肾缺血-再灌注损伤大鼠SDF-1、ICAM-1表达与肾小管坏死评分的相关性研究

目的探讨肾缺血-再灌注损伤(IRI)大鼠基质细胞衍生因子(SDF)-1、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)与肾小管坏死评分的相关性。方法将60只SD大鼠随机分成手术组、假手术组两组,每组各30只。根据手术后检测时间不同,每组再分为6个不同时段的亚组(1、6、12、24、48、72 h组),每个亚组有5只大鼠。手术组建立大鼠肾IRI模型,假手术组大鼠仅予游离双侧肾动脉后缝合切口。检测各个时间点肾功能、肾小管坏死评分及肾脏组织SDF-1、ICAM-1表达变化。对手术组大鼠肾组织SDF-1、ICAM-1表达与肾功能和肾小管坏死评分进行Pearson直线相关分析。结果手术组术后血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)较术前及相应时间段假手术亚组明显升高(均为P0.05),且于术后12 h显著升高,高峰期在术后48 h。手术组肾小管坏死评分随时间的延长逐渐增高(均为P0.05);肾小管坏死评分最高在手术48 h组(P0.05)。与手术1 h组比较,手术6 h组大鼠肾组织SDF-1、ICAM-1表达开始明显增多(均为P0.05);手术后48 h达高峰,于手术后72 h开始下降。手术组的肾组织SDF-1、ICAM-1表达与术后各时间段BUN、Scr、肾小管坏死评分呈正相关(r=0.614、0.662、0.751;0.640、0.703、0.785;均为P0.05)。结论当大鼠肾组织发生IRI时,SDF-1、ICAM-1表达上调,BUN、Scr升高,肾小管坏死评分升高,而且SDF-1、ICAM-1的表达与BUN、Scr、肾小管坏死评分呈正相关,提示SDF-1、ICAM-1表达增高程度可以作为反映肾IRI后严重程度的指标。     

雷公藤内酯醇对肾缺血再灌注大鼠凋亡诱导因子及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对肾缺血再灌注(I/R)大鼠的肾保护作用,及对凋亡诱导因子、细胞间黏附分子-1的影响。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组(I/R组)、TP高、中、低剂量干预组、泼尼松对照组(Pred组)。采用夹闭双侧肾动脉30 min,再灌注18 h的方法制作肾I/R大鼠模型。检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),原位末端标记法检测肾小管上皮细胞凋亡,观察肾病理改变,计算肾小管损伤(ATN)评分。Western印迹和RT-PCR分别检测AIF、ICAM-1蛋白和基因表达。结果:(1)I/R组血Scr、BUN、ATN评分及细胞凋亡指数较假手术组显著升高(P<0.01);与I/R组比较,TP各组以上指标均改善(P<0.01),pred组血Scr、BUN、ATN评分改善(P<0.01),但细胞凋亡指数无明显变化(P>0.05)。(2)I/R组大鼠肾组织AIF、ICAM-1较假手术组高表达(P<0.01);与I/R组比较,TP各组二者表达均减弱(P<0.01),pred组ICAM-1表达减弱(P<0.01)但AIF表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP对肾I/R大鼠具有肾保护作用,其部分机制可能与抑制肾小管上皮细胞过度凋亡及AIF、ICAM-1表达有关。     

辛伐他汀对肾脏缺血再灌注损伤中Axin和β-catenin表达的影响

目的:观察辛伐他汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Axin和β-catenin表达的影响。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注(IR)组、辛伐他汀(XF)组,每组12只。肾缺血再灌注6h、48h后,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)的含量;光镜下观察肾组织病理结果;采用免疫组织化学二步法和实时荧光定量PCR检测肾组织中Axin和β-catenin表达的情况。结果:与假手术组相比,IR组肾组织中Axin表达明显降低(P<0.05),β-catenin表达明显升高(P<0.05);辛伐他汀干预后,Axin表达较IR组显著下降(P<0.05),β-catenin表达较IR组显著上升(P<0.05)。相关性分析表明:Axin蛋白与β-catenin蛋白(rs=-0.843,P<0.01),AxinmRNA与β-cateninmRNA(rs=-0.741,P<0.01)均为负相关。结论:辛伐他汀对肾IRI具有一定的保护作用,其机制可能与调节肾组织Axin和β-catenin表达有关。     

阿托伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤中TLR4及NF-κB p65的影响

目的：探讨阿托伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）中Toll样受体4（toll like receptor4,TLR4）及细胞核因子κB p65（nuclear factor kappa Bp65,NF-κB p65）表达的影响。方法：雄性wistar大鼠54只随机分为假手术组、手术组和干预组,每组又分为（6h、24h、48h）3个时相组。用动脉夹夹闭大鼠双侧肾动脉制成肾IRI模型;干预组：术前灌胃阿托伐他汀10mg·kg-1.d-1,1周,其余处理同手术组。再灌注达相应时间点时,检测Scr,进行肾组织病理学观察并采用免疫组织化学法测定TLR4和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果：较手术组,干预组中肾组织损伤明显缓解,Scr水平、TLR4、NF-κB p65阳性表达在相应时间点明显下降。结论：阿托伐他汀预处理可减轻IRI,其机制可能是通过抑制TLR4及NF-κB p65的表达,发挥其肾脏保护作用。     

缺血再灌注损伤后大鼠肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白的表达及其功能

目的 探讨大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）后肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白(OAT)1和3表达及功能变化。 方法 建立大鼠IRI模型，于术后第1、2、4、6天取血及肾组织标本。常规测定Scr浓度及观察肾脏组织形态。分别用免疫组织化学和Western印迹检测肾脏组织OAT1和3蛋白表达。毛细血管电泳仪检测肾脏对氨基马尿酸（PAH）排泄率。钼蓝分光光度法测定基侧膜钠-钾-ATP酶（Na＋-K＋-ATP酶）活性。另设假手术组作对照。 结果 模型组大鼠术后第1天肾小管上皮细胞坏死脱落，管腔内可见大量管型，刷状缘消失，基底膜裸露；Scr显著升高。与假手术组比较，模型组大鼠肾组织匀浆及肾小管上皮细胞OAT1和OAT3表达增强；PAH排泄率降低[(0.53±0.15)比(4.00 ± 0.67) ml/min, P < 0.01]；肾小管上皮细胞基侧膜Na＋-K＋-ATP酶活性降低[(9.33±1.37)比(15.07±0.15) μmol Pi&#8226;(mg蛋白)-1&#8226;h-1, P < 0.01]。损伤后第2天及第4天，损伤的肾小管逐渐修复，OAT1和3表达逐渐降低，PAH排泄率和Na＋-K＋-ATP酶活性逐渐增加；至第6天时肾小管基本恢复正常。 结论 急性肾缺血再灌注导致大鼠肾小管上皮细胞可逆性损伤，损伤初期肾小管OAT1和OAT3 表达增强，转运有机阴离子功能下降，PAH排泄减少。Na＋-K＋-ATP酶活性低下是OAT功能降低的主要机制之一。     

重症急性胰腺炎腹水对正常肾细胞影响

目的通过观察重症急性胰腺炎(SAP)腹水对正常肾细胞影响,探讨SAP时急性肾功能损伤的机制。方法SD大鼠54只分成SAP组(n=30)和假手术组(n=24),SAP组以5%牛磺酸胆酸钠溶液胆管逆行注射诱导模型,术后6h、12h、24h采集血清、腹水。ELISA法检测血清、腹水TNFα水平,RT PCR检测肾细胞TNFαmRNA表达。将24h采集的血清和腹水处理体外培养NRK细胞,MTT法检测细胞活性,流式细胞术测定NRK细胞凋亡率。结果SAP组6h、12h、24h血清和腹水TNFα水平渐进性升高,各时间段差异显著(P<0.05)且较假手术后明显升高(P<0.01)。SAP组大鼠血清和腹水处理后NRK细胞活性均低于假手术组。SAP组大鼠腹水和血清处理24h后,NRK细胞培养液中TNFα水平较假手术组明显升高(P<0.01);NRK细胞TNFαmRNA表达上调,显著高于假手术组;凋亡率分别为29.67%±4.12%和59.95%±2.11%,假手术组大鼠血清和腹水处理24h凋亡率分别为3.72±2.90%和4.11±3.30%,差异显著(P<0.01)。结论SAP时肾损伤可能与肾细胞过度凋亡有关,而肾细胞过度凋亡与血清和腹水TNFα升高及肾细胞过多分泌TNFα有关,SAP腹水对肾的直接损伤可能比血清明显。     

基于NOD2信号通路探讨NADPH抑制剂对肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的基于抑制核苷酸寡聚化结构域蛋白-2(nucleotide-binding oligomerization domain-2,NOD2)信号通路,探讨NADPH抑制剂对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)的影响及作用机制。方法将雄性Wistar大鼠切除右肾,并随机分为4组:①肾脏缺血再灌注(I/R)组:给予等量生理盐水预处理后夹闭左肾动脉制备IRI模型;②I/R组+氯化二碘联苯(diphenylene iodonium,DPI)组:给予DPI预处理后夹闭左肾动脉制备IRI模型;③I/R组+4-羟基-3甲氧基苯乙酮(4-hydroxy-3-methoxyacetophenone,Apocynin)组:给予Apocynin预处理后夹闭左肾动脉制备肾脏IRI模型;④假手术(Sham)组:给予等量生理盐水处理后不予夹闭左肾动脉。试验结束24 h后收集各组大鼠血及肾组织标本,采用Western blot法分别对NOD2、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)的表达进行检测;采用实时定量PCR法对NOD2 mRNA的表达进行检测;采用HE染色法观察肾脏组织学改变;采用免疫组织化学法检测肾组织炎症因子IL-1β的表达。结果与Sham组比较,I/R组的大鼠肾组织NOD2、NF-κB蛋白、Caspase-1表达显著增加(P<0.05);NOD2 mRNA表达显著增加(P<0.05);I/R组肾脏病理表现为肾小管上皮细胞水肿、坏死,脱落于管腔,肾间质炎性细胞浸润,肾小管损伤评分明显增加(P<0.05)。与I/R组相比,I/R+Apocynin组和I/R+DPI组的NOD2、NF-κB蛋白、Caspase-1表达均显著减少(P<0.05),NOD2 mRNA表达显著减少(P<0.05),肾脏病理显示急性肾小管坏死程度减轻,肾小管损伤评分显著减低(P<0.05)。结论抑制氧化应激可通过阻断NOD2受体信号通路来减轻肾脏IRI过程。     

非转移性黑色素瘤糖蛋白B在急性肾缺血再灌注损伤中的表达及与巨噬细胞表型的关系

目的 观察非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)在急性肾缺血再灌注损伤(IRI)肾脏和尿液中的表达,分析其与M1、M2表型巨噬细胞的相关性,探讨其在IRI免疫炎性反应损伤中的作用.方法 C57BL/6J小鼠被随机分为3组:正常对照组(n=4)、假手术组(n=4)、IRI组(n=12).以双侧肾蒂血管阻断30min建立IRI模型.PAS染色观察肾脏病理改变;免疫荧光双染色及流式细胞术检测Gpnmb和巨噬细胞标志物F4/80蛋白的表达及分布;实时荧光定量PCR检测Gpnmb及M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)及M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)在肾脏中的mRNA表达;Western印迹和ELISA法检测小鼠尿液中Gpnmb的表达.结果 IRI小鼠肾脏肾小管上皮细胞脱落,肾间质内可见大量炎性细胞浸润.实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组、假手术组比较,IRI组小鼠肾脏Gpnmb mRNA于造模后第1天和第2天升高,差异有统计学意义(P＜ 0.01),第3天下降至接近正常水平.免疫荧光双染色及流式细胞术检测结果均显示Gpnmb蛋白主要表达在F4/80阳性的巨噬细胞内.Gpnmb mRNA表达与M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)的mRNA表达无相关性,与M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)的mRNA表达呈正相关.Western印迹和ELISA结果示IRI组小鼠在造模后第1天尿液中的Gpnmb表达显著升高,与正常对照组和假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.01),第3天降至接近正常水平.结论 Gpnmb在IRI肾脏的巨噬细胞和尿液中呈高表达,并与M2型巨噬细胞相关,提示Gpnmb可能参与了巨噬细胞的分型和急性肾损伤的炎性反应过程,临床上也可用作AKI早期诊断的生物学标志物.     

高压氧对大鼠缺血再灌注损伤肾FasL和半胱氨酸蛋白酶3表达的影响

目的 研究高压氧(HBO)对大鼠缺血再灌注损伤(IRI)肾细胞凋亡相关基因(FasL)和细胞凋亡执行蛋白半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 健康SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=8)、IRI组(n=8)和IRI+HBO组(n=8).采用夹闭双侧肾动脉方法建立IRI模型.IRI+HBO组分别在再灌注后lh、24 h、48 h给予HBO处理,末次HBO后取双肾组织测定各组大鼠肾组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量 ;采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色方法分别测定肾组织FasL mRNA、caspase-3蛋白表达.结果 与假手术组比较,IRI组SOD活性下降(P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05),经HBO治疗后SOD活性升高(P＜0.05),MDA含量降低(P＜0.05).FasL mRNA、caspase-3蛋白在假手术组呈低水平表达,而在IRI组表达显著上调(P＜0.01),IRI+HBO组表达较IRI组显著下调(P＜0.01).结论 大鼠肾缺血损伤后随着再灌注时间延长FasL mRNA 、caspase-3蛋白表达显著上调.早期HBO治疗后可以使FasL mRNA、caspase-3蛋白表达明显下调,抑制细胞凋亡,保护肾脏.     

外源性硫化氢在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的 观察不同剂量外源性硫化氢(H2S)供体硫氢化钠对大鼠肾脏缺血再灌注损伤( IRI)的保护作用.方法 健康雄性Wistar大鼠28只随机分为4组,即假手术组( Sham)、肾缺血再灌注(IR)组、硫氢化钠(NaHS)高剂量组、硫氢化钠低剂量组.大鼠右肾切除后,以NaHS作为硫化氢的供体,NaHS高、低剂量组分别经左肾动脉插管,按照1.5 μmol/min、300 nmol/min的剂量连续15 min给药,假手术组及IR组给予同体积生理盐水.停药5 min 后,NaHS组和IR组用无损伤微动脉夹夹闭左侧肾蒂45 min后解除阻断,建立大鼠急性IRI模型,假手术组不夹闭左肾动脉,其他操作同模型组.于肾脏恢复血流24h时留取血和肾组织标本,检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr);半定量分析肾脏病理损伤;检测肾组织H2S生成率;采用实时定量PCR法检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE )mRNA表达.结果 与假手术组相比,IR组H2S生成率显著降低(P＜0.01);CBS、CSE mRNA表达显著下降(P＜0.01 );Scr、BUN显著升高(P＜0.01);肾脏病理表现为急性肾小管坏死,且最严重.与IR组相比,NaHS预处理组H2S生成率升高(P＜0.05);CBS、CSE mRNA表达升高(P＜0.01 );Scr、BUN降低(P＜0.01);病理损伤明显减轻.NaHS两个剂量组之间差异无统计学意义.结论 外源性H2S对大鼠IRI具有保护作用.     

大鼠肾缺血-再灌注后JNK mRNA及蛋白表达的变化及银杏达莫注射液的干预作用

目的：观察JNK在肾缺血-再灌注损伤大鼠肾组织中的表达,研究银杏达莫注射液对肾缺血-再灌注损伤的防治作用。方法：将健康雄性SD大鼠50只随机分为5组：假手术对照组（n=10）,缺血-再灌注损伤模型组（n=10）,银杏达莫高剂量、中剂量、低剂量组（每组10只）。对于模型组、高、中、低剂量组,切除右肾,夹闭左侧肾蒂缺血1h,移去动脉夹再灌注1h,除此之外,对于银杏达莫处理组,手术前分别按每天0.9,1.8,3.6ml/kg的剂量尾静脉注射给药1周,假手术对照组和模型组手术前按每天1.8ml/kg的剂量尾静脉注射生理盐水,给药1周。检测肾组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性及血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）的含量。取肾组织光镜、电镜下观察各组肾组织的形态学变化,用RT-PCR技术检测各组大鼠肾组织JNKmRNA的表达情况,Western印迹法观察p38MAPK、JNK的活化情况。结果：与假手术对照组相比,模型组大鼠Scr（214.2±40.1）μmol/L、BUN（8.75±1.28）mmol/L及MDA（11.27±2.43）nmol/mgprot含量均比假手术组增高（P〈0.01）,SOD（103.62±6.59）nmol/mgprot活性显著下降（P〈0.01）;肾组织JNKmRNA（1.38±1.36）水平显著升高（P〈0.01）;肾组织p-JNK蛋白水平显著上升,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。银杏达莫注射液干预后,Scr、BUN及MDA含量显著降低,SOD活性显著升高;肾组织JNKmRNA水平显著下调,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;肾组织p-JNK蛋白水平显著下调,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;银杏达莫不同剂量组之间差异无统计学意义。结论：银杏达莫注射液可通过降低氧自由基水平、减轻脂质过氧化反应,从而下调JNKmRNA及蛋白表达水平以改善缺血-再灌注损伤大鼠肾功能,减轻其损伤程度。     

氯沙坦对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中STAT-1及ICAM-1蛋白表达的影响

目的：研究氯沙坦在肾缺血/再灌注损伤中对STAT-1和ICAM-1蛋白表达的影响及在损伤修复过程中的作用。方法：大鼠背部双侧切开找到肾蒂,行无创动脉夹夹闭造成急性肾缺血/再灌注损伤模型,以氯沙坦预处理灌胃,苦味酸法测血清肌酐,免疫组化测肾组织切片中的STAT-1蛋白和ICAM-1蛋白表达的水平。结果：假手术组在6h和24h肾组织的病理和血肌酐数值无明显变化;模型组在缺血再灌注6h和24h与假手术组对比血清肌酐数值明显升高,肾组织切片在6h时STAT-1和ICAM-1蛋白已有表达,24h时两指标表达均明显上调;氯沙坦预处理组在缺血再灌注损伤6h和24h时与模型组对比,血肌酐数值明显下降,同时肾组织中STAT-1和ICAM-1蛋白表达也明显下调。结论：氯沙坦在肾缺血再灌注损伤中起保护作用,机制可能通过下调STAT-1和ICAM-1蛋白表达有关。     

辛伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小管间质CTGF、β-catenin表达的影响

目的:观察辛伐他汀对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管间质结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:将30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(N)、DN模型组(DN)、DN模型+辛伐他汀治疗组(DS)三组。利用腹腔注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型;模型建立后,第4周、8周、12周,记录大鼠体重、检测血糖、测量24 h尿蛋白定量;12周末处死大鼠,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC);取大鼠肾组织行HE染色,进行病理组织学观察;用免疫组化法检测肾小管间质中CTGF及β-catenin的表达;采用实时荧光定量PCR技术检测肾组织中CTGF及β-catenin基因mRNA的表达。结果:实验12周末,与DN模型组比较,DS组大鼠24 h尿蛋白定量、Scr、BUN显著降低(P<0.05);肾组织病理改变减轻,免疫组化和实时荧光定量PCR结果均显示,肾小管间质CTGF、β-catenin的表达明显下调(P<0.05)。结论:辛伐他汀可同时下调糖尿病肾病大鼠肾小管间质CTGF及β-catenin的表达,降低蛋白尿,保护肾脏功能。提示辛伐他汀可能通过调节CTGF和Wnt/β-catenin信号通路的表达,发挥其延缓肾小管间质纤维化的作用。     

热休克蛋白70对肾脏缺血预处理保护作用的研究

目的 :研究缺血预处理对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用 ,观察热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达变化并探讨其作用机制。方法 :建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型并进行缺血预处理 ,实验分组 :假手术组 (S组 )、缺血再灌注组 (IR组 )和缺血预处理组 (PC组 )。各组再灌注后检测血清肌酐 (Scr)、肾组织丙二醛 (MDA)含量 ,肾组织石蜡切片苏木精伊红染色以及免疫组化染色。结果 :PC组Scr值、肾小管病理评分、肾组织中MDA含量明显低于IR组 (P <0 .0 5 ) ,PC组与S组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;HSP70免疫组化染色 :S组未见明显的阳性反应产物 ,PC组和IR组肾小管上皮细胞胞质可见棕黄色阳性反应产物。计算机图像分析显示PC组灰度值显著高于IR组 (P <0 .0 1)。结论 :缺血预处理对肾脏缺血再灌注损伤有明显保护作用 ,其作用机制可能与HSP70本身的细胞保护作用及HSP70的细胞内抗氧化作用有关     

血小板反应蛋白-1及其受体CD47在肾间质纤维化血管病变中的表达

目的观察血小板反应蛋白-1(TSP-1)及其受体CD47在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中的表达,探讨TSP-1-CD47在肾周毛细血管(PTC)病变中的作用。 方法将60只SD大鼠随机分为2组：UUO组45只和假手术组(SOR) 15只。UUO组随机选取15只分别于术后3 d、7 d、14 d处死;SOR组随机选取5只于相同时间点处死。检测24 h尿蛋白定量,采用全自动生化分析仪检测各组大鼠的肾功能,通过Masson染色观察肾间质病理改变;免疫荧光双染色观察TSP-1及其受体CD47在UUO模型中是否存在共表达。Western印迹检测毛细血管病变指标CD34和血管内皮生长因子(VEGF)及TSP-1的表达;多组间均数比较使用方差分析;TSP-1与CD34、VEGF的相关性进行Pearson相关分析。 结果与SOR组相比,UUO各组大鼠血清肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量随梗阻时间延长无明显变化,但肾间质纤维化逐渐加重,肾小管损伤评分增加。免疫荧光双染色显示TSP-1及其受体CD47在肾小管间质存在共表达。Western印迹检测显示随UUO时间延长,TSP-1蛋白水平逐渐增加,而CD34及VEGF蛋白表达随梗阻时间延长逐渐下降。相关分析显示TSP-1蛋白水平与CD34及VEGF的表达呈负相关(r＝－0.931, P<0.01;r＝－0.953, P<0.01)。 结论TSP-1及其受体CD47在UUO大鼠模型肾间质存在共表达,且与PTC呈负相关。TSP-1可能通过CD47参与UUO肾脏PTC病变的发生发展。     

Effects of Sirt1 gene knockout on chronic kidney disease induced by 5/6 nephrectomy in mice and VEGF/Flk?1 signaling pathway

Objective To investigate the effect of Sirt1 gene knockout on chronic kidney disease induced by 5/6 nephrectomy in mice and vascular endothelial growth factor (VEGF)/fetal liver kinase-1 (Flk-1) signaling pathway. Methods Twenty four male Sirt1+/+ and Sirt1+/- mice were randomly divided into four groups: Sirt1+/+ mice with sham-operation (WT-Sham, n=6), Sirt1+/- mice with sham-operation (KO-Sham, n=6), Sirt1+/+ mice with 5/6 nephrectomy (WT-Nx, n=6) and Sirt1+/- mice with 5/6 nephrectomy (KO-Nx, n=6). Proteinuria was determined by urine collection from 8:00 to 8:00 the next day at 20 weeks. Serum creatinine (Scr), urea nitrogen (BUN) and the renal pathological changes were measured after 20 weeks. Expressions of Sirt1, collagenⅠ and transforming growth factor β (TGF-β) were used to analyze the changes of renal fibrosis by immunohistochemistry staining. Real-time PCR and Western blotting were used to measure the mRNA and protein expressions of Sirt1, fibronectin, collagenⅠ,VEGF and Flk-1 in kidney. Results Sirt1 expressed in glomerular endothelial cells, podocytes, mesangial cells and renal tubular epithelial cells in Sirt1+/+ mice, while Sirt1 expression intensity was significantly reduced in Sirt1+/- mice. Compared with the WT-Sham group, WT-Nx group had increased proteinuria, BUN, Scr, glomerular sclerosis index and tubulointerstitial fibrosis index at 12 weeks after operation (all P＜0.01), and KO-Nx group had exacerbated the above up-regulations (all P＜0.01). Compared with those in WT-Sham group, the expressions of fibronectin, collagenⅠ and TGF-β were up-regulated in WT-Nx group (all P＜0.01), and were significantly augmented in KO-Nx group (all P＜0.01). Compared with those in WT-Sham group, renal mRNA and protein expressions of VEGF and Flk-1 were decreased in WT-Nx group, and KO-Nx group aggravated their down-regulation (all P＜0.01). Conclusions Sirt1 gene knockout can increase proteinuria and Scr, and aggravate renal pathology and renal fibrosis in 5/6 nephrectomized mice, which is associated with the inhibition of VEGF/Flk-1 signaling pathway. It is suggested that Sirt1 may be a potential therapeutic target of chronic kidney disease.     

氯沙坦对尿酸性肾病大鼠肾组织MCP-1和ICAM-1mRNA表达的影响

目的 探讨氯沙坦对尿酸性肾病大鼠血清尿酸、尿素氮、肌酐、尿蛋白以及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）在肾脏中表达的影响.方法 分别给予右侧肾脏切除术后大鼠氧嗪酸钾或者联合别嘌呤醇或者联合氯沙坦灌胃8周,监测上述指标变化情况,并采用实时荧光定量PCR测定各组大鼠肾脏MCP-1和ICAM-1mRNA表达的情况.结果 别嘌呤醇和氯沙坦均有效降低血清尿酸水平（P〈0.01）,改善肾功能（P〈0.05）.肾切除联合氧嗪酸钾灌胃组大鼠肾脏组织MCP-1和ICAM-1明显高于单纯肾切除组（P〈0.01）,别嘌呤醇和氯沙坦均能减少氧嗪酸钾所致的上述基因表达的增加（P〈0.01）.结论 MCP-1和ICAM-1介导的炎症反应可能参与高尿酸血症加速肾脏病进展过程,氯沙坦可能通过抑制尿酸所致的炎症反应而延缓肾脏病的进展.     

intermedin对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察intermedin( IMD)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为假手术组(n=10,行左输尿管分离术)、模型组(UUO,n=10)、氯沙坦组(n=10)和IMD组(n=10),后3组行左输尿管结扎术.各组大鼠分别于术后第14、21天随机选取5只,腹主动脉采血并留取梗阻侧肾组织之后处死.HE、Masson染色观察肾组织病理变化;比色法测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及新鲜肾组织羟脯氨酸(Pro)含量;免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、IMD的表达水平,并进行半定量分析.结果 与假手术组相比,不同时间点UUO组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD的阳性表达均显著升高(P＜0.05);与UUO组相比,氯沙坦组血BUN、Scr、肾组织Pro含量及TGF-β1、IMD表达均降低(P＜0.05),IMD组除IMD表达增加外,其余均降低(P＜0.05).结论 IMD可减轻UUO肾间质纤维化,改善肾功能,其机制可能与拮抗纤维化炎性介质TGF-β1有关.