0．05）,增殖抑制率（20．60±10．28）％～（60．40±2．75）％,随MG132浓度的增加和作用时间的延长细胞增殖抑制率增高,抑制作用呈现剂量和时间依赖性;5．0μmoL／L的MG132作用Raji细胞24h后,实验组细胞凋亡率为25．86％,对照组为0．06％,实验组s期细胞比率（51．70％）较对照组（39．83％）上升,而G0／G1期细胞比率（33．54％）较对照组（46．04％）下降。结论：蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制Raji细胞的增殖并诱导其发生凋亡和G2／M期阻滞。     

胶质瘤细胞增殖活性和凋亡与临床病理特征的相关性研究

目的探讨胶质瘤中细胞增殖和凋亡的关系及其与临床病理特征的相关性。方法采用常规免疫组化技术和TUNEL技术分别检测96例人脑胶质瘤中瘤细胞增殖活性(PCNA蛋白的表达)和细胞凋亡的改变。结果96例胶质瘤中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级肿瘤的PCNA标记指数(PCNA LI)分别为26.79±3.45%、44.32±5.83%、83.31±13.67%,显著高于正常脑组织(2.67±1.31%)(P<0.05),并且随着肿瘤分级的升高而递增。在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中凋亡指数(AI)分别为18.92±7.21,10.18±4.25,5.25±1.93,并随分级的升高而递减,Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级肿瘤中AI有显著差异,Ⅲ、Ⅳ级间无差异。PCNA LI与AI呈显著负相关(P<0.05)。各级别胶质瘤中PCNA LI/AI随着病理分级的升高而增大,呈显著正相关性(P<0.01)。结论胶质瘤的发生和发展与瘤细胞增殖活性的增高和细胞凋亡的抑制密切相关,胶质瘤PCNA LI/AI比PCNA LI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。