CD4+CD25+调节性T细胞在过敏性哮喘和无症状的过敏者中表达的差异

目的:比较过敏性哮喘患者、无症状的过敏者和不过敏的健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量的差异及对特异性过敏原刺激的反应.方法:选取急性发作期的尘螨过敏性哮喘患者20例,无症状的尘螨过敏者24例,不过敏的健康人22例,分离外周血单个核细胞(PBMC)并进行CFSE染色,分别在不刺激和1mg/L尘螨抗...     

眼表过敏性疾病过敏原特点分析

目的:研究Ig E相关眼表过敏性疾病过敏原特点及临床意义。方法:收集并分析本地区2011-2015年376例眼表过敏性疾病患者病历资料,分析过敏原及相关因素特点。结果:眼表过敏性疾病中,季节性过敏性结膜炎成年人占比64.8%,春季花粉过敏者高达65.4%,多伴发过敏性鼻炎和过敏性皮炎;常年性过敏性结膜炎青少年占比86.1%,尘螨过敏者高达65.9%,多伴发过敏性鼻炎;春季卡他性结膜炎过敏原不显著;特应性结膜炎尘螨过敏者高达90.5%,且混合过敏者多,容易合并多重过敏性疾病。结论:不同眼表过敏性疾病过敏原特点对临床诊断分型、后期治疗有指导性意义。     

支气管哮喘与尘螨过敏的关系分析

目的探讨支气管哮喘患者尘螨过敏情况并分析它们的相互关系。方法对236例支气管哮喘患者和50例正常人进行皮肤点刺试验检测粉尘螨和屋尘螨过敏情况。结果哮喘患者尘螨过敏的总阳性率为66.95%,明显高于健康对照,差异有统计学意义(P<0.01),儿童组尘螨的阳性率高于成人组(P<0.05);158例对尘螨过敏的支气管哮喘患者中,133例(84.18%)对粉尘螨和屋尘螨均呈阳性反应,仅对粉尘螨或屋尘螨过敏者分别只有10.13%和5.70%,成人组与儿童组间比较差异无显著性差异(P>0.05)。结论尘螨是支气管哮喘重要的过敏原,占绝大多数的患者同时对粉尘螨和屋尘螨均呈阳性反应,加强居室环境尘螨控制,可减轻和减少支气管哮喘发作,尘螨检测亦可为特异性免疫治疗提供可靠依据。     

Analysis of relationship between asthma and allergy against Dust mite

目的 探讨支气管哮喘患者尘螨过敏情况并分析它们的相互关系.方法 对236例支气管哮喘患者和50例正常人进行皮肤点刺试验检测粉尘螨和屋尘螨过敏情况.结果 哮喘患者尘螨过敏的总阳性率为66.95%,明显高于健康对照,差异有统计学意义(P<0.01),儿童组尘螨的阳性率高于成人组(P<0.05);158例对尘螨过敏的支气管哮喘患者中,133例(84.18%)对粉尘螨和屋尘螨均呈阳性反应,仅对粉尘螨或屋尘螨过敏者分别只有10.13%和5.70%,成人组与儿童组间比较差异无显著性差异(P＞0.05).结论 尘螨是支气管哮喘重要的过敏原,占绝大多数的患者同时对粉尘螨和屋尘螨均呈阳性反应,加强居室环境尘螨控制,可减轻和减少支气管哮喘发作,尘螨检测亦可为特异性免疫治疗提供可靠依据.     

哮喘患儿外周血白细胞介素及其对白细胞介素调节作用

目的:探讨白细胞介素2、10(IL-2、10),一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在小儿哮喘发病机制中的作用。方法:采用双抗夹心酶联免吸附试验(ELISA)技术检测28例哮喘患儿血浆及外周血单个核细胞(PBMC)在植物血凝素(PHA)刺激下产生IL-10的水平,同时检测了NOI、L-2、和TNF-α的水平,并研究了重组人IL-10(rhIL-10)对PBMC体外诱生NOI、L-2、和TNF-α的调节作用。结果:(1)急性发作期哮喘患儿血浆及PBMC在PHA刺激下产生IL-10水平均比正常儿低(P<0.05);(2)急性发作期患儿血浆及PBMC在PHA刺激下产生NO水平均升高(P<0.05~0.01),而在缓解期恢复正常(P>0.05);(3)急性发作期哮喘患儿PBMC在PHA刺激下产生IL-2和TNF-α水平升高(P均<0.01);(4)急性发作期哮喘患儿PBMC在PHA刺激下产生IL-10水平与IL-2和TNF-α呈负相关(r=-0.319,P>0.05);(5)IL-10能明显抑制PHA刺激的哮喘患儿PBMC诱生NOI、L-2和TNF-α,呈剂量依赖关系。结论:哮喘发作时IL-10分泌及释放减少,NOI、L-2和TNF-α升高,rhIL-10对PHA刺激的哮喘患儿PBMC体外诱生NOI、L-2和TNF-α呈负相调节作用。     

屋尘螨过敏症母亲脐血中调节性T细胞数量上存在的缺陷

目的:探讨屋尘螨过敏症母亲脐血中CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T(Treg)细胞和CD4+ IL-10+调节性T(Treg)细胞是否存在数量上的缺陷.方法:收集7例患屋尘螨过敏症及14例无过敏症母亲的脐血,分离脐血单个核细胞(CBMC)后体外培养,分别用及不用天然屋尘螨抗原1(nDer pl)刺激,用流式细胞术检测刺激及不刺激时CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞及CD4+ IL-10+ Treg细胞占CD4+T细胞的比率.结果:不刺激时,过敏症母亲组CBMC中的CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞占CD4+T细胞的比率为(1.13±0.36)％,显著低于无过敏症母亲组的比率(3.11±1.13)％(P＜0.01).尘螨抗原刺激后,两组CD4+ CD25+ Foxp3Treg细胞比率均较不刺激时升高(P＜0.01),过敏症母亲组增加的比率为(0.67±0.25)％,低于无过敏症母亲组增加的比率(1.50±0.40)％(P＜0.01);不刺激时,过敏症母亲组CD4+IL-10+ Treg细胞比率的中位数为0.41％,显著低于无过敏症母亲组的1.04％(P＜0.01);尘螨刺激后,无过敏症组CD4+ IL-10+ Treg细胞比率2.26％较该组不刺激时比率1.04％升高(P＜0.05),显著高于过敏症母亲组的比率0.61％ (P＜0.01),但两组提高的幅度未见统计学差异(P＞0.05).结论:过敏症母亲脐血中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞及CD4+ IL-10+ Treg细胞在数量上存在缺陷.     

三伏灸对过敏性哮喘患者细胞因子分泌的影响

[目的]通过观察过敏性哮喘缓解期患者的临床症状、血清IgE(免疫球蛋白E)、外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液IL-4、IL-13水平的变化,研究三伏灸对过敏性哮喘患者免疫功能状态的影响和部分作用机制。[方法]选择过敏性哮喘缓解期患者29例随机平分为A组(传统法)、B组(改进法)、C组(非伏天灸)三组,并选10例健康者做对照,分别采用ELISA法测定血清IgE、IL-4、IL-13水平。[结果]临床疗效治疗后A组有效率为77.8%,B组有效率为90%,C组有效率为40%,A组与B组比较,组间比较无显著差异,A、B组与C组比较,差异显著(P0.05);治疗前各组患者的血清IgE、外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液IL-4、IL-13含量与正常对照组比较均具有显著性差异(P0.01);治疗后A组、B组IgE、、IL-4、IL-13均显著降低,与治疗前比较有显著差异(P0.05),C组则治疗前后差异不显著(P0.05),A组、B组IgE、IL-4、IL-13水平与治疗C组相比也降低,有显著差异(P0.05)。[结论]提示三伏灸对过敏性哮喘的作用优于非伏天灸,三伏灸法能抑制过敏性哮喘患者PBMC培养上清液中的IL-4、IL-13的分泌,降低血清总IgE的水平,从而阻断IgE介导的Ⅰ型超敏反应,这可能是三伏灸法治疗过敏性哮喘取效的主要机制之一。     

哮喘患者白细胞介素-10、γ-干扰素水平与IgE关系的研究

目的了解哮喘患者白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)水平与IgE生成的关系.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测30例哮喘患者和20例健康人外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中IL-10和IFN-γ的含量以及血浆中IL-10、IFN-γ和IgE的水平,并进行相关性研究.结果哮喘组PBMC培养上清液中IL-10与IFN-γ含量显著低于对照组(P<0.001,P<0.01).哮喘组血浆中IL-10、IFN-γ含量显著低于对照组(P<0.001,P<0.05),血浆IgE含量显著高于对照组(P<0.001).哮喘组患者血浆中IL-10、IFN-γ含量和IgE浓度呈负相关(r1=-0.31,r2=-0.50).结论IL-10、IFN-γ在哮喘患者IgE的产生过程中起抑制作用.     

过敏性鼻炎患者外周血调节性B细胞的变化

目的 研究过敏性鼻炎(AR)患者外周血调节性B细胞(regulafory B cell,Breg)的变化情况.方法 采集30例尘螨过敏的过敏性鼻炎患者(AR)及30例健康对照者(HC)的3 mL外周静脉血,采用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞(PBMC),应用流式细胞技术(FCM)检测分析AR与HC两组CD19+...     

不同浓度肽聚糖、脂多糖、聚肌胞苷酸对过敏性支气管哮喘患者嗜碱性粒细胞释放能力的作用

目的 研究不同浓度肽聚糖(PGN)、脂多糖(LPS)、聚肌胞苷酸(Poly I:C)对过敏性支气管哮喘患者嗜碱性粒细胞释放能力的作用,进而了解过敏性支气管哮喘患者嗜碱性粒细胞上Toll样受体(TLR)的活性.方法 分别应用不同质量浓度PGN、LPS、Poly I:C刺激过敏性支气管哮喘患者的外周血单个核细胞(PBMC),观察嗜碱性粒细胞脱颗粒情况,并与正常人作比较.同时检测尘螨刺激后嗜碱性粒细胞的脱颗粒程度,以分析嗜碱性粒细胞释放能力的改变与其表面IgE受体的关系.结果 100 mg/L PGN刺激过敏性支气管哮喘患者嗜碱性粒细胞的脱颗粒指数为(40.73±10.88)%,显著高于其刺激正常人嗜碱性粒细胞的(15.23±8.96)%(P>0.01),亦显著高于50 μg/L LPS刺激的(19.63±8.92)%和50 mg/L Poly I:C刺激的(22.50±7.89)%(P值均<0.01).PGN刺激嗜碱性粒细胞脱颗粒指数与粉尘螨刺激脱颗粒指数不相关(P>0.05).结论 PGN可增强过敏性支气管哮喘患者嗜碱性粒细胞的释放能力,嗜碱性粒细胞上存在相应的TLR活性受体.     

Effect of house dust mite immunotherapy on interleukin-10- secreting regulatory T cells in asthmatic children

Background Subcutaneous specific immunotherapy has been demonstrated to be capable of inducing T-cell regulatory response.Interleukin-10 （IL-10） plays a crucial role in inducing allergen-specific tolerance.However the reports of the changes of IL-10 in house dust mite （HDM）-specific immunotherapy were varied.The aim of this study was to evaluate the function of IL-10-secreting regulatory T cells in asthma children successfully treated with HDM immunotherapy.Methods Peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） were isolated from 27 patients following 1.5--2 years of HDM-specific immunotherapy （SIT, SIT group） and from 27 matched treated asthmatic children allergic to HDM （asthmagroup）.After 48 hours of in vitro stimulation with HDM extracts, IL-10-secreting regulatory T cells were measured by four colour flow cytometry.Sera were tested for allergen-specific IgG4 and IgE using the Immuno CAP 100 assay.Results PBMCs from children undergoing immunotherapy following HDM extracts stimuli produced significantly more IL-10 compared with the asthma group.The frequency of iTreg cells and aTreg cells increased in SIT group after HDM stimulation, while it was not affected in the asthma group.Among the iTreg cells and aTreg cells, the frequency of CD4＋CD25-Foxp3-IL-10＋ Treg cells increased the most which was 2 times higher than that in unstimulated cultures in SIT group.The levels of HDM-specific IgG4 of SIT group was significiently higher compared with asthma group, but there was no correlation of the levels of HDM-specific IgG4 and IL-10 secreting Treg cells.Conclusions HDM-specific immunotherapy can successfully upregulate the frequency of IL-10-secreting Treg cells.CD4＋CD25-Foxp3-IL-10＋ Treg cells may play a key role in inducing the immune tolerance in HDM-specific immunotherapy.     

屋尘螨过敏原DNA疫苗对哮喘模型小鼠Foxp3+调节性T细胞功能的影响

目的 观察编码屋尘螨主要过敏原Der p1和Der p2的质粒DNA疫苗对哮喘小鼠脾细胞Foxp3 调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)功能的影响.方法 以屋尘螨提取液复制哮喘模型后,将编码Der p1、Der p2的真核表达质粒pDs-Der p1、pCI-neo-Der p2等量混合接种小鼠后对小鼠进行再次激发.分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞比例.采用磁珠法分离CD4 CD25 T细胞,流式细胞仪检测其Foxp3基因的表达,并以IL-2进行刺激观察其增殖反应,测定其上清液中的IL-10、TGF-β含量.将分离的Treg细胞与哮喘小鼠CD4 CD25-T细胞共同培养,观察Treg细胞对CD4 CD25-T细胞增殖及IL-4、IL-5、IFN-γ的影响.结果 哮喘组小鼠脾脏CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞比例显著低于对照组,经DNA疫苗治疗后CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞显著增加.体外培养发现各组CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞增殖能力均显著低于CD4 CD25-T细胞,培养液上清中均未检测到IL-10和TGF-β存在.3组CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞均可显著抑制哮喘CD4 CD25-T细胞的增殖及IL-4、IL-5和IFN-γ的分泌,但在3组Treg细胞中,哮喘组Treg细胞作用显著低于其他两组.结论 Treg细胞可显著抑制哮喘CD4 CD25-T细胞的增殖及炎性介质的分泌,哮喘小鼠不仅出现CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞数量的减少,而且其功能也可能出现缺陷.DNA疫苗治疗可以诱导CD4 CD25 Foxp3 Treg细胞增加,并恢复其功能活性.     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~+T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A(CsA)是否能够抑制正常人CD4+T细胞产生白细胞介素22(IL-22)。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞(PBMCs),加入PMA+Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22+CD4+T细胞亚群(Th22);PMA+Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A(CsA)后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22+CD4+T细胞和IFN-γ+CD4+T细胞的比例,以及IL-22+CD4+T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4+T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4+T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4+T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4+T细胞产生IL-22。     

变应性鼻炎辅助性T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1的表达

目的 探讨人辅助性T细胞(helperT lymphocyte,Th)表达T细胞免疫球蛋白功能区和黏液素样功能区-1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)在变应性鼻炎(allergicrhinitis,AR)中的作用.方法 密度梯度离心分离20名健康人和20例AR患者外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,PBMC),免疫磁珠分选CD4+T细胞,CD4+CD45RA+T细胞,免疫荧光和流式细胞仪检测TIM-1阳性细胞.对比植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA,20μg/ml)非特异性刺激上述细胞后表达TIM-1阳性细胞的差异.标准变应原(屋尘螨,50000 SOU/ml)和内毒素(脂多糖,lipopolysaccharide,LPS,20ng/ml)特异性刺激树突状细胞(dendritic cells,DC),观察DC提呈抗原并诱导初始Th细胞表达TIM-1的特点.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中IL-4、IFN-γ的分泌.结果 AR患者组CD4+T细胞中TIM-1阳性CD4+T细胞9.48%4±1.51%,高于健康组3.12%±0.32%(P＜0.05);PHA刺激后两组表达TIM-1的CD4+T细胞均高于刺激前(P值均<0.05).DC提呈抗原刺激健康组初始Th细胞后,检测混合细胞液中表达TIM-1的细胞,标准变应原组10.81%±1.48%,高于LPS组6.07%±1.45%(P＜0.05).ELISA检测相应IL-4、IFN-γ的分泌,标准变应原组IL-4为(74.61±13.82)pg/ml、(25.31±7.23)pg/ml;LPS组分别为(28.57±3.36)pg/ml、(163.41±82.37)Pg/ml.结论 AR患者中表达TIM-1的Th细胞高于健康者,DC提呈抗原后可以促进其表达;TIM-1的表达有利于初始Th细胞向Th2分化,由此诱发以Th2细胞因子为主的免疫反应.     

辅助性T细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者外周血中辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）、白细胞介素－４（ＩＬ－４）、和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）的表达情况,以测定Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３细胞的百分率、探明Ｔｈ细胞各极化群体在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 将３６例 性ＨＢＶ感染者分２例,慢性ＨＢＶ感染组和中度慢性乙型肝炎组,每组１８例患者。正常对照组１２名。常规分离外周血单个核然佛波二脂     

人类免疫缺陷病毒-1感染者外周血单个核细胞体外培养的免疫学及病毒学特点

目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养过程中免疫学及病毒学的动态变化特点,并评价培养的细胞体系抗病毒活性。方法采集14例HIV感染者和6名健康人的PBMC,体外经多种细胞因子诱导培养,每3天观察细胞增殖情况,同时检测细胞表型、上清中细胞因子浓度和病毒载量。结果培养的健康人PBMC在(35±5)d最大增殖(61±8)倍;7例培养成功的HIV感染者PBMC在(21±6)d最大增殖(17±13)倍,另7例HIV感染者PBMC培养失败;同时发现HIV感染者PBMC体外培养最大增殖时间与其培养前外周血基础CD4/CD8比值呈明显正相关(P<0.05)。表型分析发现,培养的PBMC为优先CD8细胞增殖的异质T细胞群,主要由CD4、CD8及CD3CD56细胞组成;部分HIV感染者PBMC培养期间分泌白细胞介素(IL)1α、IL12、肿瘤坏死因子(TNF)α和IL10等细胞因子能力较高;而11/12例HIV感染者PBMC体外培养初期可扩增出大量病毒,但随着培养时间的延长,病毒载量逐渐降低甚至低于检测限。结论体外大量扩增基础CD4/CD8比值较高的HIV感染者外周血PBMC是可行的,扩增的细胞具备较强的Th1细胞免疫反应能力,为进一步开展艾滋病的免疫细胞治疗提供必要的实验数据。     

体外小鼠nuocyte细胞中IL-13的干预促进CD4+ T细胞向CD4+IL10+细胞的分化

 目的   探讨体外小鼠nuocyte细胞中IL-13的干预对CD4+IL10+细胞的分化的影响。方法   用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立小鼠变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型(n=6),正常组注射生理盐水(n=6)。计数AR小鼠的打喷嚏、挠鼻次数,分离、提纯并体外培养小鼠鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)中的nuocyte细胞;构建针对小鼠IL-13的shRNA,并用慢病毒将IL-13 shRNA转染体外培养的AR小鼠nuocyte细胞,分别检测转染前后培养基中nuocyte细胞在鼠重组(recombinant,rm)IL-33作用下分泌IL-13和IL-10的浓度;获取AR小鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)并分离出CD4+ T细胞进行体外培养,然后将体外培养的nuocyte细胞加入上述小鼠CD4+ T细胞培养基共培养,检测CD4+IL10+细胞所占CD4+ T细胞的百分比。结果   小鼠AR模型打喷嚏和挠鼻次数较正常小鼠显著增多,OVA诱导NALT来源的小鼠nuocyte细胞被鉴定为CD3CD4CD8CD19CD11bCD11cFcεR1(lineage)-ICOS+,AR小鼠的nuocyte细胞数较正常小鼠显著增多,携带有IL-13 shRNA的慢病毒成功转染到体外培养的nuocyte细胞。转染前经rmIL-33的刺激,培养基中IL-13和IL-10的浓度均升高,差异具有统计学意义;转染后培养基中IL-13的含量无明显增多,而IL-10含量明显增多,转染前后IL-13和IL-10的浓度差异具有统计学意义,IL-13浓度降低,IL-10浓度升高,而且转染后CD4+IL10+细胞占CD4+ T细胞的百分比也增加,差异具有统计学意义。结论   体外小鼠nuocyte细胞中IL-13的干预可能促进CD4+IL10+细胞的分化。