维甲酸对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的影响

目的探讨维甲酸对人骨肉瘤（HOS）细胞抑制增殖和诱导分化的影响。方法不同浓度的维甲酸作用HOS细胞,采用噻唑蓝法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化。结果维甲酸可明显抑制HOS细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化,瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;维甲酸能够延缓细胞周期G1～S进程,阻滞细胞于G1期。细胞周期测定结果显示：未经诱导物处理的对照组细胞处于G0/G1期的细胞比例为31.19%;经维甲酸处理之后,实验组细胞G0/G1期的细胞比例上升为57.94%。结论维甲酸对HOS细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用。     

腺相关病毒载体介导p27Kip1基因转染骨肉瘤MG-63细胞的研究

目的 观察p27Kip1基因转染后对骨肉瘤MG-63细胞增殖和生存能力的影响.方法 重组质粒在内的三质粒共转染包装、收集腺相关病毒颗粒,检测病毒滴度并感染MG-63细胞,细胞免疫组织化学检测p27Kip1基因的表达,并行细胞增殖实验、细胞周期分析,探讨p27Kip1基因对骨肉瘤MG-63细胞的体外作用.结果 三质粒成功共转染293细胞,X-gal染色观察转染率为60%;采用CPE法(微量全细胞病变法)检测病毒滴度1.6×108 PFU/ml;细胞免疫细胞化学鉴定p27Kip1基因高表达;细胞生长曲线显示转染组细胞增殖明显减慢;流式细胞仪观察转染AAV-p27Kip1组细胞周期见S、G2期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例增高.结论 p27Kip1基因重组腺相关病毒感染骨肉瘤MG-63细胞后能高表达目的 基因,并阻滞细胞于G1/S期,从而显著抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖.     

Notch1 siRNA对乏氧环境骨肉瘤细胞MG-63增殖及周期的影响

[目的]探讨Notch1 siRNA对乏氧环境人骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和周期的影响。[方法]将骨肉瘤细胞株MG-63细胞置于乏氧(37℃、1%O2、5%CO2)环境下培养作为实验组,以正常氧环境(37℃、21%O2、5%CO2)下培养作为对照组,培养72 h,应用MTT方法检测不同时间乏氧培养对MG-63细胞增殖的影响;采用Notch siRNA转染乏氧环境中的MG-63细胞,MTT方法检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blot检测细胞HIF-1a、Notch1蛋白表达变化。[结果]乏氧培养可促进MG-63细胞增殖,48 h常氧及乏氧对细胞增殖的作用可见明显差异(2.164±0.075 vs 1.421±0.086)(P<0.01)。流式细胞分析显示实验组、对照组MG-63细胞培养48 h G1/G2期细胞比例分别为(41.79±3.25)%和(53.87±2.31)%(P<0.05),乏氧可以促进细胞周期进展,Notch1 siRNA有效下调乏氧MG-63细胞Notch1蛋白表达,Notchl siRNA作用48 h后乏氧环境MG-63细胞周期阻滞于G1/G2期。Western-blot结果显示乏氧环境下MG-63细胞HIF-1a、Notch1蛋白表达增高。[结论]乏氧环境能通过促进MG-63细胞周期进展,从而明显促进细胞增殖,阻断Notch可逆转乏氧对MG-63细胞促增殖作用,提示Notchl是治疗骨肉瘤的有效分子靶点。     

藤黄酸联合顺铂对人骨肉瘤细胞作用的实验研究

[目的]本实验主要研究藤黄酸(gambogic acid,GA)在骨肉瘤中的抗肿瘤作用,检验藤黄酸与传统的骨肉瘤化疗药物顺铂(cisplatin,CDDP)联用是否具有协同作用,探讨其作用的机制。[方法]采用CCK-8法测定不同浓度藤黄酸、顺铂单用及联合应用对人骨肉瘤细胞MG-63的增殖抑制作用,PI染色流式细胞术检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡变化。[结果]藤黄酸对MG-63具有明显生长抑制作用,且具有浓度依赖性,IC 25为0.52μg/ml,藤黄酸诱导MG-63细胞产生G2/M期细胞周期阻滞和凋亡,而顺铂则诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞和凋亡。藤黄酸与顺铂联用时增殖抑制及诱导凋亡作用比单用时明显增强。[结论]藤黄酸通过诱导MG-63细胞周期阻滞和凋亡产生抗人骨肉瘤细胞增殖作用,藤黄酸与顺铂联用具有协同作用。     

反义c-myc寡核苷酸对骨肉瘤细胞(MG-63)凋亡的影响

[目的]研究反义c-myc寡核苷酸(c-mycASODN)对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响。[方法]设计c-mycASODN片段,将其转入人骨肉瘤MG-63细胞,通过HE染色光镜观察、透射电镜超微结构及流式细胞仪(FCM)分析,观察和分析其对瘤细胞凋亡、细胞周期及c-myc基因蛋白表达的影响。[结果]形态学观察到典型瘤细胞凋亡特征;流式细胞仪分析证实反义c-myc寡核苷酸主要阻止瘤细胞从G1期进入S期,即产生G1/S期阻滞,出现明显的凋亡峰,凋亡率达36.82%,并可抑制c-myc基因蛋白的表达。[结论]反义c-myc寡核苷酸可明显诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。     

阻断转化生长因子β1自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响

[目的]观察阻断转化生长因子β1(TGFβ1)自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响。[方法]将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63,G418筛选14d后获得转染细胞系MG-TGFβ1(-)。取MTT法检测转染细胞增殖活性,并观察细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。[结果]与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,MG-TGFβ1(-)细胞增殖活性明显受到抑制。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数(28·2±5·6)比MG-63组(48·6±8·1)和MG-pcDNA3组(45·2±4·7)明显减少,裸鼠体内形成肿瘤的体积(83·4±27·4)mm3也明显小于MG-63组(191·3±21·5)mm3和MG-pcDNA3组(204·2±30·7)mm3。[结论]反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型,进一步的研究将有助于提高骨肉瘤的治疗效果。     

曲古菌素A对结肠癌Lovo细胞增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）对结肠癌Lovo细胞增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理结肠癌Lovo细胞。MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:TSA在500ng/mL浓度以上才能明显抑制结肠癌Lovo细胞的增殖，抑制率由第2天至第5天显著增加（57.21%至82.76%）细胞周期检测发现20ng/mL TSA即可导致细胞G1期阻滞，但没有诱导明显的细胞凋亡;≥100ng/mL TSA可诱导明显的细胞凋亡。结论:TSA可以抑制体外结肠癌Lovo细胞的生长，可能通过细胞周期G1期阻滞及诱导细胞凋亡发挥抑癌作用。TSA可能是结肠癌治疗的潜在靶点。     

RASSF1A基因表达对人肝癌细胞株QGY-7703生长的影响

目的观察RASSFlA基因的表达对人肝癌细胞株QGY-7703在体内外生长的影响。方法利用已构建成功的稳定表达RASSFlA基因的肝癌细胞株QGY-7703，通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、细胞周期的测定和裸鼠致瘤性试验对各稳定表达株的生物学行为进行检测。结果以未转染的QGY-7703为对照，RASSFlA基因的表达可明显抑制肝癌细胞在体外的生长速度，使肝癌细胞周期阻滞在G1／S期，显著降低肝癌细胞在软琼脂中形成的克隆数目（P〈0．01）和大小，显著减慢裸鼠皮下瘤的生长速度和重量（P〈0．01）。空载体的表达对肝癌细胞的生长影响不明显。结论RASSFlA的重表达抑制肝癌细胞在体内外的生长；RASSFlA基因是一个新的肝癌相关的抑癌基因。     

caveolin-1通过阻断PI3K/Akt信号的激活抑制胰腺癌细胞增殖

目的研究caveolin-1对胰腺癌Panc1细胞在体外生长和增殖的影响,并初步探讨其机理。方法选用人类胰腺癌Panc1细胞,通过基因转染技术培育过表达caveolin-1细胞株Panc1/cav-1作为实验组,空载体细胞株Panc1/vec和亲本细胞株Panc1作为对照组。Western blot方法检测各组细胞内caveolin-1、Akt和p-Akt的表达,绘制细胞生长曲线并计算细胞倍增时间,流式细胞仪分析细胞周期,软琼脂集落形成实验检测细胞增殖克隆的能力。结果①caveolin-1在实验组细胞中稳定表达,其表达量明显高于对照组细胞(P<0.01),而对照组的Panc1/vec细胞和Panc1细胞之间差异无统计学意义(P>0.05)。②实验组细胞的生长速度明显慢于对照组细胞(P<0.05),其倍增时间明显长于对照组细胞(P<0.01)。③细胞周期显示,实验组细胞被抑制于G0/G1期(P<0.05),进入S期的细胞比率明显减少(P<0.01),实验组细胞的增殖指数较对照组明显降低(P<0.01)。④实验组细胞在软琼脂中形成的集落数目较对照组明显减少(P<0.01),体积较小。⑤实验组细胞中Akt表达量与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),而实验组细胞中p-Akt表达量明显低于对照组(P<0.05)。结论 caveo-lin-1通过抑制PI3K/Akt信号激活抑制Panc1细胞生长和增殖。     

新型钌(Ⅱ)配合物抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其凋亡

目的 通过体外实验探讨新型钌(Ⅱ)多吡啶配合物△-[Ru(phen)2MCMIP]2+(△-1)对人骨肉瘤细胞MG-63株增殖及凋亡作用. 方法 CCK-8法检测经0.00、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00 μmol/L△-1作用24、48、72 h后,MG-63细胞的增殖情况;流式细胞术检测经0.00、25.00、50.00、100.00 μmol/L△-1作用24h后,MG-63细胞的凋亡及周期变化. 结果 △-1可明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并呈明显剂量和时间依赖性;24、48、72 h IC5o分别为57.80 μmol/L、45.27 μmol/L、32.51 μmol/L;流式细胞术检测得不同浓度△-1作用24h后,细胞早期凋亡比例从(1.06±0.12)％上升至(37.10±1.25)％,细胞周期被阻滞在Go/G1期. 结论 △-1能抑制MG-63细胞增殖,诱导细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在Go/G1期.