组织工程化骨修复四肢骨缺损的初步临床研究

目的探索以人自体骨髓基质干细胞(Human bone marrow stromal cells,hBMSCs)为种子细胞构建的组织工程骨用于修复四肢骨缺损的可行性。方法选择9例四肢骨缺损病例(良性骨肿瘤5例、骨缺损4例)。经病人髂前上嵴,穿刺抽取10mL骨髓,用密度梯度离心法分离得到hBMSCs,用成骨诱导培养液定向培养、扩增,应用第3代的hBMSCs与珊瑚复合,继续在体外培养1周后,手术植入骨缺损区。分别在术后2个月、6个月、12个月和24个月进行临床观察和X线检查。1例病人在二次手术时,在原骨缺损区取出少量新生组织活检,进行组织学观察(HE染色)。结果患者术后X线检查显示,组织工程骨在原位形成新骨,能较好地修复骨缺损。活检标本HE染色显示,局部形成正常松质骨组织。结论以自体hBMSCs为种子细胞,利用组织工程技术制成的自体组织工程骨可以修复四肢骨缺损,并且能够修复较大的骨缺损,但组织工程骨的临床成骨效果与植骨床血供密切相关,目前所使用的组织工程骨植骨方法具有一定的适应证。     

利用灌注式生物反应器体外构建大段组织工程化骨的实验研究

目的 研究体外利用灌注式生物反应器构建大段组织工程化骨的可行性. 方法把在体外培养扩增的第三代人骨髓基质干细胞与大段多孔β-磷酸三钙(β-TCP)支架复合.将细胞/支架复合体放入灌注式生物反应器中,进行连续灌注培养.28 d后,检测细胞的增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性,同时对培养后的细胞/支架复合体进行组织学检测及形态学计量,用以评价体外组织工程化骨的构建.以静态培养作为对照组. 结果培养28 d后,灌注培养组的细胞活性明显高于静态培养组.灌注培养组细胞的ALP活性显著高于静态培养组.静态培养组细胞仅在多孔β-TCP支架周缘增殖,形成的新骨量较少.灌注培养组细胞在整个β-TCP支架内增殖,形成的新骨量较多. 结论利用灌注式生物反应器的灌注培养,可以使人骨髓基质干细胞在大段β-TCP载体内增殖并形成新骨,使体外大段组织工程化骨的构建成为可能.     

组织工程骨修复节段性骨缺损的实验研究

目的 探讨用多孔β-磷酸三钙生物陶瓷（β-tricalcium phosphate,β-TCP）与自体骨髓问充质干细胞（autologous bone marrow mesenchymal stem cells,MSC）构建组织工程骨修复节段性骨缺损的效果。方法 在羊左跖骨中段形成21mm长的骨缺损,实验组植入组织工程骨;对照组单纯植入β-TCP;空白组骨缺损不作处理。术后1、3、6个月分批处死动物,缺损区行放射学、组织学、生物力学和扫描电镜等检测。空白对照组6个月取材。结果 实验组,骨缺损部位新生类骨样组织、编织骨和板状骨出现的时间都较对照组早,并且不经软骨介导即能直接成骨,而对照组以“爬行替代”方式修复骨缺损。放射学和生物力学检测显示术后6个月实验组骨缺损几乎完全修复,对照组部分修复,而空白组未愈合。结论 组织工程骨能加速骨缺损愈合的速度,其修复过程可超越“爬行替代”阶段;组织工程骨是治疗节段性骨缺损的一种较好选择方式。     

骨髓基质干细胞与生物衍生骨复合修复山羊胫骨缺损的影像学研究

目的探讨骨髓基质干细胞(MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨-骨膜缺损,以及修复负重骨缺损的可行性. 方法将18只12月龄健康杂种青山羊(雌雄不限),制备成双侧胫骨中段20 mm骨-骨膜缺损模型,常规钢板螺钉固定;MSCs与生物衍生骨于体外复合培养;对同一只山羊将复合物植入右侧胫骨缺损处作为实验组,以单纯材料植入左侧胫骨缺损处作为对照组,空白组不植入任何材料;在8、12、16和24周各时间点分别行标本的大体观察、X线片观察和骨密度测试,比较其修复骨缺损的能力. 结果大体观察、X线片和骨密度测试显示:实验组8周骨缺损部分修复,12、16周骨缺损完全修复,8、12和16周其骨密度较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05);24周实验组与对照组骨密度差异无统计学意义;空白组骨缺损未修复. 结论组织工程骨早期修复骨缺损能力较强,且较单纯材料成骨量大、迅速,能够对负重骨缺损进行有效的修复.     

组织工程骨联合外固定修复大鼠股骨节段性骨缺损

目的 观察以外固定器固定,骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 联合双相磷酸钙(BCP)修复大鼠股骨节段性骨缺损的效果.方法 A组:BMSCs与BCP复合植入缺损区;B组:BCP植入缺损区;C组:空白组.定期摄X线片,术后12周取材.结果 A组随时间延长X线评分递增,12周时平均为4.17分,B组为1.18分,C组为1.08分,差异有统计学意义(P<0.05).组织学检查见A组缺损区有大量的新生骨生成,而B、C组无新生骨生成.A组的抗压刚度和扭转刚度分别为(8.09±2.42)N/mm、(1.89±0.72)Nmm/deg;B组为(1.75±0.90)N/mm、(0.40±0.21)Nmm/deg,差异有统计学意义(P<0.05).结论 组织工程骨联合外固定可以修复节段性骨缺损.

Abstract：

Objective To evaluate the efficacy of bone mesenchymal stem cells (BMSCs) combined with biphasic calcium phosphate (BCP) repair of segmental bone defect, which was stabilized with an adaptable external fixation system.Methods In group A, the femoral defect was filled with BCP combined with BMSCs; In group B, the femoral defect was filled with BCP, and in group C, defects were left empty. Animals were sacrificed 12 weeks post-operation.Results In group A, radiographic scores were average 4.17, significantly (P<0.05) greater than in group B (1.18) and group C (1.08). Histological evaluations displayed the bridging of the defect in group A, with remarkable new bone formation. In contrast, group B and group C showed no formation of new bone. The mechanical testing revealed that axial stiffness was (8.09±2.42) N/mm and torsional stiffness was (1.89±0.72) Nmm/deg in group A, and those in group B were (1.75±0.90) N/mm and (0.40±0.21) Nmm/deg respectively. There was significant difference in biomechanical tests between group A and group B (P<0.05).Conclusion External fixator combined with tissue engineered bone can repair segmental bone defect.     

组织工程化骨修复下颌骨缺损(附3例报告)

目的探讨以人自体骨髓基质干细胞(hBMSC)作为种子细胞的组织工程化骨在治疗肿瘤术后下颌骨缺损的可行性。方法回顾性分析2005年1月至2005年12月收治3例组织工程骨修复颌面部肿瘤术后下颌骨缺损的临床资料。抽取人骼前上棘骨髓,分离出hBMSC,经体外诱导和扩增,将hBMSC与部分脱钙骨(30%～40%)复合,于体外培养1个月后,手术植入骨缺损区。分别于术后2周、3个月、2年进行PET-CT检查随访。结果 PET-CT示,术后3个月能形成组织工程化骨,并修复了骨组织缺损,临床治疗效果稳定。结论以自体hBMSC为种子细胞,利用组织工程技术可在人体内形成稳定的组织工程化骨组织,并能修复下颌骨缺损。     

适宜组织工程化骨构建的流体剪切力和物质转运速度的研究

目的 探讨适宜组织工程化骨构建的流体剪切力和物质转运速度.方法 对接种人骨髓间质干细胞的多孔β-磷酸三钙支架进行灌注培养.灌流量相同时,对支架上的细胞分别施加1×、2×及3×的流体剪切力;流体剪切力相同时,分别给予3ml/min、6 ml/min和9 ml/min的灌注.细胞增殖采用MTT法,通过检测碱性磷酸酶(alkalilinphosphatase,AKP)活性、骨桥蛋白(osteopontin,OP)、骨钙素(osteocalcin,OC)分泌及细胞外基质的矿化评价组织工程化骨的构建.通过计算流体动力学得出流体剪切力和物质转运速度.结果 灌流量相同时,剪切力2×组细胞增殖活性最高;2×和3×组AKP活性及OC分泌高于1×组;第28天时,3×组矿化基质最多.流体剪切力相同时,6 ml/min组AKP活性最高;第28天时,3 ml/min组OC分泌最高,矿化基质最多.灌流量相同时,流体剪切力分别为0.004～0.007 Pa、0.009～0.013 Pa和0.013～0.018 Pa;流体剪切力相同时,物质转运速度分别为0.267～0.384 mm/s、0.521～0.765mm/s和0.765～1.177 mm/s.结论 利用接种人骨髓间质干细胞的β-磷酸三钙支架构建组织工程化骨时,0.013～0.018 Pa的流体剪切力及0.267～0.384 mm/s的物质转运速度是适宜的.

Abstract：

Objective To explore the optimum flow shear stress and mass transport for the construction of tissue-engineered bone.Methods The β-tricalcium phosphate (β-TCP) scaffolds seeded with human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (HBMMSCs) were cultured in perfusion bioreactor.When the same flow rate was applied,the flow shear stress was separately 1×,2× and 3×.When the same flow shear stress was applied,the flow rates were separately 3 ml/min,6 ml/min and 9 ml/min.Cell proliferation was measured by MTT method.The construction of tissue-engineered bone was evaluated by measuring alkaline phosphatase (AKP) activity,secretion of osteopontin (OP) and osteocalcin (OC),and the mineralization of extracellular matrix (ECM).The flow shear stress and the mass transport were obtained using computational fluid dynamics.Results When the flow rate was same,the most cell proliferation was found in 2× group.The AKP activity and secretion of OC was higher in 2× and 3× groups than in those in 1× group.After 28days,the highest amount of mineralization of ECM was found in 3× group.When the flow shear stress was same,the AKP activity was highest in 6 ml/min group.After 28 days,secretion of OC and formation of mineralized ECM was highest in 3 ml/min group.When the flow rate was same,the flow shear stress was separately 0.004-0.007 Pa,0.009-0.013 Pa and 0.013-0.018 Pa.When the flow shear stress was same,the flow rate was separately 0.267-0.384 mm/s,0.521-0.765 mm/s and 0.765-1.177 mm/s.Conclusion When the tissue-engineered bone was constructed,0.013-0.018 Pa flow shear stress and 0.267-0.384 mm/s mass transport velocity could improve the construction of the tissue-engineered bone in vitro.     

组织工程化大段人工骨的成骨性能及修复机制

目的探讨基于快速成型技术(RP)的组织工程化人工骨修复长骨干缺损的成骨性能、修复效果及可能的修复机制。方法采用自行开发的气压式熔融沉积快速成形(AJS)系统制造仿生人工骨三维支架负型，填充复合重组人类骨形态发生蛋白的磷酸钙骨水泥。形成RPAI骨。移植到家犬桡骨25mm骨膜一骨缺损区，于术后第4、8、12和24周进行大体解剖观察、X线观察、苏木素-伊红染色及改良丽春红三色法染色组织学观察、扫描电镜、X线能谱分析。结果术后第4周可见新生编织骨；第8周可见大量巢状软骨细胞团及骨岛；第12周新生骨组织呈数个连续过渡的条带样分布区；第24周植入物与自体骨呈皮质骨融合。随植入时间延长。植入体中钙／磷比值趋向于自体皮质骨。结论RP人工骨具备骨缺损修复过程中组织再生所需的微结构及相应的生物学行为。     

自体骨髓基质干细胞组织工程骨修复颅骨缺损的临床研究

目的探讨人骨髓基质干细胞(hBMSCs)作为种子细胞的组织工程骨修复外伤后颅骨缺损的可行性。方法自2006年6月至2007年2月,共4例外伤后颅骨缺损患者,抽取患者骨髓,分离得到hBMSCs,体外扩增和成骨诱导后,将hBMSCs与部分脱钙骨复合,体外共培养1周后,手术植入颅骨缺损区。分别于术后1周和3个月、6个月进行临床和三维CT检查随访。结果术后1周,三维CT均显示骨缺损区被所植入的组织工程骨充填;术后3～6个月,CT显示组织工程骨形成并修复骨缺损,新生骨与骨缺损断端融合。高龄患者及骨缺损面积过大患者,组织工程骨体内成活率较差。结论通过选择适宜的病例,以自体hBMSCs作为种子细胞,运用组织工程技术可以在人体内形成稳定的组织工程骨并可用于修复颅骨缺损。     

组织工程化骨构建及其修复羊跖骨标准性骨缺损的放射学评估

目的: 从放射学角度探讨用多孔β 磷酸三钙和自体骨髓间充质干细胞 (MSC) 复合植入绵羊体内修复标准性骨缺损的效果。方法: 从羊髂嵴处抽取 10~15ml骨髓组织, 用Percoll分离液按梯度离心法分离出间充质干细胞, 培养、增殖后种植在多孔β 磷酸三钙上, 构建组织工程化骨, 植入 8只羊的左后肢跖骨缺损区 (21mm) 作为实验组: 单纯植入多孔β 磷酸三钙陶瓷材料的 8只羊作为对照组: 另取 3只羊在同样部位制造同样大小的骨缺损, 但不做处理, 作为空白对照组。分别在术后即刻及 1、3、6个月摄片观察, 用放射影像学评分和图像分析X线阻射影比较骨缺损的修复情况。空白对照组 6个月取材。结果: 实验组骨缺损放射影像学评分以及新生骨痂的密度在 1、3、6个月均优于对照组。空白组术后 6个月骨缺损均无愈合。结论: 多孔β 磷酸三钙和自体MSC复合植入羊体内, 可使大节段骨缺损较快修复; 放射学评分及骨缺损密度测量是一种简便易行的观察骨缺损修复情况的方法。     

Repair of bone defect with vascularized tissue engineered bone graft seeded with mesenchymal stem cells in rabbits

This study evaluated the results of repair of the radius defect with a vascularized tissue engineered bone graft composed by implanting mesenchymal stem cells (MSCs) and a vascular bundle into the xenogeneic deproteinized cancellous bone (XDCB) scaffold in a rabbit model. Sixty-four rabbits were used in the study. Among them, four rabbits were used as the MSCs donor. Other 57 rabbits were divided into five groups. In group one (n = 9), a 1.5 cm bone defect was created with no repair. In group two (n = 12), the bone defect was repaired by a XDCB graft alone. In group three (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft that included a vascular bundle. In group four (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft seeded with MSCs. In group five (n = 12), the defect was repaired by a XDCB graft including a vascular bundle and MSCs implantation. The rest three rabbits were used as the normal control for the biomechanical test. The results of X-ray and histology at postoperative intervals (4, 8, and 12 weeks) and biomechanical examinations at 12 weeks showed that combining MSCs and a vascular bundle implantation resulted in promoting vascularization and osteogenesis in the XDCB graft, and improving new bone formation and mechanical property in repair of radius defect with this tissue engineered bone graft. These findings suggested that the vascularized tissue engineered bone graft may be a valuable alternative for repair of large bone defect and deserves further investigations.     

组织工程化人工骨移植修复长骨干缺损的成骨研究

目的 研究仿生制备的组织工程化人工骨移植修复长骨干缺损的成骨性能、修复效果及可能的修复机制。方法 采用人工合成双相羟基磷灰石(HA／β-TCP)为支架材料，与聚-DL-乳酸(PDLLA)复合后再复合Ⅰ型胶原及重组合人类骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)，与兔骨膜成骨细胞及肾脏血管内皮细胞复合培养。将仿生制备的组织工程化人工骨移植到日本大耳白兔桡骨完全骨膜-骨缺损区，分别于术后第4、8、12周进行大体解剖观察、X线观察、HE染色及Masson三色法染色组织学观察、图像分析、扫描电镜、X线能谱分析，研究骨缺损的修复情况。结果 术后第4周可见新生板层骨；第8周植入物与自体骨呈皮质骨融合，有新骨髓长入；第12周植入物外周被新生皮质骨完全替代，组织学新生骨呈数个连续过渡的条带样分布区。新生骨定量4周组与8周组及12周组比较差异有显著性，8周组与12周组差异无显著性。随植入时间延长，植入体中钙／磷比值趋向于自体皮质骨。结论 仿生构建的组织工程化人工骨植入体内修复长骨干缺损，修复效果好，其骨再生机制为软骨内化骨。     

组织工程化骨修复胸壁缺损的实验研究

目的　探索利用组织工程化骨修复胸壁缺损的可行性。方法　实验借助组织工程的基本原理和方法 ,利用猪骨脱细胞基质作为可降解支架材料 ,同时体外扩增自体骨髓间质干细胞作为种子细胞 ,体外构建组织工程化骨组织修复实验用北格犬双侧胸壁各 5cm× 5cm缺损 ,同时在构建的组织工程化骨组织中设计“辅助灌流系统” ,定时注入DMEM培养液、BMP等细胞因子和自体骨髓间质干细胞 ,即保证组织工程化骨中细胞早期营养 ,又维持了局部成骨微环境 ,并同时保证了种子细胞来源。结果　 5只实验动物胸廓未见反常呼吸 ,病理切片证明局部骨组织形成 ;单纯材料对照组可降解支架材料基本吸收 ,伴纤维组织形成。结论　组织工程化骨具有良好的生物相容性 ,并具有一定的强度 ,可防止反常呼吸 ,是一种理想的胸壁缺损修复材料     

组织工程化人工神经修复长段神经缺损实验的初步报告

目的 研究组织化人工神经修复大鼠2．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 90只2个月月龄的Lewis1W雌性大鼠,按手术先后顺序随机分成3个神经移植组,每组30只。A组：用种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即组织工程化人工神经组。B组：用无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管桥接,即对照组。C组：自体神经移植组。术后6月,进行神经电生理监测,神经肌肉组织学观察;用S－100和神经微丝蛋白免疫组化染色后,行轴突计数等检测。结果 完成对21只大鼠（每组7只）的实验评估。从A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP）,再生轴突已通过移植段神经全长,远端肌肉轻度萎缩。B组中则没有或仅记录到波幅很低的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

磁共振灌注成像监测组织工程骨血管化的研究

目的探讨磁共振灌注成像在组织工程骨血管化监测中的应用价值。方法成年恒河猴体内制备胫骨20mm的骨缺损，随机分为5组，A组：／β-磷酸三钙（β-TCP）＋骨髓基质干细胞（BMSCs）＋血管束；B组：β-TCP＋血管束；C组：β-TCP＋BMSCs；D组：β-TCP；E组：空白对照。术后4、8、12周行磁共振灌注成像检查并计算信号强度-时间（SI—T）曲线的最大线性斜率（SSmax）和基线值（SIbascline），拍摄恒河猴胫骨x线片并计算其透光度。结果术后4、8、12周A组的SSk值最高，术后8周与4周相比SSmax有较大幅度的提高（P〈0．01）。术后12周A组5个样本的SSmax与X线片透光度呈负相关（r=-1．0，P〈0．01）。结论SI-T曲线的SSmax能准确反映组织工程骨的血管化情况，磁共振灌注成像检查具有无创、无辐射、高灵敏度和定量分析的优点。     

Repair of mandible defect with tissue engineering bone in rabbits

BACKGROUND: The aim of the present study was to investigate the effect of tissue engineering bone composed of bone marrow-derived osteoblasts and demineralized bone in repairing mandible defect. METHODS: Bone marrow-derived osteoblasts of 20 rabbits were cultured and seeded into scaffold of allogeneic demineralized bone to construct tissue engineering bone graft in vitro, which was used to repair the 10 x 5-mm bone defect made in the same rabbit mandible edge. Implant of demineralized bone alone was as the control. Rabbits were killed according to the schedule: five after 2 weeks, five after 4 weeks, five after 8 weeks, five after 12 weeks, and the implants were harvested for gross, radiographic, and histological observation. RESULTS: New bone formation at the margin region of defect and osteogenesis at the centre were observed in the implant of tissue engineering bone, and the bone formation pattern included osteogenesis, osteoconduction, and osteoinduction. In the implant of demineralized bone alone, the major bone formation pattern was 'creeping substitute'. CONCLUSIONS: The tissue engineering bone graft constructed by autogenous bone marrow-derived osteoblasts and allogeneic demineralized bone was better than demineralized bone alone in bone formation capability, which might be an ideal graft for bone defect repair.     

改进的组合腓骨移植修复负重长管骨缺损

目的 报道组合排骨移植修复长管负重骨缺损的临床治疗效果。方法 将组合腓骨移植方法改进如下：于吻合血管的双排骨或双节段腓骨前内侧骨膜从中央纵形切开剥离至骨嵴,双腓骨或双节段腓骨前内侧相对,两断端固定,将相对缘游离骨膜纵形缝 合,使其组合为一根粗骨修复骨缺损。结果 临床应用28例,结果所有长管负重骨缺损均获得良好愈合,移植骨无折断。结论 改进的组合 腓骨移植是修复长管负重骨缺损的良好方法。     

血管铸型方法检测组织工程骨修复羊胫骨缺损的远期血管化

目的采用血管铸型方法对组织工程技术修复中国青山羊胫骨大段骨缺损的远期血管化情况进行检测。方法中国青山羊3只，制备单侧胫骨20mm的骨与骨膜缺损，缺损部位内植入组织工程骨-珊瑚羟基磷灰石／骨髓基质干细胞（coral hydroxyapatite／bone marrow stem cells，CHAP／BMSCs）。术后3年分别行双侧后肢股动脉甲基丙烯酸甲酯血管铸型灌注，灌注后采用大体解剖、未脱钙骨片、扫描电镜等方法检测组织工程骨的远期血管化，并与健侧相同部位正常骨对照，观察其血管化效果。结果血管灌注后大体解剖观察示组织工程骨血管来源于周围软组织、髓腔血管及两端正常骨皮质。灌注后未脱钙骨磨片显示组织工程骨内微血管沿哈弗管和伏克曼管分布交织形成网状。采用图像分析仪比较组织工程骨与正常骨横切面磨片上血管相对面积，分别为（763．89±47．38）U／10万U与（788．00±65．83）U／10万U，差异无统计学意义（t=0．390，P〉0．05）。结论采用CHAP／BMSCs修复山羊胫骨大段骨缺损远期观察结果表明，新生骨远期血管化效果与正常骨无异，为组织工程骨下一步的临床应用提供可靠的依据。     

应用OsteoSet修复骨囊肿术后骨缺损

目的 观察OsteoSet颗粒在修复骨囊肿术后骨缺损中的临床疗效.方法 应用OsteoSet颗粒修复骨囊肿术后骨缺损21例,骨缺损范围为2.0 cm×2.1 cm×3.0 cm～4.1 cm×3.0 cm×6.2 cm.根据病变情况制定手术方案,合并有病理性骨折者术中应用内固定.结果 随访11～24(17.38 ±4.10)个月,骨愈合良好,愈合时间3～6个月,无复发及并发症.按Neer和Chigira的标准并结合X线评价骨囊肿愈合情况,21例骨囊腔完全愈合,均达到Ⅳ级.结论 应用OsteoSet颗粒修复骨囊肿术后骨缺损安全可靠,效果满意,是一种理想的骨移植替代物.     

组织工程化人工骨血管化研究

目的 比较三种促进组织工程化人工骨体内血管化方法的效果及研究血管化与成骨的相关关系。方法 将HA/β-TCP与PDLLA形成复合支架材料，再复合Ⅰ型胶原、rhBMP-2，与成骨细胞联合培养，仿生制备成组织工程化人工骨，采用包裹带血管蒂筋膜，复合血管内皮细胞或两者联合的促血管化手段。将人工骨修复兔桡骨干骨膜-骨完全缺损，手术后4、8、12周，观察移植物组织学，体视学方法观察血管化，成骨作用及其两者的关系。结果 3种方法均有促血管作用。其优劣依次为；材料包裹带血管蒂筋膜及复合血管内皮细胞大于材料单纯复合血管内皮细胞，后者又大于材料单纯包裹带血管蒂筋膜，术后4周为快速血管化阶段。4-8周间血管化有平缓发展，12周完全血管化，血管化与新骨生成数量成正相关。结论 促血管化手术对组织工程化人工骨移植修复骨缺损的效果起重要促进作用。