抗HBS—三性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

抗ＨＢＳ－碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用①１０００３７北京海军总医院高荣凯王琰刘克金化冰朱迎春刘群英陈宇萍关键词肝炎表面抗原，乙型；碱性磷酸酶；双功能抗体中国图书资料分类号Ｒ４４６．６１酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）在对微量抗原或抗体的检测中具有重...     

抗HBsAg-碱性磷酸酶双功能抗体融合蛋白分子的构建

为构建带有碱性磷酸酶活性的双功能基因工程抗体,我们将已克隆的大肠杆菌碱性磷酸酶基因重组到抗ＨＢｓＡｇ Ｆａｂ段的Ｆｄ羧基端,构建了重组融合蛋白表达载体ｐＨＢＦＡＰ,转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经ＩＰＴＧ诱导表达后,采用ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清中存在与ＨＢｓＡｇ的结合活性和碱性磷酸酶的催化活性,显示抗ＨＢｓＡｇ－碱性磷酸酶双功能抗体分子在大肠杆菌中获得了表达。     

单链抗体—碱性磷酸酶检测系统的建立

目的：建立简便快速的单链抗体检测方法。方法：用PCR法和DNA重组技术构建了突变型碱性磷酸酶基因和单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因;利用IPTG诱导融合基因的表达,并用pNPP底物液检测碱性磷酸酶的活性,用ELISA法检测和比较了不同单链抗体的相对活性。结果：实现重组突变型碱性磷酸酶基因在大肠杆菌中的功能性表达,且活性较重组野生型碱性磷酸酶活性高30倍左右。重组单链抗体－突变型碱性磷酸酶融合基因在大肠杆菌中获得功能性表达,周质中表达产物具有双功能,并成功地利用该系统分析了不同单链抗体的相对活性。结论：该单链抗体－碱性磷酸酶检测系统能够方便地应用于单链抗体的活性分析。     

甲状腺功能亢进症98例血中碱性磷酸酶的变化

甲状腺功能亢进症 (甲亢 )患者 ,约半数有碱性磷酸酶 (Ａｌｐ)增高 ,其机制不明。 1998年 7月～2 0 0 0年 8月 ,我们对收治的甲状腺功能亢进症 98例进行碱性磷酸酶测定 ,发现Ａｌｐ增高与甲亢病程、是否合并肝脏和骨骼系统病变有关。1　临床资料1 1　一般情况　甲状腺功能亢进症 98例 ,男 32例 ,女 66例 ;年龄 18～ 78岁 ,平均 36 4岁。均符合甲状腺功能亢进症的诊断标准。其中Ａｌｐ增高 5 4例 ,男 15例 ,女 39例 ;年龄 18～ 67岁 ,平均 32 5岁。均排除合并原发性肝病、骨骼和肌肉系统疾病。1 2　测定方法　清晨空腹抽血查肝功、Ｔ3 (三碘…     

龈沟液中的碱性磷酸酶与牙周的关系

龈沟液及其内容的检测是牙周病目前研究的热点之一。龈沟液的收集有两种方法:袋内法和袋口法。龈沟液中有众多的酶类,其中碱性磷酸酶是研究得比较早的一类。通常检测骨性碱性磷酸酶的方法分为两大类:电泳法和非电泳法。对龈沟液中的碱性磷酸酶采用化学发光法效果较好。龈沟液中的碱性磷酸酶水平与牙周袋深度、牙槽骨吸收量和活动性附着丧失呈明显地正相关。有炎症或种植失败的种植体周围龈沟液中的碱性磷酸酶明显升高。而牙周炎牙齿在接受正畸外力时龈沟液中的碱性磷酸酶的含量有增加的趋势。     

骨碱性磷酸酶对小儿佝偻病诊断的探讨

佝偻病是我国重点防治的小儿四大疾病之一。近年来佝偻病患病率虽有下降趋势 ,但婴幼儿期 ,尤其婴儿期佝偻病仍较多见 ,因此 ,我们采用骨碱性磷酸酶检测法 (简称ＢＡＬＰ)新技术 ,对本市 80例婴幼儿及儿童进行了筛查检测 ,现报告如下。1　对象与方法1.1　对象 :1996 - 0 2～ 1996 - 12接受兰州市 3～ 7岁小儿 80例 ,其中男性 35例 ,女性 45例。年龄分布 :3～ 9月 32例 ,2～3岁 2 8例 ,3.5～ 7岁 2 0例。1.2　方法 :骨碱性磷酸酶检测 :试剂盒为北京协和医学科技开发公司研制的ＢＡＬＰ试条 (全血干化学免疫浓缩法 ) ,由专人采集标本 ,外周血 …     

红斑狼疮(SLE和DLE)抗核抗体、抗ENA抗体和抗dsDNA抗体的检测及意义

目的：探讨抗核抗体（ANA）、抗ENA抗体和抗dsDNA抗体在红斑狼疮（SLE和DLE）的实际临床实用价值和特点。方法：ANA和抗dsDNA抗体采用间接免疫荧光检测，ANA检测灵长类动物的肝组织印片和人类上皮细胞（Hep-2细胞）为抗原底物，抗dsDNA抗体的实验基质为血鞭毛虫属的绿蝇短膜虫。抗ENA抗体检测采用酶免疫斑点（条带）实验。结果：ANA在SLE患者阳性率为90．4％，DLE患者为75．0％，dsDNA阳性率为63．5％，ENA总阳性率为84．5％。结论：ANA是诊断红斑狼疮的重要指标，但与病情活动性平行关系，抗dsDNA抗体是SLE活动的重要标志。     

小儿血骨碱性磷酸酶测定80例临床分析

目的:探讨小儿血骨碱性磷酸酶测定的临床意义。方法:随机抽取80名来院门诊的2个月～4岁的患儿,用骨碱性磷酸酶试剂盒,取微量全血,测量血骨碱性磷酸酶。结果:对可疑病例和阳性病例按检测值和临床表现的不同,子适当的补钙和补充维生素D2或D3制剂等治疗,一个月后再测其血骨碱性磷酸酶,其值均有不同程度的下降。结论:血骨碱性磷酸酶能早期反映小儿佝偻病,并能及时对治疗效果做出评估,且简单,易行,方便,灵敏,快捷,特异性高,确实适于各级医院推广应用。     

不孕妇女抗精子抗体和抗子宫内膜抗体检测分析

抗精子抗体 (ＡｓＡｂ)、抗子宫内膜抗体 (ＥｍＡｂ) ,在女性体内为同种异体和自身两种抗体 ,是引起女性免疫不孕的重要因素 ,我们通过对 2 17例不孕妇女ＡｓＡｂ和ＥｍＡｂ的检测 ,探讨其临床意义。1　材料与方法1 1　观察对象　本组 2 17例均为门诊病人 ,原发性不孕10 6例 (2 2～ 38岁 ) ,不孕 1年～ 12年。继发性不孕 11例 ,其中反复自然流产 32例 (2 2～ 30岁 ) ,流产次数 2～ 4次 ,人工流产 79例 (2 2～ 2 8岁 ) ,流产次数 1～ 2次。对照组 :30例为体检健康孕妇 (2 3～ 2 8岁 ) ,孕龄 (2 1～ 32周 )。1 2　检测方法　取孕妇静脉血 2ｍ…     

21d卧床期间血清碱性磷酸酶及电解质的变化

目的观察模拟失重对血清碱性磷酸酶 (ALP)及Ca2 +、Mg2 +、Cl- 、P3+代谢的影响。方法 6名健康男性志愿者 ,年龄 2 4 .8± 6.1岁 ,进行 2 1d头低位 ( - 6°)卧床试验。在卧床前第 3天 ,卧床第 3、1 0、2 1天及卧床后第 2天 (d + 2 )测定了被试者血清ALP及Ca2 +、Mg2 +、Cl- 、P3+含量的变化。血清Ca2 +测定用甲基麝香草酚蓝比色法 ,P3+测定用紫外分光光度法 ,Mg2 +和Cl- 测定用酶法 ,血清碱性磷酸酶测定用对 -硝基苯磷酸盐比色法。结果卧床期间 ,血清Ca2 +较卧床前显著增加 ,在卧床第 1 0天和 2 1天有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ,卧床后第 2天仍显著高于卧床前 ;P3+在卧床第 2 1天和卧床前比较显著性降低 (P <0 .0 1) ;Mg2 +在卧床期间和卧床后均显著低于卧床前 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ;Cl- 在d2 1和d+ 2均较卧床前显著增加 (P <0 .0 1 )。血清碱性磷酸酶在卧床第 2 1天较卧床前显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 2 1d头低位卧床过程中 ,血钙升高 ,血磷、镁降低 ,氯离子升高 ,血清ALP高于卧床前 ,可能反映机体处于代谢不平衡状态     

不同大小机械牵张力对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶的影响

目的究不同大小机械牵张力对成骨细胞增殖能力及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响,以了解牙槽骨改建机制。方法 通过自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1同时施加0％、6％、12％和18％的机械牵张力,作用24h和48h后,用MTT法检测细胞受力后的增殖变化,ALP试剂盒检测ALP的变化。结果细胞受力后,其增殖能力随牵张力值的增大而明显增强（P〈0．01）,而ALP活性随牵张力值的增大明显降低（P〈0．01）。结论不同大小机械牵张力可以影响成骨细胞的增殖能力及ALP活性,与力值大小密切相关。     

骨碱性磷酸酶测定对早期预防佝偻病的指导意义

目的 对年龄在38～50 d的婴儿进行骨碱性磷酸酶测定,了解维生素D缺乏情况,以便早期诊断和早期治疗.方法 976例年龄在38～50 d男女各半的婴儿取外周血,进行骨碱性磷酸酶的检测.结果 骨碱性磷酸酶＜200 U/L,339例;骨碱性磷酸酶200～250 U/L,350例;骨碱性磷酸酶250～300 U/L,214例;骨碱性磷酸酶＞300 U/L,73例.结论 骨碱性磷酸酶检测方法具有简便易行、灵敏、特异性等特点,可用于指导维生素D应用,以预防和治疗佝偻病.     

利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能

目的：采用碱性磷酸酶（AP4）标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征，并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义。方法：将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4，成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT，进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白，并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定。结果：确认了netrin-4的神经突起导向功能。进一步通过对AP标签进行检测，发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合，而EGFL不结合，说明神经元表面舍有netrin-4受体或结合位点，且可能通过LNT和NCT结构域起作用。结论：netrin-4具有明确的神经突起导向功能，在神经元表面舍有结合位点，同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势。