尼美舒利联合阿霉素抑制人肝癌细胞株体外增殖的实验研究

目的探讨尼美舒利联合阿霉素能否增强对肝癌细胞生长的抑制.方法采用MTT法测定尼美舒利、阿霉素及尼美舒利联合阿霉素对SMMC7721、HepG2细胞体外增殖的抑制率,统计学及金正均法q值判断两药的相互作用.结果不同浓度的尼美舒利和阿霉素可抑制SMMC7721、HepG2的增殖,并呈剂量依赖性,尼美舒利和阿霉素联合使用抑制作用明显增强,尼美舒利25、50、100 μmol/L分别与阿霉素0.156 25、0.317 5、0.625、1.25 μmol/L合用时,q值均>1.15,呈现协同作用.统计学处理结果均显示两种药物间存在交互作用.结论一定浓度的尼美舒利在体外能增强阿霉素对肝癌细胞生长的抑制;尼美舒利与阿霉素抗肝细胞癌作用具有协同效应.     

尼美舒利β-环糊精包合物的制备

目的 研究β-环糊精对尼美舒利的包合作用.方法 以尼美舒利的包合率为指标,采用L9(34)正交设计法,筛选尼美舒利β-环糊精包合物的最佳制备条件.结果 最佳条件为尼美舒利-β-环糊精投料比为1:2,搅拌时间为2h,包舍温度为75℃.结论 此条件为尼美舒利β-环糊精包合物的最佳包合条件.     

尼美舒利对Alzheimer's大鼠的脑保护作用

目的:建立大鼠Alzheimer's病(AD)炎症病理模型,探讨非甾体类抗炎药物尼美舒利在AD防治中的作用.方法:25只大鼠随机均分为β淀粉样蛋白(Aβ)组、Aβ 羧甲基纤维素钠组、Aβ 尼美舒利组、假手术组与空白对照组.前3组在大鼠双侧海马CA1区立体定向注射Aβ造AD模型,假手术组注射生理盐水,正常对照组不做任何处理.Aβ 尼美舒利组采用尼美舒利(2.5g/L)灌胃治疗,Aβ 羧甲基纤维素钠组给予50g/L羧甲基纤维素钠.4周后各组大鼠均作Y型迷宫测试观察学习记忆能力.采用免疫组化法检测大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Bcl-2的表达.结果:与假手术组和空白对照组相比,Aβ组、Aβ 羧甲基纤维素钠组和Aβ 尼美舒利组学习记忆能力显著降低(P＜0.05),GFAP及Bcl-2阳性细胞数明显增加(P＜0.05);与Aβ组及Aβ 羧甲基纤维素钠组相比,Aβ 尼美舒利组学习记忆能力显著改善,GFAP阳性细胞数明显降低,Bcl-2阳性细胞数增加(P均＜0.05).结论:在体条件下尼美舒利通过抑制胶质细胞增生及细胞凋亡等机制对AD大鼠发挥脑保护作用.     

尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的:体外研究尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用MTT法、流式细胞仪(FCM)、电镜等技术,体外研究尼美舒利对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和影响及可能的机制.结果:MTT显示尼美舒利(12.5～400μmol/L)呈时间-剂量依赖方式抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖.FCM显示,DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰".S期、G2/M期细胞比例升高,G1期细胞比例下降,阻止细胞周期的进展.电镜下见典型的细胞凋亡形态特征:细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等.结论:尼美舒利体外能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901生长,可能与诱导细胞凋亡阻止细胞周期进展有关.     

尼美舒利对脱氧胆酸诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖的抑制作用的研究

目的观察尼美舒利对脱氧胆酸(DCA)诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用,探讨其可能的机制。方法200μmol/L DCA加到HT-29细胞培养液中,同时给予不同浓度尼美舒利(50、75和100μmol/L),采用MTT法测定细胞增殖;RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA,免疫组化染色法检测细胞COX-2表达,放免法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果DCA作用HT-29细胞6h,COX-2蛋白表达阳性率较对照组明显升高(64.2%±6.2%比7.1%±1.9%),PGE2合成增加(23.9ng/L±1.3ng/L比10.5ng/L±0.9ng/L),尼美舒利对DCA诱导的HT-29细胞作用6h可抑制细胞增殖,并可抑制DCA诱导的COX-2mRNA表达,并抑制PGE2合成,上述作用均呈浓度-时间依赖性。结论尼美舒利可抑制DCA诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖,抑制COX-2mRNA表达和蛋白表达及PGE2合成,这可能是尼美舒利抑制HT-29细胞增殖的机制之一。     

尼美舒利对脱氧胆酸诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖的抑制作用的研究

目的观察尼美舒利对脱氧胆酸(DCA)诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用,探讨其可能的机制。方法200μmol/L DCA加到HT-29细胞培养液中,同时给予不同浓度尼美舒利(50、75、100μmol/L),采用MTT法测定细胞增殖;RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA,免疫组化染色法检测细胞COX-2表达,放免法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果DCA作用HT-29细胞6h,COX-2蛋白表达阳性率较对照组明显升高〔(64.2±6.2)%或(7.1±1.9)%〕,PGE2合成增加〔(23.9±1.3)ng/L或(10.5±0.9)ng/L〕,尼美舒利对DCA诱导的HT-29细胞作用6h可抑制细胞增殖,并可抑制DCA诱导的COX-2mRNA表达,抑制PGE2合成,上述作用均呈浓度-时间依赖性。结论尼美舒利可抑制DCA诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖,抑制COX-2 mRNA表达和蛋白表达及PGE2合成,这可能是尼美舒利抑制HT-29细胞增殖的机制之一。     

SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响

探究SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响。方法 收集2019年3月—2021年12月我院行骨肉瘤手术切除的105例患者的组织标本,免疫组化检测骨肉瘤组织中SIX2表达和微血管密度（MVD）计数;检测骨肉瘤组织中SIX2 mRNA表达水平。将人骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组、si-NC A组、si-SIX2 A组,将通过阿霉素耐药得到的骨肉瘤阿霉素耐药细胞株MG-63/R分为MG-63/R组、si-NC B组和si-SIX2 B组。分别用MTT法、克隆实验、流式细胞术及Transwell法检测细胞耐药性、细胞增殖、细胞凋亡和细胞侵袭。结果 在骨肉瘤组织中,SIX2阳性表达会随着MVD值升高而增加（P＜0.05）。骨肉瘤组织中SIX2阳性表达与TNM分期、软组织浸润和淋巴结远处转移相关（P＞0.05）。与MG-63组相比,si-SIX A组细胞的血管形成能力明显降低（P＜0.05）;与MG-63/R组相比,si-SIX2 B组细胞IC50、细胞克隆数和细胞侵袭能力均显著降低,细胞凋亡能力明显增加,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍（P＜0.05）。结论 SIX2在骨肉瘤组织中呈高表达,且随着SIX2表达的升高肿瘤血管生成能力也增加;抑制SIX2表达可有效抑制骨肉瘤组织的生成,逆转骨肉瘤细胞阿霉素耐药     

尼美舒利对氯化钴诱导的BGC-823细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的:研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利对低氧模拟剂氯化钴诱导的胃癌细胞株BGC-823 HIF-1α、VEGF表达的影响.方法:分别应用150μmol/L氯化钴单独或联合10μmol/L、40 μmol/L、80μmol/L的尼美舒利作用于BGC-823细胞24 h,收集细胞,应用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1 α及VEGF的表达.以胎牛血清加RPMI 1640培养基培养细胞作正常对照.结果:与正常对照组比较,150μmol/L氯化钴刺激24 h,可显著提高细胞HIF-1 α蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),但对HIF-1α mRNA表达无影响.与氯化钴单独作用比较,尼美舒利和氯化钴联合作用24 h,细胞HIF-1 α蛋白、VEGF mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),并呈剂量依赖性,但对HIF-1α mRNA表达无影响.结论:COX-2抑制剂尼美舒利可抑制氯化钴诱导的HIF-1α、VEGF表达,这可能是其抗肿瘤血管生成的机制之一.     

姜黄素对骨肉瘤细胞增殖、凋亡影响及作用机制研究

目的:探讨姜黄素对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:选用骨肉瘤MG-63细胞株,分别采用不同浓度的姜黄素进行处理。采用MTT比色法检测骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测骨肉瘤MG-63细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测骨肉瘤MG-63细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:①干预12、24、48 h后,与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组及20μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。②干预48 h后,与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞凋亡率较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。③与对照组比较,黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞P53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Caspase-9前体(proCaspase-9)蛋白表达水平较低,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。④与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞Bcl相关蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:姜黄素能剂量依赖性的抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖,并促进其凋亡,其作用可能与下调P53、Bcl-2、proCaspase-9蛋白表达,上调Bax、Cyt-C、Caspase-3蛋白表达,激活线粒体凋亡途径有关。     

尼美舒利诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利体外诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡的作用和可能的细胞内信号转导机制。方法体外将选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胃癌细胞株SGC7901,流式细胞仪检测尼美舒利对细胞凋亡的影响;Western blot法检测药物作用前后STAT3蛋白的磷酸化活性(P-STAT3)和bcl-2的表达。结果FCM显示SGC7901细胞经100、200μmol/L尼美舒利作用48h后与对照组相比细胞凋亡百分数增高,且在同一时间随药物浓度增加凋亡百分数增高;Western blot结果显示尼美舒利作用24、48h后P-STAT3、bcl-2蛋白的表达降低。结论尼美舒利体外可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、bcl-2表达有关。     

三苯氧胺与阿霉素联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨三苯氧胺（tamoxifen,TAM)和阿霉素(adriamycin，ADM)联合应用对乳腺癌细胞MCF—7(ER )生长和凋亡的影响。方法：分别或联合应用不同浓度的TAM、ADM作用于MCF—7细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果：TAM与ADM均可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡。TAM可造成MCF—7细胞G0／G1期阻滞，且呈时间、剂量依赖性；ADM可造成G2／M期细胞增高；两者联用时MCF—7细胞的生长抑制率、凋亡率无明显增加，G0／G1期细胞增高。结论：TAM与ADM可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡，两者联合应用不能增强作用效果，无协同作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤MG-63的诱导凋亡作用及其机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）曲古抑菌素（TSA）对骨肉瘤细胞株MG-63的杀伤作用及机制。方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的骨肉瘤细胞,采用MTF法检测细胞生长抑制率;以流式细胞技术（FCM）测不同浓度TSA作用前后骨肉瘤细胞周期变化情况;免疫细胞化学技术观察对Survivin基因和血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平;RT—PCR分析TSA作用前后骨肉瘤细胞内P21^waf1/cip1mRNA的表达变化。结果TSA在纳摩尔浓度即可抑制细胞增殖;FCM检测到细胞周期发生改变,GJM期细胞较对照组增多。免疫组化结果表明,该药能明显抑制Survivin和VEGF蛋白的表达,RT—PCR结果表示TSA能显著诱导P21waf1／cip1 mRNA表达。上述结果都有明显的量一效关系。结论TSA作用于G州期并有效诱导体外培养的骨肉瘤细胞凋亡,其诱导凋亡机制之一可能是通过抑制Survivin和VEGF基因的表达并且上调P21蛋白水平实现的。     

The expression of TRAIL and its receptors in osteosarcoma cells and the apoptosis effect of a combination of TRAIL, adriamycin and IFN-γ on MG-63 cells

Objective: This study investigated the effects of rh-TRAIL with or without chemotherapeutic drugs on the apoptosis of the osteosa-rcoma cell line, MG-63, and the influence of chemotherapeutic drugs on changes in the expression of DR5 and YinYang1(YY1) in MG-63 cells. Methods: The effects of treatment with rh-TRAIL alone and/or chemotherapeutic drugs on MG-63 cell growth inhibition and apoptosis were measured using the MTT assay, FACS analysis of Annexin V labeled cells, and the mRNA changes of DR5 and YY1 were detected by RT-PCR. Results: Rh-TRAIL protein inhibited the growth of MG-63 cells, and this inhibition was increased by adriamycin and IFN-γ. Adriamycin and IFN-γ significantly facilitated the induction of the expression of DR5 and reduced the expression of YY1. Conclusion: The apoptosis-inducing effect of rh-TRAIL in MG-63 cells was enhanced by chemotherapeutic drugs.     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

XK469和阿霉素对H460细胞生长的影响及其机制

目的 探讨XK469和阿霉素对H460细胞的抑制作用及其机制。方法 采用MTT比色法观察不同浓度XK469、XN472和阿霉素对H460细胞生长的影响，采用流式细胞术观察药物作用下细胞周期的变化，采用Western blotting检测药物作用后H460细胞内cdc2和phos-cdc2的表达水平。结果 不同浓度XK469、阿霉素可明显抑制H460细胞的生长，导致H460细胞发生G2／M期阻滞，胞内phos-cdc2表达明显增高。20ug／ml以上浓度XN472作用24h可抑制H460细胞生长。但是到120h时抑制作用消失。结论 XK469和阿霉素通过使H460细胞内phos-cdc2水平增高导致其G2／M期阻滞从而抑制其增殖生长．7-氯结构对XK469的抗肿瘤效应有重要的意义。     

miR-375逆转MCF-7/Adr耐药性的功能研究

目的 研究乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/Adr高表达miR-375后对阿霉素敏感性的影响.方法 将miR-375模拟物(miR-375 mimics)和mimics negative control(NC)分别转染MCF-7/Adr;阿霉素处理后用WST-1法检测耐阿霉素细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;细胞划痕实验、transwell迁移、侵袭实验检测MCF-7/Adr细胞的迁移和侵袭能力.结果 在MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以提高其对阿霉素的敏感性并促进其凋亡;高表达miR-375的MCF-7/Adr细胞周期阻滞在G1期;转染miR-375后对MCF-7/Adr细胞的迁移、侵袭能力有抑制作用.结论 MCF-7/Adr细胞中高表达miR-375可以增加其对阿霉素的敏感性.     

幽门螺杆菌对胃癌上皮细胞株AGS细胞的生长抑制作用及其分子机理探讨

目的 观察体外实验中幽门螺杆菌(Hp)对胃癌上皮细胞株AGS细胞生长的影响,探讨Hp致病的分子机理。方法 胃癌细胞系AGS细胞体外培养,加入Hp活菌后,通过形态观察、细胞计数了解细胞生长情况;通过细胞核荧光染色、细胞DNA电泳检测细胞凋亡;通过流式细胞技术观察Hp对AGS细胞周期的影响,并进一步检测相应的细胞周期素。结果 Hp对AGS细胞生长有抑制作用。加入Hp后细胞凋亡增加,并导致G1／S细胞周期阻滞,伴有细胞周期素D1表达上调。结论 Hp急性感染可抑制AGS细胞生长,此作用可能与其诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。提示Hp感染能够破坏正常细胞周期调节。     

辣椒素诱导人膀胱癌RT4细胞细胞周期阻滞的实验观察

目的 了解辣椒素对膀胱癌RT4细胞生长的影响及可能机制.方法 采用细胞计数kit-8(CCK-8)试剂盒观察辣椒素(50、100、150、200、250μmol/L)对膀胱癌RT4细胞生长的影响,以辣椒素(0 μmol/L)为对照组;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫荧光检测瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)的表达;Western印迹检测细胞周期蛋白P53、P21、细胞周期依赖性激酶(CDK)2表达水平.结果 100 μmol/L辣椒素明显抑制RT4细胞生长,细胞成活率为82.0%±6.2%,低于对照组(100.0%±12.4%,P=0.036),且生长抑制呈剂量依赖性,250μmol/L时细胞成活率仅为7.8%±2.9%(P=0.000).辣椒素能诱导RT4细胞G0/G1期阻滞,同样呈剂量依赖性,对照组G0/G1期细胞比例为37.4%±5.6%,而250 μmol/L时达到72.4%±5.3%(P=0.000).RT4细胞表达TRPV1受体mRNA和蛋白.与对照组比较,辣椒素处理后48 h,P53、P21表达上调,而CDK2表达下调.结论 辣椒素可以通过TRPV1受体调节P53、P21、CDK2表达以诱导人膀胱癌RT4细胞G0/G1期阻滞而抑制其生长.     

二甲双胍联合异羟肟酸对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响

目的 研究二甲双胍(Met)联合异羟肟酸(SAHA)应用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法MTS法分别检测二甲双胍、SAHA和二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞凋亡的影响;Western Blot检测联合用药后细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果二甲双胍和SAHA分别对MG-63细胞生长有抑制作用,二甲双胍联合SAHA应用对MG-63细胞生长的抑制作用更加显著;二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够明显降低MG-63细胞克隆形成率,并且促进细胞凋亡;联合用药后P27,P21,Cyclin D1,Mcl-1,XIAP,Bim,Cytochrome C蛋白发生明显改变。结论二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进其凋亡,可见两药联用对肿瘤细胞的杀伤具有协同性。     

VES体外抑制Raji细胞增殖及机制的初步研究

目的：观察维生素E琥珀酸酯（VES）体外对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期和细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）的影响。方法：应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法，体外观察VES对Raji细胞的作用。结果：VES对Raji细胞的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生，具有剂量疚和时间效应关系，同时VES作用后，细胞内CDK2蛋白表达下降，细胞周期发生变化，细胞阻滞于C1期。结论：VES通过影响细胞周期调控因子CDK2的表达从而干扰细胞周期可能是其抗肿瘤的途径之一。