MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

维生素C对A549细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达的影响

背景与目的维生素C作为一种抗氧化剂,对多种肿瘤均有抑制作用,本研究旨在探讨维生素C对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响及其诱导A549细胞凋亡的可能机制。方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的维生素C,采用细胞生长曲线及克隆形成实验检测细胞生长情况;用流式细胞仪检测细胞周期的影响及凋亡率;用RT-PCR方法检测肺癌细胞株A549中Caspase-3、Survivin的表达差异。结果400μg/mL、4mg/mL浓度组维生素C明显抑制A549细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞被阻止在G0/G1期及S期,且随着时间的延长细胞凋亡逐渐增多,RT-PCR检测维生素C可以上调Caspase-3mRNA的表达,并且随着时间的延长Caspase-3mRNA的表达逐渐增强,对Survivin mRNA的表达无确切作用。结论维生素C呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,并使A549细胞阻止在G0/G1期及S期,并呈时间依赖性诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过上调Caspase-3的表达。     

氟他胺对乳腺癌HCC1937细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的 探讨氟他胺对乳腺癌HCC1937细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度（5、10、20μmol／L）的氟他胺对人乳腺癌HCC1937细胞体外生长的抑制作用;Annexin V-FITC／PI流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白印迹法（Western blotting）检测核因子κB（NF-κB）和半胱天冬酶（Caspase-3）的蛋白表达水平。结果 不同浓度氟他胺作用于HCC1937细胞12、24、36、48h后,细胞生长受到抑制且呈时间和剂量依赖性。不同浓度氟他胺作用HCC1937细胞24、48h后,可显著促进细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。氟他胺作用HCC1937细胞24h后,随着药物浓度的增加,NF-κB蛋白表达水平逐渐下降,而Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高。结论 氟他胺能够抑制HCC1937细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调Caspase-3和下调NF-κB蛋白表达实现的。     

雷公藤红素对U937细胞Notch 1、NF-κB信号蛋白通路的调控作用

背景与目的:白血病是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤,NF-κB与肿瘤的发生和转移以及肿瘤细胞的增殖、凋亡、耐药相关,现已证实NF-κB家族是Notch信号通路的一个靶基因。本研究探讨雷公藤红素对白血病U937细胞凋亡和细胞中Notch1、NF-κB表达水平的影响。方法:以不同浓度雷公藤红素(0.25～16.0μmol/L)分别作用于U937细胞12～60h,MTT法检测细胞增殖活性,透射电子显微镜、流式细胞术观察雷公藤红素对U937细胞凋亡的影响,Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对U937细胞内Notch1通路蛋白、基因表达水平的调控作用,激光共聚焦显微技术检测细胞凋亡时NF-κB的核浆分布变化。结果:雷公藤红素能明显抑制U937细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导U937细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变,而雷公藤红素的凋亡诱导效应可能与其将细胞阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对Notch1通路蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系。NF-κB在胞核表达减少,胞浆表达增多。与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:雷公藤红素明显抑制U937细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与下调Notch1信号通路以及NF-κB蛋白表达有关。     

肺腺癌穿膜蛋白 125 通过高甲基化介导 NF-κB 信号通路的激活降低对 地西他滨的敏感性

目的：探讨穿膜蛋白125（transmembrane protein125,TMEM125）在肺腺癌组织与A549细胞中的表达,以及影响细胞的增殖和侵袭能力的分子机制。方法：从癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库收集肺腺癌数据包,下载临床信息及基因表达谱数据。分析 TMEM125在肺腺癌组织中的表达及其与患者总生存期的相关性。构建 TMEM125过表达 A549细胞株,以CCK-8法、细胞划痕实验检测TMEM125过表达对肿瘤细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TMEM125过表达对A549细胞的细胞周期和凋亡的影响。WB检测TMEM125过表达对下游NF-κB信号通路、凋亡蛋白的影响;免疫共沉淀法（co-immunoprecipitation,Co-IP）检 测 TMEM125 与 NF- κB 抑 制 因 子 结 合 Ras 样 2（NF- κB inhibitor interacting Ras-like 2,NKIRAS2）的相互作用。利用TNFα（10 ng/ml）处理TMEM125过表达A549细胞,CKK-8、流式细胞术及WB检测其对细胞增殖、凋亡以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。去甲基化试剂地西他滨处理A549细胞,qPCR和WB检测TMEM125基因和蛋白的表达。结果：TMEM125 mRNA在肺腺癌组织中表达水平显著低于正常组织（P<0.001）,启动子甲基化水平显著高于正常组织（P<0.001）,并且低、中表达患者总生存期显著低于高表达患者（P<0.001）。过表达TMEM125抑制了A549细胞的增殖和迁移（P<0.01）,增加细胞 G2/M 期,促进细胞凋亡（P<0.01）;过表达 TMEM125 与 NKIRAS2 相互作用,显著抑制 NF-κB 的活性（P<0.01）;地西他滨处理 A549 细胞可促进 TMEM125 表达并且抑制细胞增殖（P<0.01）。结论：启动子高甲基化水平降低了TMEM125基因表达,导致其抑制NF-κB活性功能和抑制细胞增殖的作用下降,并且降低了细胞对地西他滨的敏感性。     

Toll样受体4信号通路在脂多糖促进肺癌细胞增殖中的机制探讨

目的:本研究探讨Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)介导的信号转导通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)促进肺腺癌细胞A549增殖过程中的可能机制.方法:LPS刺激肺腺癌A549细胞后,采用MTT方法和FCM法检测A549细胞增殖情况;免疫细胞化学法检测经不同浓度LPS处理的A549细胞中,TLR4、c-Jun、c-Fos及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)蛋白的表达水平.结果:LPS刺激A549细胞24 h后增殖效应最明显,且100 ng/mL LPS组的G2/M期细胞所占比例较对照组和10 ng/mL LPS组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白在A549细胞中均有表达,且随着LPS处理浓度的增加而表达增强,100 ng/mL LPS处理组中蛋白表达增强最明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:LPS能促进A549细胞增殖,其机制可能是通过与TLR4受体结合而激活TLR4信号转导通路,进而分别活化c-Jun和c-Fos的异源二聚体--转录因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)和核因子NF-κB,从而使肺癌细胞持续增殖.     

TRAIL与MG132联合诱导肺癌A549细胞凋亡及机制的探讨

目的:探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与蛋白酶抑制剂MG132联合诱导细胞凋亡的可能机制。方法:倒置显微镜下观察TRAIL、蛋白酶抑制剂MG132及两药联合干预24 h A549细胞形态学变化;流式细胞仪技术检测TRAIL、蛋白酶抑制剂MG132及两药联合干预24 h A549细胞凋亡指数变化;ELISA方法检测TRAIL、蛋白酶抑制剂MG132及两药联合干预24 h A549细胞NF-κB活性变化;蛋白印迹技术检测TRAIL、蛋白酶抑制剂MG132及两药联合干预24 h A549细胞凋亡基因蛋白Bax及Caspase-3表达水平。结果:倒置显微镜下可观察到两药联合组细胞呈现皱缩、核碎裂等典型的凋亡特征。流式细胞仪技术结果显示TRAIL与蛋白酶抑制剂MG132联合用药干预24 h细胞凋亡率约为48.78%,与单药组(21.12%)相比,凋亡率显著提高,P=0.002;ELISA结果显示TRAIL与MG132联合干预24 h后,细胞NF-κB活性约为0.23,与TRAIL单药组相比活性明显降低,P=0.008;蛋白印迹技术结果显示TRAIL与蛋白酶抑制剂MG132联合用药干预24 h细胞凋亡基因蛋...     

TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用

目的　探讨NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂(FASI)诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用。方法　FASI—浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株,四唑盐比色试验(MTT法)、片断DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色(AO/EB)等方法检测细胞调亡,用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测NF-κB活性。结果　LoVo细胞在FASI作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF-κB在不同浓度浅蓝菌素(10-9～10-5)处理LoVo细胞12h后,可抑制NF-κB活性,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制LoVo细胞内源性脂肪酸合成,诱发细胞凋亡来阻遏LoVo的增殖。NF-κB可能参与FASI诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的信号转导。     

Inhibitory Effect of Cantharidin on Proliferation of A549 Cells

Objective:To study the inhibition of Cantharidin against the proliferation of human lung cancer A549 cells and its mechanism.Methods:MTT assay was employed to determine the inhibition of Cantharidin against proliferation of A549 cells and flow Cytometry was applied to analyze A549 cell cycle and the effect of Cantharidin on cell cycle.Results:Cantharidin showed inhibition against the proliferation of A549 cells,and the inhibition was mediated by blocking A549 cell cycle at G2/M phase significantly.Conclusion:Cantharidin exhibits inhibition against the proliferation of human lung cancer A549 cells.     

肿瘤囊泡包装的甲氨蝶呤对肺癌A549细胞放疗增敏作用的体外研究

目的 探讨肿瘤囊泡(tumor cell-derived microparticles,T-MP)包装的甲氨蝶呤(MTX)对非小细胞肺癌A549放疗增敏作用及其机制.方法 MTT法检测T-MP MTX对A549细胞增殖的影响;应用流式细胞术、划痕法、West-ern blot等方法检测T-MP MTX联合放疗对A549细胞凋亡、迁移能力以及MMP-2、Nanog、Sox-2等蛋白表达变化.结果 MTT法检测提示T-MP MTX浓度依赖性地抑制A549细胞增殖,并且在较低浓度下即发挥抑癌作用.T-MP MTX对支气管上皮细胞株16HBE细胞增殖的影响较弱,在较高浓度可轻度地抑制细胞增殖.细胞凋亡检测发现T-MP MTX联合放疗扩大A549细胞凋亡,其作用与放疗剂量有关(P<0.05).划痕实验提示T-MP MTX联合放疗有效抑制A549细胞迁移能力,其作用与放疗剂量有关(P<0.05);Western blot检测表明T-MP MTX联合放疗显著下调A549细胞MMP-2、Nanog和Sox-2蛋白表达水平,此作用与放疗剂量有关(P<0.05).结论 T-MP MTX联合放疗特异地抑制A549细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,提高放疗敏感性,其机制可能与T-MP MTX诱导细胞周期同步化,以及干扰肿瘤干细胞低代谢状态有关.     

苦参碱可能通过自噬抑制肺癌A549细胞的增殖

目的:探究苦参碱对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其对自噬的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞，分别用不同浓度的苦参碱处理后，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率；倒置显微镜下观察不同浓度苦参碱时A549细胞的形态变化；采用细胞克隆实验检测不同浓度的苦参碱对A549细胞的增殖抑制程度；Western blot 检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及LC3A/B的表达水平；透射电镜下观察经苦参碱处理后A549细胞内自噬泡的变化。结果:苦参碱对肺癌A549细胞有明显的抑制作用，并且呈剂量依赖性；倒置显微镜下发现经苦参碱处理后肺癌A549细胞皱缩、变小、胞内可见大小不一的颗粒状物质；随着苦参碱浓度的增加，肺癌A549细胞形成的克隆集落逐渐变小、变少；Western blot 检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及LC3A/B的水平均随着苦参碱浓度的增加而增加，并呈剂量依赖性；透射电镜下观察到苦参碱处理的肺癌A549细胞内自噬空泡明显增加，并且可观察到吞噬线粒体的自噬泡。结论:苦参碱可抑制肺癌A549细胞的增殖，并能诱导细胞内自噬的发生及损伤自噬降解通路，因此我们推测苦参碱可能通过自噬造成细胞内物质和能量的循环紊乱从而抑制肺癌A549细胞的增殖。     

人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制肺腺癌A549细胞增殖的机制探讨

目的:探讨人参皂苷Rh1通过Wnt通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖的机制。方法:体外培养A549细胞,加入Rh1（5、10和20 μmol/L）诱导后,采用MTT法检测A549细胞存活率,采用Western blot测定Wnt通路相关蛋白GSK-3β和β-catenin表达情况;利用β-catenin(S37A)慢病毒转染建立Wnt通路激活型A549细胞,进一步研究A549细胞中Wnt通路持续激活对Rh1抗增殖作用的影响。结果:Rh1可以剂量和时间依赖性地抑制A549细胞的增殖,同时Rh1可以剂量依赖性地显著降低A549细胞中的GSK-3β(Ser9)及β-catenin的表达水平。Wnt通路激活型的A549细胞部分抵消了Rh1的抗增殖作用。结论:Rh1可能通过抑制Wnt信号通路来抑制A549细胞的增殖。     

延龄草总皂苷调控hsa_circ_0025033/miR-149对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:研究延龄草总皂苷对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将不同浓度的延龄草总皂苷作用于A549细胞,应用实时定量PCR检测hsa_circ_0025033和miR-149的表达,应用双荧光素酶基因系统验证hsa_circ_0025033与miR-149的靶向关系。分析干扰hsa_circ_0025033表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:延龄草总皂苷可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,下调hsa_circ_0025033表达,上调miR-149表达(P＜0.05)。干扰hsa_circ_0025033可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P＜0.05)。hsa_circ_0025033可靶向结合miR-149,干扰hsa_circ_0025033表达可上调miR-149表达(P＜0.05)。过表达hsa_circ_0025033逆转延龄草总皂苷对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论:延龄草总皂苷能够抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与调节hsa_circ_0025033/miR-149通路有关。     

白藜芦醇对肺腺癌A549细胞增殖、黏附与侵袭的影响

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对肺腺癌A549细胞增殖,黏附及侵袭的影响。方法:用不同剂量的Res作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞的增殖水平(成纤维3T3细胞为对照),流式细胞仪检测A549细胞的细胞周期和凋亡,体外黏附实验测定A549细胞的黏附能力,Transwell实验测定A549细胞的侵袭能力,荧光免疫细胞化学方法测定A549细胞中MMP-2和TIMP-2蛋白的表达。结果:Res以剂量(20～80μmol/L)依赖和时间(0～72 h)依赖方式抑制A549细胞的增殖,同样条件对3T3细胞增殖无影响。10、20、40、80μmol/L Res作用后,A549细胞的凋亡率分别为(34.9±0.91)%、(41.33±0.13)%、(45.47±0.87)%和(59.46±0.59)%。经20μmol/L Res处理48 h后,S期A549细胞比例为(56.41±1.67)%,细胞周期阻滞在S期。20μmol/L以上的Res可引起A549细胞的黏附力下降、侵袭力降低(P<0.05);同时,A549细胞内MMP-2蛋白表达下调,而TIMP-2蛋白表达增加。结论:Res抑制肺腺癌A549细胞的增殖、黏附和侵袭,其机制可能涉及对MMP-2和TIMP-2表达的双向调控。     

重组人activin A对A549细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的：活化素（activins）是转化生长因子TGF-β超家族成员。有研究表明,活化素可以诱导多种肿瘤细胞的凋亡。本研究旨在探讨重组人activin A对人肺腺癌细胞系A549增殖及凋亡的影响。方法：体外培养A549细胞,以不同浓度activin A处理A549细胞不同时间后,用MTT法检测其生长抑制情况;流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒检测activin A对A549细胞凋亡的影响;Western blot检测活化素Ⅱ型受体（ActRⅡ和ActRⅡB）的表达情况。结果：activin A能抑制A549细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示,activin A能促进A549细胞凋亡。Western blot结果显示,随着activin A浓度的增加,活化素Ⅱ型受体的表达量呈浓度依赖性增加。结论：activin A能在体外抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡。推测是通过诱导活化素Ⅱ型受体的表达,激活其下游一系列信号转导通路,从而发挥其生物学功能。     

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

吉非替尼联合顺铂对肺癌细胞增殖的协同抑制作用

目的：观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼（Gefitinib,G）与顺铂（Cisplatin,DDP）联合对肺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度吉非替尼单药、顺铂单药以及两药联用对肺癌细胞株A549的抑制程度,并应用两药相互作用指数评价药物的联合效应。结果：在药物作用时间足够时,两药联用相对单药组能显著地提高肿瘤细胞的抑制率,并且抑制效率随药物浓度的增加而提高。当作用时间≥48h时,联用组A值相对于单药组明显降低（P〈0．05）。联用对肿瘤细胞增长的抑制作用在48h时较24h明显增高（P〈0．05）,并随着时间的延长呈现递增趋势,至72h后逐渐进入平台期（P〉0．05）。两药协同效应在作用24h时表现不明显,在48h后才开始出现（CDI〈1）。结论：在药物作用时间足够时,吉非替尼与顺铂联用对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应,可为临床应用提供参考。     

吉非替尼对A549细胞增殖及细胞周期、凋亡的作用

目的：观察吉非替尼对人非小细胞肺癌A549的生长增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法：用5—40μmol／L浓度范围内的吉非替尼和A549细胞共培养24、48、72h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测吉非替尼对细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡及细胞周期分布的影响;利用抗Capspase-3的ELISA（酶联免疫吸附）法检测是否发生细胞凋亡。结果：在5—40μmol／L浓度范围内,吉非替尼对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,以40μmol／L作用72h时的抑制率最高。流式细胞仪检测显示10μmol／L-401μmol／L的吉非替尼作用可使细胞发生G0／G,期阻滞,但即使作用48h也未发现凋亡细胞。ELISA法显示48h内,吉非替尼组与正常细胞组的Capspase-3浓度无统计学差异,但作用72h时出现凋亡。结论：吉非替尼在5—40μmol／L浓度下作用时间小于48h时,其对A549细胞的增殖抑制可能是通过阻滞A549细胞于G0／G1期而非引起细胞凋亡实现的,但作用时间达到72h时,其可以诱导A549发生细胞凋亡。