阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响

目的:探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导下原代肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制.方法:原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24 h、48 h收集细胞.用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;免疫细胞化学检测p53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达.结果:48 h内,高糖促进GMC增殖并上调p38MAPK蛋白的表达,抑制p53的表达,SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强.结论:SF可能是通过抑制p38MAPK通路,促进p53的合成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖.     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下系膜细胞(GMC)增殖及细胞上清液中层粘连蛋白(LN)、Ⅳ胶原纤维(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的大鼠肾小球系膜细胞在各种处理因素的作用下上清液中LN、Ⅳ型胶原及FN的表达情况;②利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时促进GMC分泌FN、LN和ColⅣ(P<0.05或P<0.01)。而当归补血汤能抑制GMC增殖及GMC分泌FN、LN和ColⅣ,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖、GMC分泌FN、LN和ColⅣ的能力也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖、细胞外基质(ECM)蛋白分泌,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖、及其分泌FN、LN和ColⅣ,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖及分泌ECM,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

HBV X蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路诱导大鼠肾系膜细胞增殖

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBV X)通过激活PI3K/Akt信号通路诱导大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用机制.方法 通过PCR扩增HBVX基因,将目的基因HBVX与空载体PCI-neo连接,采用脂质体转染法转染大鼠GMC,LY294002阻断PI3K/Akt信号通路,MTT法测定各组细胞不同时间点的增殖情况,Western blotting检测转染后大鼠系膜细胞中HBV X、Akt、p-Akt和β-actin的表达情况.结果 PCI-neo-X质粒转染大鼠GMC后,于36 h和48 h时间点可稳定表达HBx,MTT法测得GMC+PCI-neo-X组细胞在36 h和48 h时间点明显增殖,与GMC+pCI-neo组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05);GMC+PCI-neo-X组中加入抑制剂LY294002后,与未加抑制剂组相比细胞增殖受到明显抑制,Western blotting测得其Akt磷酸化程度显著减弱(P＜0.05).结论 HBVX蛋白能诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖,PI3K/Akt信号通路是HBV X蛋白调节GMC增殖的重要信号通路之一.     

脂联素干预对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达色素上皮衍生因子的影响

目的:探讨脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法:体外常规培养大鼠系膜细胞,传代后分组:对照组(培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L) 、高糖A 、B组(培养液葡萄糖浓度分别为15,30 mmol/L)、脂联素A、B、C、D组 (30 mmol/L葡萄糖培养液+脂联素,使培养液脂联素浓度分别为2.5,5,10,20 mg/L),分别作用24 h后,RT-PCR法测定各组细胞PEDF mRNA的表达水平;ELISA法测定各组上清液中PEDF蛋白的含量.结果:(1)与对照组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达显著降低(P<0.05);(2)脂联素干预各组高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达恢复(P<0.01).结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,脂联素干预可逆转这一改变.     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC,采用MTT法检测细胞增殖,RT PCR法检测GMC表面β1整合素的表达,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况.结果高糖抑制GMC的增殖,促进β1整合素的表达,且与FN和LM的分泌呈显著正相关,并具有浓度依赖性.结论高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达,从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌.     

糖肾颗粒对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]研究糖肾颗粒对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells,GMC)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)防治中的意义.[方法]将常规体外培养的GMC分为正常对照组、高糖组、糖肾颗粒高、中、低剂量组及贝那普利组,分别进行相应处理后收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同作用时间(24h、48h、72h)下细胞增殖程度.[结果]高糖(30.0mmol· L-1)能明显刺激体外培养的GMC增殖.糖肾颗粒及贝那普利两种药物含药血清对高糖刺激下的GMC增殖有抑制作用,其中糖肾颗粒血清对GMC的抑制作用优于贝那普利血清,且呈一定的时间、剂量依赖性关系.[结论]高糖可促进GMC增殖,糖肾颗粒能明显抑制高糖条件下GMC增殖,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展.     

波动和恒定的葡萄糖浓度对大鼠肾小球系膜细胞TRPC6和TRPC1表达的影响

目的 研究波动和恒定的葡萄糖浓度对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)瞬时受体势TRPC6和TRPC1表达的影响,探讨糖尿病肾病的发病机制.方法 将体外培养的各组系膜细胞分别在波动和恒定葡萄糖浓度中分别培养24、48、72 h后,进行细胞学形态结构观察,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR检测细胞TRPC6和TRPC1特异性条带灰度的表达情况.结果 波动血糖组在TRPC6基因的表达较恒定高糖组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 波动葡萄糖浓度对GMC的损伤以及促进细胞凋亡方面较恒定葡糖糖浓度更严重,是导致糖尿病肾病发生和发展的原因之一.     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症反应和增殖的影响

目的:观察霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及增殖的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖加不同浓度霉酚酸组培养,测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及神经生长因子(NGF)的表达,及细胞增殖的情况。结果:①低浓度(0.1μmol/L)霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达有显著的抑制作用,但霉酚酸浓度的成倍增加(0.1-10μmol/L)对于以上效果并无明显的加强作用。②霉酚酸有浓度依赖性抑制高糖所致的系膜细胞增殖的作用。结论:体外霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎性因子ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达和高增殖有显著的抑制作用。     

小白菊内酯抑制高糖刺激的人肾小球系膜细胞炎症因子表达的研究

目的:观察小白菊内酯(parthenolide,PTN)对人肾小球系膜细胞炎症因子表达的抑制作用.方法:①以MTS方法检测PTN和厚朴酚(0~50μmol/L)在人肾小球系膜细胞中的安全浓度.②将系膜细胞与高糖(50mmol/L)及不同浓度小白菊内酯(0~50μmol/L)共同培养24h,24h后ELISA法检测培养上清液中TNF-α、TGF-β1、MIP-1α与MCP-1蛋白的表达水平.结果:①0~50μmol/L的PTN浓度未对系膜细胞的增殖活力产生影响,但更高浓度的PTN可明显降低系膜细胞的增殖活力.②50mmol/L高糖可显著增加炎症因子TNF-α、TGF-β1、MIP-1α及MCP-1的蛋白水平.PTN呈剂量依赖性地抑制高糖刺激的炎症反应作用.结论:PTN能有效抑制高糖刺激后人肾小球系膜细胞炎症因子的表达,从而削弱高糖所致的系膜细胞炎症反应,为进一步阐明PTN改善DN的作用机制提供了实验依据.     

地骨皮活性成分对高糖致肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的?观察地骨皮中有效成分对高糖刺激的肾小球系膜细胞的增殖以及细胞外基质分泌的影响,研究其对糖尿病肾病的保护机制。方法?体外培养肾小球系膜细胞,分为高糖模型组（葡萄糖浓度为30?mmol/L）,空白对照组（葡萄糖浓度为5.5?mmol/L）,甜菜碱、山奈酚5个浓度剂量组（0.01、0.1、1、10、100?μmol/L）,用MTT法观察系膜细胞增殖情况,ELISA法观察细胞外基质分泌情况。结果?与高糖模型组比较,不同剂量甜菜碱组和山奈酚组,对高糖致肾小球系膜细胞增殖有不同程度的抑制。甜菜碱、山奈酚均能抑制细胞外基质的分泌,与高糖模型组比较有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论?地骨皮中有效成分甜菜碱和山奈酚均具有抑制高糖刺激下系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的作用,推测地骨皮中有效成分具有治疗糖尿病肾病的作用。      

高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞AMPK表达及活性的影响

 目的 观察高糖环境下肾小球系膜细胞AMP活化蛋白激酶（AMPK）表达和活性的变化及这种变化与系膜细胞增殖的关系。  方法 实验分4组：对照组（糖浓度5.6mmol/L）,高糖组（22.0mmol/L）,低浓度5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷（AICAR）组（0.5mmol/L AICAR+高糖）,高浓度AICAR组（1.0mmol/L AICAR+高糖）。观察24h后,应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR法测定AMPKα1、α2亚单位mRNA水平,Westernblot法测定总AMPKα蛋白及磷酸化AMPKα蛋白水平。  结果 与对照组比较,高糖组细胞增殖趋势明显（P＜0.01）,且S期的细胞百分数增加（P＜0.01）;RT-PCR显示,高糖组AMPKα1、α2亚单位的mRNA水平低于对照组;总AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平亦较低;特异性AMPK激活剂AICAR可抑制高糖诱导的细胞增殖（P＜0.01）,使S期的细胞百分数下降,并能增强AMPKα1、α2亚单位的mRNA表达水平及总AMPKα蛋白水平和磷酸化AMPKα蛋白水平。 结论  高糖环境下AMPKα1、α2 mRNA表达水平低下,AMPK蛋白的表达及活性降低;高糖诱导的系膜细胞增殖与AMPK表达及活性降低有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖培养的系膜细胞糖原合成酶激酶-3β和细胞外基质合成的影响

目的观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及细胞外基质成分（ECM）的影响及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的干预效果。方法以大鼠GMCs为实验对象,培养48h后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）测定GMCs增殖情况,Western blot法测定GSK-3β蛋白表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测高糖条件下细胞培养液中细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果高糖明显诱导GMCs增殖并抑制GSK-3β磷酸化,EGCG和GSK-3β特异性的抑制剂TDZD-8均能抑制高糖诱导的细胞增生,并增加GSK-3β磷酸化水平。高糖环境下系膜细胞分泌的FN、ColⅣ及LN明显增加（P〈0.05）,EGCG能抑制上述作用。结论EGCG通过GSK-3β信号通路抑制高糖诱导的GMCs增殖,并能抑制GMCs细胞外基质的合成,从而延缓糖尿病肾小球肥大和肾小球硬化。     

Effects of rosiglitazone on the expression of beta1, integrin and ICAM-1 in high glucose-induced rat glomerular mesangial cells]

OBJECTIVE: To observe the effects of PPARgamma activators thiazolidinediones (Rosiglitazone) on the expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and beta1 integrin in high glucose-induced rat glomerular mesangial cells (GMC) in order to elucidate the relationship between PPARgamma and adhesion molecules. METHODS: Rat HBZY-1 GMCs were cultured in vitro and divided into 9 groups: Normal Glucose group (N), High Glucose group (H), Mannitiol group (M), Normal and High Glucose plus 1, 5, 10 micromol/L Rosiglitazone. Every group was treated for 24 hours. The expression of ICAM-1 was measured by immunohistochemistry, the expression of beta1 integrin by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry. RESULTS: It was found that high glucose can significantly increase the expression of ICAM-1 and beta1 integrin in GMCs, which is independent of the osmotic pressure. Rosiglitazone can inhibit the expression of ICAM-1 and beta1 integrin in normal and high glucose treated GMCs, and the inhibition is stronger in high glucose treated-group, which is in a dose-dependent manner. The expression of beta1 integrin is positively correlated with ICAM-1. CONCLUSION: Adhesion molecules involves in the pathogenesis of diabetic nephropathy (DN). PPARgamma activators-Rosiglitazone may exert effect on mesangial expansion and glomerulosclerosis in DN through the inhibition of expressions of adhesion molecules induced by high glucose.     

EPA、DHA对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

摘要：目的观察二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对正常及在脂多糖(LPS)诱导下的肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和凋亡的影响。方法EPA和DHA各设两个终浓度(10μmol／L和100μmol／L),LPS终浓度为10μg／mL,培养时间为24、48和72h,采用MTT法测定细胞增殖;EPA和DHA终浓度为100μmol／L,培养48h后,采用双染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果EPA和DHA对正常GMCs无明显影响;对LPS诱导的GMCs增殖有明显抑制作用(P＜0.01),在同等浓度下,DHA的作用强于EPA(P＜0.01);EPA、DHA可明显促进GMCs凋亡。结论EPA和DHA明显抑制LPS诱导的GMCs增殖并促进其凋亡。     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

精甘天三肽对肾小球系膜细胞FAK及HA表达的影响

目的 观察精-甘-天(RGD)三肽对肾小球系膜细胞(GMC)增殖、粘着斑激酶(FAK)和透明质酸(HA)表达的影响。方法 采用RGD体外诱导培养大鼠GMC,采用MTT法测定细胞增殖、免疫组织化学方法测定FAK表达、放射免疫法测定HA含量。结果 RGD处理后,细胞由梭形变为圆形或卵圆形,并出现脱壁、悬浮。与正常对照组相比,RGD能降低系膜细胞的增殖;RGD 1mmol／L作用24h分别导致FAK表达平均灰度值降低3．10％,HA含量下降5．64％;4mmol／L作用8h及24h分别导致FAK表达平均灰度值降低6．50％和15．95％,HA含量下降6．37％和18．43％。RSD对细胞增殖、FAK及HA表达无影响。结论 RGD肽可使细胞粘附降低,导致增殖力下降,ECM成分分泌减少。     

阿魏酸钠抑制高糖诱导系膜细胞表达PAI-1和p38MAPK

目的：观察阿魏酸钠（SF）对高糖诱导系膜细胞（GMC）表达PAI-1蛋白和细胞信号转导分子p38MAPK的影响。方法：原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24h、48h收集细胞。用免疫细胞化学检测各组细胞p38MAPK的表达,流式细胞术检测PAI-1蛋白。结果：48h内,高糖促进PAI-1和p38MAPK蛋白的表达,而SF能明届抑制高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加和作用时间的延长而加强。结论：SF能拈抗高糖诱导的GMC表达PAI-1增多和抑制p38MAPK信号通路     

康宁克通A对大鼠肾小球系膜细胞增生及单核细胞趋化蛋白—1表达的作用

目的：探讨康宁克通A（TA）抑制大鼠肾小球系膜细胞（GMCs)增生及单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）的表达影响及机制。方法：在体外培养的大鼠GCMs株中加入脂多糖（LPS）后,再分别加入不同浓度的TA,共设3组：①GMC组,②LPS组,即GMCs LPS,③TA组,即GMCs LPS TA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）掺入法,于24h,48h观察3组中GMCs增生水平,选择药物的最佳GMCs增生抑制浓度及时间段。采用免疫组织化学方法观察3组GMCs涂片中MCP－1及核转录因子－κB(NF-κB)的表达,采用ELISA方法观察其培养的上清液中MCP－1的浓度。结果：①TA组GMCs增生水平明显低于LPS组及GMC组（均P＜0.01)。②TA组GMCs中MCP－1的表达明显低于LPS组和GMC组（均P＜0.01)。③TA组GMCs中NF－κB表达明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。④TA组GMCs培养上清中MCP－1浓度明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。结论：TA可能系通过抑制GMCs中NF－κB的激活而抑制大鼠GMCs增生,下调GMCs中MCP－1的异常表达及分泌。     

牛蒡子苷元对高糖刺激大鼠系膜细胞转化生长因子β1表达的影响

目的 观察牛蒡子苷元（ARC-G）对高糖刺激大鼠系膜细胞（GMCs）转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 用葡萄糖（30 mmol/L）刺激大鼠GMCs,经ARC-G（30 μmol/L、3 μmol/L）培养48 h后,采用实时定量PCR方法检测TGF-β1 mRNA的表达.结果 葡萄糖刺激可使GMCs TGF-β1 mRNA的表达增加;经ARC-G处理后,TGF-β1 mRNA的表达下降.结论 ARC-G可以通过抑制GMCs TGF-β1的表达,对损伤的GMCs起保护作用.