鱼藤素对人骨髓瘤细胞 RPMI-8226 增殖和凋亡的影响

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI-8226 细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3 (SRC-3) 的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节 SRC-3 的相互关系。方法 采用 MTT 法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI 双标法及 Hoechst 33258 染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR 法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞内 SRC-3 基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞 SRC-3 蛋白的影响和分布情况。结果 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,其抑制作用呈时间、 剂量依赖性,其作用 24 h 的 IC５０为 (54.55±0.40) nmol/L。此外,鱼藤素具有较强的诱导 RPMI-8226 细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)% 的 RPMI-8226 细胞发生凋亡;当药物浓度达到 100 nmol/L 时,总凋亡率达 (63.57±1.36)%。在 RPMI-8226 细胞中 SRC-3 高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3 的 mRNA 和蛋白表达水平明显下降。结论 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,并诱导其凋亡。而鱼藤素诱导的 SRC-3 表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用。     

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的体外抗癌作用

目的研究白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对骨髓瘤细胞系RPMI-8226和KM3增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞凋亡的影响;PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对RPMI-8226、KM3细胞DNA分布的影响;Western-blotting方法检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞Bcl-2、Bax、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2蛋白表达的影响。结果白藜芦醇对RPMI-8226和KM3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈时效和量效关系。25～100μmol/L白藜芦醇作用24h可诱导RPMI-8226细胞凋亡,100μmol/L作用24h时KM3细胞凋亡率达(26.5±2.7)%。白藜芦醇处理组RPMI-8226及KM3细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于S期和G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2的表达,并可上调促凋亡蛋白Bax的表达,但白藜芦醇对各蛋白作用的动力学不同。结论白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与调节Bcl-2和IAP家族蛋白的表达有关。     

CD166对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、凋亡及自噬的影响实验研究

目的:探究CD166对多发性骨髓瘤(MM)RPMI-8226细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法:选取MM细胞RPMI-8226,设计并合成靶向CD166的短发夹RNA(shRNA)和阴性对照(NC)进行细胞转染，分为sh-CD166-1组、sh-CD166-2组和NC组。采用MTT法和平板克隆实验观察CD166对RPMI-8226细胞增殖能力和平板克隆形成能力的影响。利用流式细胞仪检测CD166对RPMI-8226细胞凋亡的影响。采用自噬实验观察CD166对RPMI-8226细胞自噬的影响。此外，将BALB/c裸鼠随机分为NC组和sh-CD166组，通过皮下移植瘤模型评估CD166对RPMI-8226细胞体内成瘤能力的影响。结果:sh-CD166转染后，显著抑制RPMI-8226细胞的增殖能力和平板克隆形成能力(均P<0.05)。与NC组比较，sh-CD166-1组和sh-CD166-2组细胞凋亡率升高(均P<0.05),但sh-CD166-1组和sh-CD166-2组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与NC组比较，sh-CD166组细胞中自噬小体表达量明显减少(...     

冬凌草甲素协同马法兰对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察冬凌草甲素（oridonin）和马法兰( melphalan)单药及联合用药对人骨髓瘤RPMI-8226细胞生长、凋亡和细胞周期的影响及二者的协同作用,阐明药物联合应用对骨髓瘤细胞的毒性增强作用。方法: 本实验共设4个RPMI-8226细胞处理组,即空白对照组（未加任何药物）、冬凌草甲素（10 μmol/L）组、马法兰（30 μmol/L）组和联合（冬凌草甲素 10 μmol/L + 马法兰 30 μmol/L）组。MTT法检测各用药组作用不同时间后RPMI-8226细胞的增殖抑制率,采用两药相互作用指数（CDI）评价联合用药性质;Annexin-Ⅴ/PI双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测药物作用前后细胞周期分布。结果:与空白对照组比较,冬凌草甲素组、马法兰组和联合组RPMI-8226细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01),均具有时间-效应依赖性,联合组各时间点细胞增殖抑制率明显高于单药组(P<0.01)。各时间点CDI值均小于1,即冬凌草甲素可协同提高马法兰的细胞毒作用。冬凌草甲素和马法兰单独处理RPMI-8226细胞36 h,细胞凋亡率分别为15.01%±0.47％ 和20.03%±1.30％,而联合组细胞凋亡率为43.06%±1.96％,与单药组比较显著升高(P<0.01)。流式细胞术DNA含量分析,各药物组RPMI-8226细胞主要阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少,除冬凌草甲素组S期细胞比例外,其余药物组各期细胞比例与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合组与单药组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论: 冬凌草甲素联合马法兰通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制骨髓瘤细胞的增殖,其作用具有协同性。     

黄芩素对多发性骨髓瘤细胞系凋亡及Cereblon基因和蛋白表达的影响

目的 观察黄芩素对多发性骨髓瘤(MM)细胞系凋亡及Cereblon(CRBN)基因和蛋白表达的影响,探讨CRBN在黄芩素诱导MM细胞凋亡中的作用.方法 应用Annexin-V染色,流式细胞术分析黄芩素和黄芩素联合来那度胺对MM细胞系凋亡的作用;应用RT-PCR技术检测MM细胞系CRBN基因的表达;应用蛋白印迹检测MM细胞系CRBN蛋白的表达,并设置空白对照.结果 黄芩素能够诱导U266细胞凋亡,在黄芩素浓度为40μmol/L时,随着处理细胞时间的延长(24、48、72 h),凋亡率分别为6.11%、11.9%、16.7%;在处理RPMI 8226细胞72 h后,与单用黄芩素或来那度胺相比,黄芩素(40μmol/L)与来那度胺(40μmol/L)联合应用,对MM细胞系的増殖具有更强的抑制作用,来那度胺诱导的细胞凋亡率为4.27%,黄芩素诱导的细胞凋亡率为15.9%,两者联合应用,细胞凋亡率为57.5%;RT-PCR检测结果显示:黄芩素能诱导U266细胞CRBN基因表达,且呈浓度和时间依赖性,在24 h时,与对照组相比,黄芩素浓度分别为10、20和40μmol/L时,CRBN基因的上调倍数分别为(2.246±0.068)、(2.399±0.178)和(3.591±0.061)(P值分别为0.003、0.009和0.001);在浓度为40μmol/L时,与对照组相比,黄芩素在不同的作用时间(6、12和24 h),诱导CRBN上调倍数分别为(2.372±0.079)、(2.494±0.189)和(3.228±0.151)倍(P值分别为0.002、0.008和0.002);蛋白印迹结果表明,黄芩素还能诱导U266和RPMI 8226两细胞系CRBN蛋白的表达.结论 黄芩素通过上调CRBN的基因和蛋白表达,増强MM细胞对来那度胺诱导凋亡的敏感性,为黄芩素将来应用于临床克服MM患者对来那度胺的耐药性提供依据.     

汉黄芩素对多发性骨髓瘤细胞周期及P-Wee1和P-Akt蛋白表达的影响

目的探讨汉黄芩素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用及其可能的机制。方法以不同浓度的汉黄芩素(5～100μg/ml)作用于RPMI8226细胞24h,使用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞的增殖活性和细胞周期的变化;运用Western-blot法检测汉黄芩素作用前后细胞内P-Wee1、P-Akt蛋白表达的变化。结果汉黄芩素对RPMI8226细胞具有增殖抑制作用,并有剂量依赖性,IC50为43.71μg/ml;汉黄芩素浓度为50μg/ml时,用药组的G2/M%为(25.4333±2.35433)%,明显高于溶剂对照组的(6.8333±1.52753)%;Western-blot检测结果显示,用药组汉黄芩素浓度≥50μg/ml时,与对照组相比,P-Wee1、P-Akt蛋白表达明显减少。结论汉黄芩素能明显抑制RPMI8226细胞的增殖,可能是通过Akt/Wee1途径使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,从而发挥增殖抑制作用。     

甲基化修饰致PCDH10基因在多发性骨髓瘤中沉默

目的研究PCDH10基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者及细胞系KM3、RPMI-8226中的甲基化状态,分析甲基化对其沉默的影响。方法常规骨髓穿刺术获取MM患者骨髓样本,培养骨髓瘤细胞系KM3、RPMI-8226,以增生性骨髓象骨髓样本作为对照。RT-PCR检测其中PCDH10基因表达水平,甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)法检测PCDH10基因甲基化状态,通过5-氮杂-2’-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂[5-aza-2’-deoxycytidine(Aza)and trichostatin A(TSA),A+T]处理MM细胞系,检测药物处理前后PCDH10甲基化状态及表达水平。结果 PCDH10基因在正常人群中表达,但在MM患者骨髓及细胞系中广泛低表达,且77.27%(34/44)的MM患者PCDH10呈甲基化状态。PCDH10基因可经A+T试验逆转甲基化状态并恢复表达。结论 DNA甲基化可能在多发性骨髓瘤的PCDH10基因沉默中发挥作用,从而参与骨髓瘤的发生。     

黄芩素对喉癌细胞周期、凋亡率及细胞核DNA的影响

目的:探索黄芩素(baicalein,BAI)对喉癌细胞周期、凋亡率及细胞核DNA的影响。方法:体外培养的Hep-2细胞,加入不同浓度的BAI,药物作用后,用MTT法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测对细胞周期及细胞凋亡率的影响;用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测对凋亡细胞核DNA的影响。结果:MTT法检测到BAI(10、20、40、80μmol/L)可明显抑制Hep-2细胞的增殖,呈时间-剂量依赖性(P0.05);FCM法检测到BAI(40μmol/L)可诱使细胞阻滞在S期,凋亡率升高(P0.05);BAI(40、80μmol/L)可诱使细胞核DNA形成"梯状"条带;呈时间-剂量依赖性(P0.05)。结论:一定浓度的BAI,可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞阻滞在S期,细胞凋亡率升高,晚期凋亡细胞核DNA断裂形成DNA Ladder。     

Methylation induces protocadherin-10 silence in multiple myeloma

目的 研究PCDH10基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者及细胞系KM3、RPMI-8226中的甲基化状态,分析甲基化对其沉默的影响.方法 常规骨髓穿刺术获取MM患者骨髓样本,培养骨髓瘤细胞系KM3、RPMI-8226,以增生性骨髓象骨髓样本作为对照.RT-PCR检测其中PCDH10基因表达水平,甲基化特异性PCR( methylation-sensitive PCR,MSP)法检测PCDH10基因甲基化状态,通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂[5-aza-2'-deoxycytidiue (Aza) and trichostatin A (TSA),A+T]处理MM细胞系,检测药物处理前后PCDH10甲基化状态及表达水平.结果 PCDH10基因在正常人群中表达,但在MM患者骨髓及细胞系中广泛低表达,且77.27％ (34/44)的MM患者PCDH10呈甲基化状态.PCDH10基因可经A+T试验逆转甲基化状态并恢复表达.结论 DNA甲基化可能在多发性骨髓瘤的PCDH10基因沉默中发挥作用,从而参与骨髓瘤的发生.     

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖的实验研究

目的 研究β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 用噻唑蓝(MTT)法检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖的影响;Annexin V/ PI双标流式术检测β-榄香烯对骨髓瘤RPMI-8226细胞周期、细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI 双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化.结果 β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性.β-榄香烯处理后,与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、 G2/M细胞比例降低.β-榄香烯作用48 h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增.结论 β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关.     

Triptolide-induced apoptosis by inactivating nuclear factor-kappa B apoptotic pathway in multiple myeloma <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

The effect of triptolide on proliferation and apoptosis of human multiple myeloma RPMI-8226 cells in vitro,as well as the roles of nuclear factor-kappa B(NF-κB) and IκBα was investigated.The effect of tritptolide on the growth of RPMI-8226 cells was studied by MTT assay.Apoptosis was detected by Hoechest 33258 staining and Annexin V/PI double staining assay.The expression of NF-κB and IκBα was observed by Western blot and confocal microscopy.The results showed that triptolide inactivated NF-κB apoptotic pathway in human multiple myeloma RPMI-8226 cells.Triptolide at nM range induced proliferation inhibition in a dose-and time-dependent manner and apoptosis in a dose-dependent fashion in RPMI-8226 cells.Besides,we observed the inhibition of NF-κB /p65 in the nuclear fraction was correlated with the increase in the protein expression of IκBα in the cytosol.These results suggested that triptolide might exhibit its strong anti-tumor effects via inactivation of NF-κB/p65 and IκBα.     

冬凌草甲素对多发性骨髓瘤细胞细胞周期和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素(oridonin,Ori)对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及其涉及机制。方法利用MTT比色法检测Ori对细胞增殖活性的影响;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot技术检测p65核蛋白水平。结果 Ori能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性;能同时引起细胞G2/M细胞周期阻滞、细胞凋亡和p65核蛋白水平下降;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)抑制核因子κB(NF-κB)活性后进一步促进了Ori所致的细胞G2/M细胞周期阻滞和凋亡。结论 Ori能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,引起G2/M细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,该效应与NF-κB活性抑制相关。     

短发夹RNA靶向抑制suvivin基因对人胶质瘤U251细胞凋亡和细胞周期的影响

目的: 构建表达靶向抑制survivin基因的表达短发夹结构 (shRNA)的RNA干扰载体,导入人胶质瘤细胞U251中,研究靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导以及细胞周期阻滞作用. 方法: 在survivin全长序列中选取设计3条含19个核苷酸(19nt)靶序列两条反向重复序列,中间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,分步酶切连接,构建出含有3条shRNA模板且能独立编码shRNA的重组干扰载体pGenesil-1/survivin; 采用Metafectene转染试剂将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251;采用荧光定量PCR以及Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Annexin-V/PI双色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞. 结果:实时荧光定量PCR以及Western blotting检测显示,survivin基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;流式细胞仪检测分析显示,survivin基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞. 结论: 靶向survivin基因的重组siRNA干扰载体pGenesi-l/survivin介导的RNAi显著靶向抑制了survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达, 并明显地诱导了U251细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.     

基于PI3K/AKT/mTOR探索硼替佐米对多发性骨髓瘤侧群细胞的作用机制

目的 探讨26S蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226和骨髓瘤侧群(side population,SP)细胞的作用机制及其耐药性。 方法 在RPMI8226和SP细胞增殖以及生长周期和凋亡差异性研究基础上,采用Western blotting方法检测硼替佐米对2种细胞内信号通路PI3K/AKT/mTOR磷酸化水平的影响;通过硼替佐米耐药性研究,开展RPMI8226和SP细胞对硼替佐米耐药机制的探索。 结果 SP细胞48 h相对细胞活力(3.62±0.28)显著高于RPMI8226细胞(2.81±0.24,P=0.028);克隆形成能力结果显示SP细胞显著强于RPMI8226细胞(P<0.05)。流式细胞术检测显示硼替佐米增加了2种细胞S期、降低G₂/M期,对RPMI8226的促凋亡率(51.23±5.35)显著高于SP细胞凋亡率(29.62±2.61,P=0.008)。Western blotting结果显示硼替佐米显著降低RPMI8226和SP细胞AKT、mTOR及4E-RP1磷酸化水平;耐药性结果显示SP细胞耐药相关蛋白P-gp、Caveolin-1(Cav-1)、Fatty acid synthase(FASN)及CYP3A4表达显著高于RPMI8226细胞。 结论 硼替佐米主要通过细胞凋亡和降低PI3K/AKT/mTOR信号蛋白磷酸化水平,发挥对RPMI8226和SP细胞的抑制作用;通过P-gp、Cav-1、FASN以及CYP3A4耐药蛋白发挥对多发性骨髓瘤的耐药性。      

U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法：台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymer-ase,PARP]裂解情况.结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论：MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡.     

槐耳浸膏对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨槐耳浸膏对骨髓瘤细胞株PRMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法取PRMI8226细胞与1.5mg/ml、3mg/ml、5mg/ml的不同浓度槐耳浸膏在体外孵育,分别在24h、36h、和48h时用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,并用流式细胞术（FCM）检测早期细胞凋亡情况。结果槐耳浸膏可抑制PRMI8226细胞增殖,不同浓度的槐耳浸膏对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制效果不同,以5mg/ml抑制增殖效果最好。且浓度为5.0mg/ml的金克诱导多发性骨髓瘤细胞48h抑制率达到高峰84%。FCM检测表明槐耳浸膏可诱导PRMI8226细胞早期凋亡,用5.0mg/ml槐耳浸膏处理48h后,可引起25.9%的PRMI8226细胞凋亡。这两种作用均随槐耳浸膏浓度和作用时间的延长而增强。结论槐耳浸膏可在体外抑制PRMI8226细胞增殖,并促进其凋亡。     

尿多酸肽(CDA-2)诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究

[目的]观察尿多酸肽(CDA-2)对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226抑制增殖和凋亡作用。[方法]应用MTT法,检测CDA-2对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响。通过Hochest33258染色、流式细胞仪(AnnexinV和PI双染色)检测细胞凋亡。[结果]CDA-2明显抑制RPM18226细胞的增殖。CDA-2作用RPM18226细胞增殖24h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.64mg/g。采用Hochest33258染色,荧光显微镜下观察CDA-2以2mg/g及4mg/g终浓度作用于RPM1822624h后细胞形态改变,可见明显的凋亡小体出现。AnnexinV-PI双标记法流式细胞仪分析结果显示,RPMI8226细胞2mg/gCDA-2作用6、12、24h后,早期凋亡细胞百分数分别为5.43%、12.02%、29.07%,明显高于空白对照组4.88%。[结论]CDA-2对MM细胞株RP-MI8226有生长抑制作用,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。     

p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用

目的:观察漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的现象,研究p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用究。方法：用不同浓度的漆树黄酮（50μmol•L-1、100μmol•L-1、200μmol•L-1）处理HepG2细胞24h和100μmol•L-1漆树黄酮处理HepG2细胞不同时间（12h、24h、48h）,流式细胞术和免疫荧光法观察漆树黄酮作用HepG2细胞的凋亡情况; Westem blot法检测漆树黄酮对HepG2细胞p53、Caspase-3 和Caspase-8蛋白的表达情况。结果:漆树黄酮能诱导HepG2细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性; 漆树黄酮可增加p53蛋白的表达,降解Caspase-3 、Caspase-8酶原,提高Caspase-3 、Caspase-8活性。p53蛋白的上调与凋亡的发生呈正相关,Caspase-3 、Caspase-8酶原的降解与与凋亡的发生呈负相关。结论:漆树黄酮可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调p53表达,活化Caspase-3、 Caspase-8有关。     

硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SALL4基因表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1细胞生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。(2)显微镜下观察细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。(3)电镜下观察可见凋亡小体。(4)Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。(5)流式细胞仪分析细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(...